姜　楊　高恒宇　劉　丹　郭林娜齊齊哈爾醫(yī)學院解剖教研室，黑龍江齊齊哈爾 161001

Podop lanin在肝細胞癌組織中的表達及與淋巴管轉(zhuǎn)移的關(guān)系

姜楊高恒宇劉丹郭林娜
齊齊哈爾醫(yī)學院解剖教研室，黑龍江齊齊哈爾 161001

目的 探討Podoplanin在肝細胞癌組織中的表達及與淋巴管轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法 選取2003年1月～2014 年1月在大慶油田總醫(yī)院和齊齊哈爾醫(yī)學院病理中心手術(shù)切除并病理證明為肝細胞癌的標本存檔蠟塊53例為研究對象，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移35例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例。其中肝細胞癌組織35例，癌旁組織35例，另選正常肝組織9例，采用免疫組化檢測Podoplanin的陽性表達，觀察Podoplanin在肝細胞癌組織、癌旁組織、正常肝組織中的表達情況，分析Podoplanin的陽性表達與肝細胞癌淋巴管轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果Podoplanin在肝細胞癌組織中高表達，在正常肝組織中低表達（P＜0.05）。Podoplanin陽性表達在肝細胞癌淋巴管轉(zhuǎn)移中明顯高于無淋巴管轉(zhuǎn)移（P＜0.05）。結(jié)論Podoplanin在肝細胞癌中高表達可能與淋巴管生成和淋巴管轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

肝細胞癌；Podoplanin；淋巴管

肝細胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是一種人類最常見的五大惡性腫瘤之一，全世界范圍內(nèi)排名第五位，在腫瘤相關(guān)疾病的致死原因中排名第三位［1-6］。目前，HCC的治療手段主要是手術(shù)、介入治療、化療等，但效果都不是很理想。因此，尋找新的診斷和治療靶點是目前HCC研究的熱點之一。

Podoplanin作為特異的淋巴管內(nèi)皮標志物，被廣泛地應用于探討淋巴管密度/淋巴管面積與癌癥患者術(shù)后生存及預后之間的關(guān)系等方面研究［7-9］，作為一種腫瘤新生淋巴管的測定標志已被廣泛應用［10-11］，但Podoplanin在HCC組織內(nèi)的表達及與HCC惡性程度關(guān)系的報道很少。本研究主要檢測Podoplanin在HCC組織內(nèi)的表達情況，探討其表達與HCC惡性程度的關(guān)系，同時檢測其在淋巴管轉(zhuǎn)移及未轉(zhuǎn)移中的表達情況，明確其與淋巴管轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1　材料與方法

1.1材料

選取2003年1月～2014年1月在大慶油田總醫(yī)院和齊齊哈爾醫(yī)學院病理中心手術(shù)切除并病理證明為HCC的標本存檔蠟塊53例，其中男36例，女17例；有淋巴管轉(zhuǎn)移35例，無淋巴管轉(zhuǎn)移18例。其中35例HCC組織及癌旁組織，另選取9例正常肝組織進行免疫組化檢測。Podoplanin人抗兔單克隆抗體購自Proteintech公司；二抗、濃縮型DAB試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.2方法

1.2.1SP法免疫組化染色取4μm的組織切片，鋪片，于60℃烤片機上烘烤過夜。梯度酒精脫水，磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗5min×3次。0.3%過氧化氫37℃恒溫箱中孵育30 min，以阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。PBS沖洗5min×3次，0.01%檸檬酸鹽緩沖液抗原修復，高壓2min，冷卻至室溫。PBS沖洗5min×3次，滴加一抗Podoplanin 4℃過夜。PBS沖洗5min×3次，滴加二抗，室溫孵育30min。PBS沖洗5min×3次，DAB顯色，蘇木精復染、封片，光鏡觀察。PBS代替一抗作為陰性對照。

1.2.2結(jié)果判斷在顯微鏡下觀察切片，陽性為棕黃色顆粒，記錄陽性細胞數(shù)量：①陽性細胞數(shù)＜10%為陰性；②10%≤陽性細胞數(shù)＜25%或多數(shù)陽性細胞顯色較弱為弱陽性；③強陽性細胞數(shù)占25%～75%為陽性；④強陽性細胞數(shù)＞75%為強陽性。

1.3統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析和處理，計數(shù)資料采用秩和檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1免疫組化檢測Podoplanin在3種肝組織中的表達

免疫組化檢測結(jié)果顯示，HCC組織及癌旁組織、正常肝組織中均檢測到Podoplanin的表達，表現(xiàn)為位于細胞膜內(nèi)的棕黃色顆粒（圖1），分別為強陽性、弱陽性；在HCC組織中，可見淋巴管和毛細淋巴管內(nèi)皮細胞的細胞膜上被Podoplanin染色呈棕黃色，染色陽性的淋巴管集中于癌組織周邊區(qū)及匯管區(qū)。Podoplanin在HCC組織、癌旁組織、正常肝組織中的陽性表達率分別為85.71%、77.14%、33.33%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表1。

