易仲媛　甘國(guó)興　郭小玲　劉　毓　饒劍花　李筆鋒.廣東省清遠(yuǎn)市中醫(yī)院藥學(xué)部，廣東清遠(yuǎn)　5500；.廣東省清遠(yuǎn)市中醫(yī)院科教部，廣東清遠(yuǎn)　5500；.廣東省清遠(yuǎn)市中醫(yī)院骨科中心，廣東清遠(yuǎn)　5500

壯骨止痛方對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠下丘腦神經(jīng)肽Y及α-促黑素的影響

易仲媛1甘國(guó)興2郭小玲1劉毓3饒劍花1李筆鋒3
1.廣東省清遠(yuǎn)市中醫(yī)院藥學(xué)部，廣東清遠(yuǎn)511500；2.廣東省清遠(yuǎn)市中醫(yī)院科教部，廣東清遠(yuǎn)511500；3.廣東省清遠(yuǎn)市中醫(yī)院骨科中心，廣東清遠(yuǎn)511500

目的 觀察壯骨止痛方對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠下丘腦神經(jīng)肽Y（NPY）及α-促黑素（α-MSH）的影響，探討其抗骨質(zhì)疏松機(jī)制。方法 72只200 g左右的SD大鼠隨機(jī)抽出假手術(shù)組12只，造模組60只，造模組采用雙側(cè)去卵巢法造模，假手術(shù)組只切除卵巢周?chē)鄳?yīng)質(zhì)量的脂肪。造模成功后，將造模組大鼠隨機(jī)分為模型組、壯骨止痛方高劑量組（13.2 g/kg）、壯骨止痛方中劑量組（6.6 g/kg）、壯骨止痛方低劑量組（3.3 g/kg）和戊酸雌二醇組，每組12只。術(shù)后第5天開(kāi)始藥物干預(yù)，模型組和假手術(shù)組給予相應(yīng)體積的純凈水，持續(xù)13周。給藥結(jié)束后，檢測(cè)大鼠骨密度和下丘腦NPY及α-MSH含量。結(jié)果 假手術(shù)組大鼠下丘腦NPY含量為 （59.6395±6.4535）ng/L，α-MSH含量為（5.8261±0.6375）ng/L，股骨骨密度為（0.3485±0.0780）g/cm2。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠下丘腦NPY含量［（73.8488±7.0814）ng/L］顯著增加，α-MSH含量［（5.0314±0.5442）ng/L］顯著降低，股骨骨密度［（0.3045±0.0650）g/cm2］顯著減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。與模型組比較，壯骨止痛方高劑量組大鼠下丘腦NPY含量［（65.0930±6.3953）ng/L］顯著減少，α-MSH含量［（6.0570±0.5196）ng/L］顯著增加，股骨骨密度［（0.3524±0.0730）g/cm2］顯著增加；壯骨止痛方中劑量組大鼠NPY含量［（58.6163±5.9419）ng/L］顯著減少，α-MSH含量［（5.5766±0.5324）ng/L］顯著增加，股骨骨密度［（0.3507±0.0790）g/cm2］顯著增加；壯骨止痛方低劑量組大鼠NPY含量［（54.9419±4.6512）ng/L］顯著減少，α-MSH含量［（5.8743±0.4813）ng/L］顯著增加，股骨骨密度［（0.3498±0.0690）g/cm2］顯著增加，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論 促進(jìn)α-MSH合成、抑制NPY分泌可能是壯骨止痛方抗骨質(zhì)疏松的作用機(jī)制之一。

