馮海青，鄒君（荊州市食品藥品檢驗(yàn)所，湖北荊州434000）

HPLC-RI法同時(shí)測(cè)定食品中5種糖的含量

馮海青，鄒君
（荊州市食品藥品檢驗(yàn)所，湖北荊州434000）

建立HPLC-RI法同時(shí)測(cè)定食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的含量。采用Inertsil NH2色譜柱（5 μm，4.6 mm×250 mm），乙腈∶水（80∶20，體積比）為流動(dòng)相，流速1.0 mL/min，柱溫30℃。果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的線性范圍分別是3.9116μg～156.4655μg（r=0.9996）、3.1887μg～127.5491μg（r=0.9996）、2.6983μg～107.9337μg（r=0.9991）、4.290 9 μg～171.635 4 μg（r=0.999 8）、3.730 9 μg～149.237 7 μg（r=0.999 6）；平均加樣回收率分別為98.6%、98.4%、97.8%、97.8%、99.2%，RSD分別為1.28%、1.70%、1.63%、1.55%、1.81%。

HPLC-RI；總糖；果糖；葡萄糖；蔗糖；麥芽糖；乳糖

糖類化合物是自然界中為人體提供能量的最主要營(yíng)養(yǎng)素，也是大部分食品的主要成分之一。實(shí)際工作中發(fā)現(xiàn)絕大多數(shù)食品中主要含果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖這5種糖。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 5009.7-2008《食品中還原糖的測(cè)定》、GB/T 5009.8-2008《食品中蔗糖的測(cè)定》和GB/T 20977-2007《糕點(diǎn)通則》中規(guī)定了食品中還原糖、蔗糖和總糖的檢測(cè)方法［1-3］，均采用的化學(xué)滴定的方法，該方法樣品預(yù)處理過(guò)程長(zhǎng)，分析時(shí)間長(zhǎng)，檢測(cè)效率低。而食品中糖的含量是一樣重要指標(biāo)，化學(xué)滴定法的檢測(cè)結(jié)果受水解溫度、水解時(shí)間、滴定溫度和滴定速度等多因素的影響［4］，并且化學(xué)滴定法無(wú)法滿足快速檢測(cè)大批量樣品的要求，影響檢測(cè)時(shí)效性，因此在參考GB/T 18932.22-2003《蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的測(cè)定方法液相色譜示差折光檢測(cè)法》和GB/T 20882-2007《果葡糖漿》的基礎(chǔ)上采用HPLC-RI同時(shí)測(cè)定食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖這5種糖的含量［5-6］。新建立的檢測(cè)方法快速、簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確。

1　儀器與試劑

DIONEX P680 ASI-100高效液相色譜（包括P680泵、Shodex RI-101示差折光檢測(cè)器、ASI-100自動(dòng)進(jìn)樣器、Chromeleon液相色譜工作站）：戴安公司；METTLER AB265-S電子天平：瑞士METTLER TOLEDO公司。

標(biāo)準(zhǔn)品葡萄糖（批號(hào)110833-201205）、果糖（批號(hào)100231-201305）、蔗糖（批號(hào)111507-201303）、麥芽糖（批號(hào)100287-201303）、乳糖（批號(hào)100058-201204）：均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；乙腈：色譜純；水：超純水；其余試劑均為分析純。

樣品共計(jì)12批，均來(lái)自荊州市食品藥品檢驗(yàn)所日常檢驗(yàn)之樣品。

2　方法

2.1混合對(duì)照品溶液的制備

精密稱取上述對(duì)照品適量至10mL容量瓶中加6mL水溶解后用乙腈定容至刻度，搖勻，得混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液（果糖10.431 0 mg/mL、葡萄糖8.503 3 mg/mL、蔗糖7.195 6 mg/mL、麥芽糖11.442 4 mg/mL、乳糖9.949 2 mg/ mL），然后分別將標(biāo)準(zhǔn)品溶液稀釋2、5、10、20、40倍得到不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

先將樣品粉碎后取樣約5.0 g，精密稱定，加適量水超聲溶解后置100 mL容量瓶中加乙腈定容至刻度，過(guò)濾，濾液過(guò)0.45 μm濾膜。

2.3色譜條件

色譜柱：InertsilNH2色譜柱（5μm，4.6mm×250mm）；流動(dòng)相∶乙腈-水（80∶20，體積比）；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)器：Shodex RI-101示差折光檢測(cè)器（檢測(cè)池溫度：45℃）；柱溫：30℃；進(jìn)樣量15 μL。

2.4線性關(guān)系考察

吸取上述不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按照“2.3”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。以濃度為縱坐標(biāo)，峰面積為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。

2.5精密度試驗(yàn)

取“2.1”項(xiàng)下的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液，以“2.3”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定5次。

存在句按照語(yǔ)義層面來(lái)進(jìn)行分類，基本上可以劃分為時(shí)間類、空間類和時(shí)空混合類；再出現(xiàn)頻率上來(lái)看，空間類存現(xiàn)句出現(xiàn)的次數(shù)最多，而時(shí)間類或時(shí)空混合類存現(xiàn)句出現(xiàn)的頻率相對(duì)較低。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批樣品，按照“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，以“2.3”項(xiàng)下色譜條件，分別于制備后0、2、4、6、12、24 h進(jìn)樣檢測(cè)各成分的峰面積。

2.7重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品6份，按照“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，以“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定。

2.8加樣回收試驗(yàn)