2.2Podoplanin陽性表達與淋巴管轉(zhuǎn)移的關(guān)系

Podoplanin陽性表達率在有淋巴管轉(zhuǎn)移的HCC組織中為68.57%，在無淋巴管轉(zhuǎn)移的HCC組織中為22.22%，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表2。

圖1　Podoplanin在3種肝組織中的表達（SP染色,100×）

表1　Podoplanin在3種肝組織中的陽性表達情況比較（例）

表2　Podoplanin陽性表達與淋巴管轉(zhuǎn)移的關(guān)系（例）

3　討論

HCC若不進行任何治療，5年生存率為0%～10%［12-13］。研究表明，腫瘤的發(fā)生同癌基因的激活和抑癌基因的失活引起細胞增殖失控、凋亡受阻，分化異常等密切相關(guān)［14］。因此，本研究探討肝癌發(fā)生的分子生物學機制。

Podoplanin是特異的淋巴管標志物，主要表達于淋巴管的內(nèi)腔，而在血管內(nèi)皮沒有表達［9］。許多實驗證明，Podoplanin表達與腫瘤淋巴管轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［15-16］。研究表明，Podoplanin在正常組織中也有廣泛表達［17-19］。還有學者報道，Podoplanin在許多腫瘤細胞中也有表達［20-21］。本研究通過免疫組化檢測Podoplanin在HCC組織、癌旁組織、正常肝組織中的表達情況，結(jié)果顯示，Podoplanin陽性表達在3種肝組織中差異有統(tǒng)計學意義：Podoplanin在HCC組織中的表達水平高于癌旁組織及正常肝組織，在癌旁組織中的表達水平高于正常肝組織；同時Podoplanin表達水平在有淋巴管轉(zhuǎn)移的HCC組織中較無淋巴管轉(zhuǎn)移高，差異有統(tǒng)計學意義。提示Podoplanin可能與HCC的發(fā)生、發(fā)展、浸潤淋巴管轉(zhuǎn)移有關(guān)，這在胸腺腫瘤中已經(jīng)被證實［22-23］。因此，Podoplanin檢測可以作為HCC診斷、治療及預后的新靶點。

綜上所述，Podoplanin可能與HCC的淋巴管轉(zhuǎn)移相關(guān)；在促進HCC淋巴管轉(zhuǎn)移過程中起重要作用，阻斷Podoplanin的形成有可能降低HCC淋巴管生成及轉(zhuǎn)移的能力，有望利用此條途徑預防HCC淋巴管轉(zhuǎn)移，開發(fā)出治療HCC更有效的手段；同時Podoplanin 在HCC組織內(nèi)有較高的表達，而在癌旁組織及正常肝組織中表達低，推測其可能與HCC的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，進而為HCC的診斷篩選出新的標志物，為HCC的治療提供新靶點。

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Relationship between the expression of Podoplanin and lymphatic metastasis in hepatocellular carcinoma

JIANG Yang GAO HengyuLIU DanGUO Linna
Department of Anotomy，Qiqihar Medical College，Heilongjiang Province，Qiqihar 161001，China

Objective To disscuss relationship between the expression of Podoplanin and lymphatic metastasis in hepatocellular carcinoma.Methods 53 cases of archival paraffin block with hepatocellular carcinoma were selected as study objects in Daqing Oilfield General Hospital and Pathology Center of Qiqihar Medical College from January 2003 to January 2014.35 cases were lymph node metastasis and 18 cases were no lymph node metastasis.35 cases were hepatoma tissues，35 cases were adjacent tissues and 9 cases were normal liver tissues.Immunohistochemistry was used to detect the positive expressions of Podoplanin，and the expressions of Podoplanin in hepatoma tissues，adjacent tissues and normal liver tissues were observed.The relationship between the positive expression of Podoplanin and hepatocellular carcinoma with lymph metastasis was analyzed.Results Podoplanin was high expressed in hepatoma tissues，while was low expressed in normal liver tissues（P＜0.05）.Podoplanin was higher expressed in lymph node metastasis than that in no lymph node metastasis（P＜0.05）.Conclusion The high expression of Podoplanin in hepatocellular carcinoma should have close relationship with lymphatic genesis and lymphatic metastasis.

Hepatocellular carcinoma；Podoplanin；Lymph node

R735.7

A

1673-7210（2016）01（b）-0078-03

2015-09-11本文編輯：李亞聰）

黑龍江省教育廳課題（12531831）。

郭林娜（1978-），女，碩士，從事肝細胞癌相關(guān)研究。