骨質(zhì)疏松；壯骨止痛方；神經(jīng)肽Y；α-促黑激素

研究發(fā)現(xiàn)一些神經(jīng)肽類(lèi)物質(zhì)如神經(jīng)肽Y（NPY）等介導(dǎo)神經(jīng)骨骼信號(hào)在骨代謝中發(fā)揮著重要作用，它們通過(guò)調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞活性及骨組織微循環(huán)參與骨代謝［1-2］。壯骨止痛方由補(bǔ)骨脂、女貞子、枸杞子、淫羊藿、骨碎補(bǔ)、川牛膝等7味中藥組成，具有補(bǔ)益肝腎、壯骨止痛的功效，能有效治療骨質(zhì)疏松癥［3］，但是其抗骨質(zhì)疏松機(jī)制尚未完全明確，前期研究發(fā)現(xiàn)壯骨止痛方能夠提高模型鼠血清雌激素水平，調(diào)節(jié)骨代謝相關(guān)激素，調(diào)節(jié)骨組織基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）-2、護(hù)骨因子（OPG）、雌激素相關(guān)受體α（ERRα）等基因和蛋白表達(dá)，多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)、多通路抗骨質(zhì)疏松［4-10］。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，瘦素及其信號(hào)傳導(dǎo)通路具有調(diào)節(jié)骨代謝的作用［11-13］。本研究通過(guò)探討壯骨止痛方對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠下丘腦NPY及α-促黑素（α-MSH）的影響，從調(diào)節(jié)神經(jīng)骨骼信號(hào)探討其抗骨質(zhì)疏松的作用機(jī)制。

1　材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

72只3月齡SPF級(jí)SD雌性大鼠，體重（220±15）g，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：No.43004700005517，中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心許可證號(hào)：SYXK（湘）2013-0001。飼料為湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司標(biāo)準(zhǔn)普通飼料。

1.2儀器

雙能X線骨密度儀（意大利Unigamma公司），酶標(biāo)儀（BioTek，USA），CP214電子天平（奧豪斯儀器有限公司），Shandon325型石蠟切片機(jī)（英國(guó)Shandon公司），LKB-Ⅲ型超薄切片機(jī)（瑞典），MIAS醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)、Motic B5顯微攝像系統(tǒng)等。

1.3藥物與試劑

壯骨止痛方藥材購(gòu)自長(zhǎng)沙九芝堂股份有限公司，由中南大學(xué)藥學(xué)院李勁平教授鑒定；戊酸雌二醇片（拜耳醫(yī)藥保健有限公司廣州分公司，J20130009）；NPY 及α-MSH酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 （ELISA）檢測(cè)試劑盒（上海邦奕生物科技有限公司）。

1.4方法

1.4.1藥物制備補(bǔ)骨脂和女貞子先用6倍體積70%乙醇回流提取2 h，過(guò)濾，再加4倍體積70%乙醇回流提取2 h，過(guò)濾，合并濾液減壓回收乙醇得流浸膏A備用；乙醇提取后的藥渣與處方其他藥材一起加10倍蒸餾水煎煮2 h，過(guò)濾，藥渣再加8倍水煎煮1.5 h，過(guò)濾，合并濾液，減壓濃縮至相應(yīng)濃度得流浸膏B，將A 與B合并調(diào)整濃度相當(dāng)生藥濃度1.32 g/mL為高劑量。用蒸餾水稀釋成濃度0.66 g/mL為中劑量，稀釋成濃度0.33 g/mL為低劑量。

1.4.2造模72只3月齡SPF級(jí)SD雌性大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，隨機(jī)選取12只為假手術(shù)組，其余采用雙側(cè)去卵巢法造模。大鼠用水合氯醛麻醉后，在無(wú)菌條件下從距離大鼠第1胸腰椎外側(cè)1 cm處縱向切開(kāi)皮膚及兩側(cè)肌肉，摘除雙側(cè)卵巢，假手術(shù)組僅在卵巢周?chē)谐鄳?yīng)質(zhì)量的脂肪，分兩層縫合傷口并用生理鹽水擦洗干凈血跡，術(shù)后連續(xù)3 d大腿肌內(nèi)注射青霉素，每只大鼠40 000 U/d。飼養(yǎng)于室溫23～25℃、相對(duì)濕度50%～70%的清潔環(huán)境中，自由攝食和攝水。經(jīng)上述處理后的大鼠，以陰道上皮角化試驗(yàn)驗(yàn)證模型是否成功，連續(xù)5 d陰道監(jiān)測(cè)未見(jiàn)動(dòng)情周期證明造模成功，可用于進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)。