取“2.6”項(xiàng)已測(cè)知含量的同一批樣品5份，每份精密加入已知濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液5 mL，按照“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，以“2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算回收率。

2.9樣品含量測(cè)定

取本所日常檢驗(yàn)的樣品12批分別用化學(xué)滴定法和HPLC法測(cè)定樣品中總糖含量，最終結(jié)果都以葡萄糖計(jì)。

3　結(jié)果與討論

3.1混合對(duì)照品溶液色譜圖測(cè)定

取“2.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液，按“2.3”項(xiàng)下色譜條件試驗(yàn)，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1混合對(duì)照品的HPLC色譜圖Fig.1　HPLC chromatograms of mixed reference substances

3.2線性關(guān)系考察

線性關(guān)系考察結(jié)果見(jiàn)表1。

表1　各被測(cè)成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程、相關(guān)系數(shù)和線性范圍Table 1 Regressive equations,correlation coefficients,and linear ranges of the investigated components

3.3精密度試驗(yàn)

精密度試驗(yàn)結(jié)果，果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖含量RSD值依次為0.47%、0.66%、0.63%、0.45%、0.10%。

3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)

穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果，果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖峰面積24 h內(nèi)的RSD（n=6）分別為0.58%、1.27%、0.94%、0.70%、0.73%，表明樣品中各成分在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.5重復(fù)性試驗(yàn)

重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果，果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖含量RSD值依次為1.09%、1.24%、1.03%、0.93%、1.19%。

3.6加樣回收試驗(yàn)

加樣回收試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

3.7樣品含量測(cè)定

樣品含量測(cè)定，經(jīng)配對(duì)t檢驗(yàn)，P≥0.05，兩種方法檢測(cè)結(jié)果無(wú)顯著性差別，結(jié)果見(jiàn)表3。

表2　各成分的加樣回收率結(jié)果Table 2　The recovery of standard addition of the components

表3　12批樣品兩種不同檢測(cè)方法結(jié)果對(duì)比（X±S，n=12，%）Table 3　The detect resulst obtained by two methods（X±S，n= 12，%）

4　結(jié)論

在大量的實(shí)際檢驗(yàn)工作中發(fā)現(xiàn)絕大多數(shù)食品中都是含果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖中的一種或多種糖，所以選擇這5種糖作為檢測(cè)指標(biāo)。綜合考慮實(shí)際檢測(cè)結(jié)果的分離度、儀器的性噪比以及實(shí)際工作所測(cè)得的樣品的糖含量而最終確定該方法的色譜條件和線性范圍。特別指出的是在檢測(cè)含糖量高的樣品時(shí)應(yīng)減少取樣量或增加樣品溶解時(shí)的水的量以使樣品中得糖能充分溶出。若樣品全部用水溶解則會(huì)影響各成分峰形和分離度，而樣品溶劑中加入適量乙腈可以改善。

本文分別采用化學(xué)滴定法和HPLC法對(duì)本所12批樣品總糖含量進(jìn)行對(duì)比檢測(cè)，結(jié)果顯示兩種方法的檢驗(yàn)結(jié)果無(wú)顯著差別，同樣HPLC法也適用用于食品中還原糖和蔗糖等指標(biāo)的測(cè)定。新建立的檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、快速、重復(fù)性好，更適用于日常檢驗(yàn)工作，并且還能同時(shí)測(cè)定五種糖的含量，對(duì)生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品的質(zhì)量控制具有指導(dǎo)意義。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 5009.7-2008食品中還原糖的測(cè)定［S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009

［2］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 5009.8-2008食品中蔗糖的測(cè)定 ［S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2009

［3］中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 20977-2007糕點(diǎn)通則［S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007

［4］孫淑玲，劉坤，楊新濤.食品中總糖測(cè)定的方法與評(píng)價(jià)［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2013，23（13）：2852-2853

［5］中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.GB/T 18932.22-2003蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的測(cè)定方法液相色譜示差折光檢測(cè)法［S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2004

［6］中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 20882-2007果葡糖漿［S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007

Simultaneous Determination of Five Kinds of Sugars in Food by HPLC-RI

FENG Hai-qing，ZOU Jun
（Jingzhou Institute for Food and Drug Control，Jingzhou 434000，Hubei，China）

A HPLC method for simultaneous determination of five components including fructose，glucose，sucrose，maltose，lactose in food was established.The chromatographic separation was achieved on a Inertsil NH2 colum（5μm，4.6 mm×250mm）and the column temperature was 30℃.The mobile phase was consisted of acetonitrile-water（80：20），the flow rate was 1.0 mL/min.The linear range of fructose，glucose，sucrose，maltose，lactose，were 3.911 6 μg-156.465 5 μg（r=0.999 6），3.188 7 μg-127.549 1 μg（r=0.999 6），2.698 3 μg-107.933 7 μg（r=0.999 1），4.290 9 μg-171.635 4 μg（r=0.999 8），3.730 9 μg-149.237 7 μg（r=0.999 6）.The average recoveries were 98.6%（RSD=1.28%），98.4%（RSD=1.70%），97.8%（RSD=1.63%），97.8%（RSD= 1.55%），99.2%（RSD=1.81%），respectively.

HPLC-RI；total sugar；fructose；glucose；sucrose；maltose；lactose

2015-09-05

馮海青（1980—），男（漢），主管藥師，學(xué)士/本科，研究方向：食品藥品檢驗(yàn)技術(shù)。