吳 成*， 趙志強(qiáng)

(山東省農(nóng)業(yè)環(huán)境保護(hù)和農(nóng)村能源總站，山東濟(jì)南 250100)

甲拌磷屬高毒農(nóng)藥。我國(guó)食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB2763-2014)規(guī)定甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜之和為甲拌磷殘留，蔬菜中最大殘留限量為0.01 mg/kg[1]。國(guó)標(biāo)法(GB/T19648-2006)包括甲拌磷和甲拌磷砜，不包括甲拌磷亞砜[2]。當(dāng)前甲拌磷檢測(cè)主要方法有：熒光光度法[3]、氣相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法[2,4]和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[5]、液相色譜法[6]和液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(LC/MS/MS)[7]等；甲拌磷砜檢測(cè)方法有氣相色譜-質(zhì)譜法[2,4]和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[5]。芹菜是生產(chǎn)用藥殘留問題較多的蔬菜，本文用LC/MS/MS開展芹菜中甲拌磷及其代謝物殘留檢測(cè)的研究，建立了甲拌磷及其代謝物殘留的快速確證檢測(cè)方法。該法操作簡(jiǎn)單、快速、靈敏，精密度和回收率較好，適合芹菜中甲拌磷及其代謝物殘留的確證和定量測(cè)定。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 主要儀器與試劑

LCMS-8040液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(日本,島津公司)，配電噴霧離子源(ESI)；LDZ5-2離心機(jī)(北京京立離心機(jī)公司)；k600食品加工機(jī)(荷蘭,Philips公司)；IKA T18均質(zhì)器(德國(guó),IKA公司)。

甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 000 mg/L，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所)。用甲醇稀釋甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜標(biāo)準(zhǔn)溶液成100 mg/L單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于-20.0 ℃冰箱中保存，使用時(shí)用甲醇-水(1+1)溶液稀釋配制標(biāo)準(zhǔn)工作液。乙腈和甲醇(色譜純，德國(guó)Merck公司)，甲酸、乙酸銨和氯化鈉(分析純，上?；瘜W(xué)試劑有限公司)。實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜條件

色譜柱：Waters symmetry C18柱(150×3.9 mm,5 μm)；柱溫：40 ℃；流動(dòng)相：甲醇-0.1%甲酸水溶液(含5 mmol/L乙酸銨)(體積比75∶25)；流速：0.4 mL/min；等度洗脫；進(jìn)樣量：1 μL；信號(hào)采集時(shí)長(zhǎng)：10.0 min。電噴霧正離子源(ESI+)，接口電壓：4.5 kV；電噴霧負(fù)離子源(ESI-)，接口電壓：-3.5 kV；霧化氣：3.0 L/min氮?dú)?；干燥氣?5.0 L/min氮?dú)?；碰撞氣：氬氣；脫溶劑管溫度?50 ℃；加熱模塊溫度：400 ℃；掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)；駐留時(shí)間：20 ms；延遲時(shí)間：3 ms；各監(jiān)測(cè)離子對(duì)的質(zhì)譜參數(shù)見表1。

表1 LC/MS/MS測(cè)定甲拌磷及其代謝物的部分參數(shù)

Note："*"referred to the qualitative ions."Q1" and "Q3" indicated the bias voltage in the pre rods of front and rear quadrupole of collision cell,respectively.“CE” meant collision cell voltage.“Relative intensity” referred to the signal intensity ratio of qualitative ion to quantitative ion.

1.4 樣品前處理

按國(guó)標(biāo)(GB/T 8855-2008)方法抽取芹菜樣品，取可食部分[8]，縮分、切碎、混勻，放入食品加工機(jī)粉碎，制成待測(cè)樣，置于-20.0 ℃冰箱中保存。稱取樣品15.0 g于50 mL具塞離心管，加30.0 mL乙腈，用均質(zhì)器以12 000 r/min均質(zhì)2 min，加5.0 g NaCl，劇烈震搖2 min，以5 000 r/min離心5 min，取上清液10.0 mL于100 mL燒杯中，60 ℃水浴氮吹至干，用1.0 mL甲醇-水(1+1)溶液溶解殘?jiān)?，過0.22 μm尼龍膜，濾液待測(cè)。分別用氣相色譜-質(zhì)譜法[2]和本實(shí)驗(yàn)方法對(duì)購(gòu)自市場(chǎng)的芹菜進(jìn)行檢測(cè)，選擇不含甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜干擾的空白樣作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。

2 結(jié)果與討論

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

分別采用ESI+和ESI-對(duì)甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜進(jìn)行母離子掃描。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：ESI+模式下，甲拌磷和甲拌磷亞砜的加氫峰離子([M+H]+)和甲拌磷砜的加銨峰離子([M+NH4]+)信號(hào)均較強(qiáng)且穩(wěn)定，以相應(yīng)離子作母離子，利用島津LCMS-8040 Optimizer軟件對(duì)甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜的子離子(Daughter ion)、四極桿預(yù)桿偏置電壓(Q1和Q3)、碰撞池電壓(CE)等參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，優(yōu)化結(jié)果見表1。用優(yōu)化的色譜質(zhì)譜條件，在MRM模式下，進(jìn)0.1 mg/L甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜混標(biāo)1.0 μL，得總離子流圖(TIC)見圖1。依據(jù)歐盟2002/657文件規(guī)定的質(zhì)譜技術(shù)中相對(duì)離子強(qiáng)度的最大允許限度范圍，結(jié)合樣品色譜峰保留時(shí)間和扣背景質(zhì)譜圖，可確證樣品中甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜的存在。

2.2 線性范圍和檢出限

用芹菜空白基質(zhì)液將甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配制成 0.01、0.02、0.04、0.06、0.08 和 0.1 mg/L系列標(biāo)準(zhǔn)工作液，以峰面積(y)對(duì)質(zhì)量濃度(x,mg/L)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，以3倍和10倍信噪比(S/N)計(jì)算方法檢出限和定量限。其回歸方程、線性范圍及檢出限等見表2。本方法檢測(cè)靈敏度符合國(guó)標(biāo)(GB2763-2014)對(duì)芹菜甲拌磷殘留檢測(cè)方法的要求。

表2 甲拌磷及其代謝物的線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限及定量限

2.3 準(zhǔn)確度和精密度

在芹菜空白樣品中添加甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜 5、50、100 μg/kg三個(gè)水平，進(jìn)行回收率試驗(yàn)，用芹菜空白基質(zhì)配制上機(jī)標(biāo)準(zhǔn)溶液，外標(biāo)法定量，每個(gè)水平重復(fù)6次。結(jié)果見表3。

表3 甲拌磷及其代謝物在芹菜中的添加回收率(n=6)

3 結(jié)論

本文以乙腈作提取劑，采用液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法成功地建立了芹菜中甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜殘留的快速檢測(cè)方法。該方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高，確證性和實(shí)用性強(qiáng)，可作為芹菜中甲拌磷、甲拌磷亞砜和甲拌磷砜殘留的確證定性和定量檢測(cè)。