1.4.3分組與給藥造模成功后，將造模大鼠隨機(jī)分為模型組、壯骨止痛方高劑量組、壯骨止痛方中劑量組、壯骨止痛方低劑量組、戊酸雌二醇組，加上假手術(shù)組共6組，每組12只大鼠。從術(shù)后第5天開(kāi)始，各組開(kāi)始灌胃給藥干預(yù)，持續(xù)13周。給藥劑量根據(jù)人鼠體表面積換算，壯骨止痛方高劑量相當(dāng)于生藥13.2 g/kg，壯骨止痛方中劑量相當(dāng)于生藥6.6 g/kg，壯骨止痛方低劑量相當(dāng)于生藥3.3 g/kg，戊酸雌二醇0.021 mg/kg。給藥體積均為1mL/100 g，模型組和假手術(shù)組給予等體積的純凈水。

1.4.4標(biāo)本采集及檢測(cè)灌胃給藥干預(yù)結(jié)束后，大鼠用水合氯醛麻醉，腹主動(dòng)脈采血后，迅速取出下丘腦并勻漿，取上清液按照試劑盒說(shuō)明書(shū)采用ELISA法檢測(cè)NPY及α-MSH含量。取右后側(cè)股骨和脛骨，剔除骨周?chē)∪饨M織，雙能X線骨密度儀測(cè)定股骨骨密度，脛骨用4%的多聚甲醛固定48 h，然后用5%的硝酸脫鈣1周，石蠟包埋后切片機(jī)切片，顯微形態(tài)學(xué)計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)測(cè)量脛骨平均骨小梁密度。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，進(jìn)行單因素方差分析，所有數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)方差齊性檢驗(yàn)和正態(tài)性檢驗(yàn)，方差齊的采用LSD檢驗(yàn)，方差不齊的采用Tamhane方法，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨密度的影響

與假手術(shù)組比較，模型組去卵巢后大鼠股骨骨密度顯著下降（P＜0.01）；與模型組比較，戊酸雌二醇組和壯骨止痛方各劑量組大鼠股骨骨密度明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1　對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨密度及骨組織形態(tài)學(xué)的影響（±s）

表1　對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨密度及骨組織形態(tài)學(xué)的影響（±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01

組別　只數(shù)劑量（g/kg）骨密度（g/cm2）骨小梁密度（g/cm2）假手術(shù)組模型組戊酸雌二醇組壯骨止痛方高劑量組壯骨止痛方中劑量組壯骨止痛方低劑量組12 12 12 12 12 12 --2.1×10-513.2 6.6 3.3 0.3485±0.0780 0.3045±0.0650*0.3387±0.0810#0.3524±0.0730##0.3507±0.0790##0.3498±0.0690##0.8763±0.0080 0.7056±0.0090*0.7908±0.0120##0.8689±0.0130##0.8562±0.0080##0.8485±0.0100##

2.2對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨組織形態(tài)學(xué)的影響

在10×40倍鏡下，通過(guò)顯微形態(tài)學(xué)計(jì)算機(jī)網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)測(cè)量右后脛骨骨小梁密度，每張切片取5個(gè)視野，取其平均值。與假手術(shù)組比較，模型組大鼠骨小梁密度顯著減?。≒＜0.01），與模型組比較，戊酸雌二醇組和壯骨止痛方各劑量組大鼠骨小梁密度均顯著增加，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表1。鏡下顯示，模型組大鼠骨小梁稀疏、破壞，骨髓腔擴(kuò)大，梁髓比明顯下降。假手術(shù)組大鼠骨小梁分布均勻，梁髓比正常；戊酸雌二醇組和壯骨止痛方各劑量組大鼠骨小梁密度分布比較均勻，梁髓比基本恢復(fù)正常，骨組織病理形態(tài)顯著改善。見(jiàn)圖1。

圖1　各組大鼠骨組織形態(tài)學(xué)（10×40）

2.3對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠下丘腦NPY及α-MSH的影響

與假手術(shù)組比較，模型組大鼠下丘腦NPY含量顯著增加，α-MSH含量顯著下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）。與模型組比較，戊酸雌二醇組大鼠下丘腦NPY含量顯著下降（P＜0.01），α-MSH含量顯著增加（P＜0.05）；壯骨止痛方高、中、低劑量組大鼠下丘腦NPY含量顯著下降（P＜0.05或P＜0.01），α-MSH含量顯著增加（P＜0.05或P＜0.01）。見(jiàn)表2。

表2　對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠下丘腦NPY及α-MSH的影響（ng/L，±s）

表2　對(duì)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠下丘腦NPY及α-MSH的影響（ng/L，±s）

注：與假手術(shù)組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，#P＜0.05，##P＜0.01；NPY：神經(jīng)肽Y；α-MSH：α-促黑素

組別　只數(shù)劑量（g/kg）　NPY　α-MSH假手術(shù)組模型組戊酸雌二醇組壯骨止痛方高劑量組壯骨止痛方中劑量組壯骨止痛方低劑量組12 12 12 12 12 12 --2.1×10-513.2 6.6 3.3 59.6395±6.4535 73.8488±7.0814**64.1047±4.8372##65.0930±6.3953#58.6163±5.9419##54.9419±4.6512##5.8261±0.6375 5.0314±0.5442*5.7593±0.6320#6.0570±0.5196##5.5766±0.5324#5.8743±0.4813#

3　討論

骨質(zhì)疏松癥又稱骨萎縮癥，是指隨著年齡增長(zhǎng)，成人骨質(zhì)流失加快，骨量減少，骨質(zhì)變薄、變脆，易發(fā)生骨折。老年性或絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松最為常見(jiàn)。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，瘦素及其信號(hào)傳導(dǎo)通路具有調(diào)節(jié)骨代謝的作用。瘦素在中樞主要是間接調(diào)節(jié)骨代謝，NPY和α-MSH是瘦素信號(hào)的兩個(gè)基本介質(zhì)。在下丘腦瘦素直接抑制NPY mRNA的表達(dá)［14］。瘦素可使NPY的功能減弱，使α-MSH的功能增強(qiáng)［15］。NPY和α-MSH在調(diào)節(jié)攝食、代謝和皮質(zhì)激素功能等方面具有相反的作用［16］，所以，推測(cè)NPY和α-MSH在調(diào)節(jié)骨代謝方面也同樣具有相反的作用。NPY是調(diào)節(jié)瘦素活動(dòng)的下游調(diào)節(jié)器［17］，在下丘腦的弓狀核神經(jīng)元，NPY神經(jīng)元能表達(dá)瘦素受體和Y2受體，Y2受體主要調(diào)節(jié)骨代謝。給野生鼠第三腦室靜脈注射N(xiāo)PY，與注射瘦素一樣引起骨丟失，說(shuō)明瘦素和NPY在控制骨形成方面的作用是一致的［18-20］。目前認(rèn)為下丘腦NPY靠神經(jīng)內(nèi)分泌作用和自主神經(jīng)機(jī)制影響外周骨組織。α-MSH是一種神經(jīng)內(nèi)分泌激素，與黑皮質(zhì)素受體（melanocortin receptor，MCR）結(jié)合，在調(diào)節(jié)能量代謝、食欲、免疫等發(fā)揮重要作用［21-22］。研究發(fā)現(xiàn)，α-MSH與骨代謝有關(guān)［23］。體外骨髓細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，α-MSH可以促進(jìn)破骨細(xì)胞形成。

本研究中，去卵巢骨質(zhì)疏松模型組大鼠下丘腦NPY顯著增加，α-MSH顯著降低，骨密度顯著下降。朱曉峰等［24］研究發(fā)現(xiàn)，去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠血清NPY含量明顯升高，骨組織NPY蛋白和mRNA的表達(dá)量明顯升高，提示NPY和α-MSH能夠調(diào)節(jié)骨代謝，在骨質(zhì)疏松形成中有一定的作用，綜合文獻(xiàn)報(bào)道，推測(cè)可能是NPY抑制骨形成，α-MSH促進(jìn)骨形成的同時(shí)促進(jìn)破骨細(xì)胞形成，而NPY抑制骨形成的作用更強(qiáng)。給藥干預(yù)后，壯骨止痛方各劑量組大鼠下丘腦NPY顯著下降，α-MSH顯著增加，提示壯骨止痛方可能通過(guò)調(diào)節(jié)NPY和α-MSH等神經(jīng)骨骼信號(hào)治療骨質(zhì)疏松，其具體作用機(jī)制還要進(jìn)一步深入研究。

［1］Elefteriou F.Regulation of bone remodeling by the central and peripheral nervous system［J］.Arch Biochem Biophys，2008，473（2）：231-236.

［2］MaW，Zhang X，ShiS，etal.Neuropeptides stimulate human osteoblast activity and promote gap junctional intercellular communication［J］.Neuropeptides，2013，47（3）：179-186.

［3］曾英，莫新民，雷曉明，等.壯骨止痛膠囊對(duì)去卵巢雌鼠骨質(zhì)疏松癥骨密度及相關(guān)生化指標(biāo)的影響［J］.湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，28（2）：10-12.

［4］甘國(guó)興，莫新民，李勁平，等.壯骨止痛方藥效部位的篩選及其對(duì)骨質(zhì)疏松雌鼠骨代謝相關(guān)激素的影響［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（15）：126-130.

［5］楊軍，莫新民，李勁平.壯骨止痛方治療大鼠去卵巢骨質(zhì)疏松癥的蛋白質(zhì)組學(xué)分析［J］.中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2012，18（2）：166-168.

［6］高峰，莫新民，李勁平，等.去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松癥基因表達(dá)譜特征初步分析［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2012，19（12）：29-31.

［7］高峰，莫新民，李勁平.淫羊藿苷治療去勢(shì)大鼠骨質(zhì)疏松癥基因表達(dá)譜分析［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2013，20（2）：43-45.

［8］李勁平，林清，王小靜，等.壯骨止痛膠囊A部分抗骨質(zhì)疏松有效成分研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2013，24（5）：1049-1051.

［9］李勁平，王小靜，曾英，等.補(bǔ)骨脂定抗實(shí)驗(yàn)性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的效應(yīng)及作用機(jī)理研究［J］.中國(guó)中藥雜志，2013，11 （6）：1816-1819.

［10］李勁平，曾英，雷曉明，等.壯骨止痛膠囊抗實(shí)驗(yàn)性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松作用的三維組學(xué)分析［J］.中國(guó)中藥雜志，2014，39（16）：3203-3207.

［11］劉玉川，王亮，馬遠(yuǎn)征.骨質(zhì)疏松和瘦素關(guān)系的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志，2012，18（5）：469-473.

［12］劉愛(ài)茹.瘦素對(duì)小鼠成骨細(xì)胞MC3T3-E1增殖及OPG/ RANKLmRNA表達(dá)的影響［J］.中國(guó)骨質(zhì)疏松雜志，2008，14（8）：552-555.

［13］高超，周一萌.瘦素通過(guò)細(xì)胞因子在RANKL/RANK/OPG系統(tǒng)中的作用對(duì)破骨細(xì)胞形成的調(diào)節(jié)［J］.中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2010，5（29）：260-262.

［14］Nan SY，Kratzsch J，Kim KW，etal.Cerebrospinal fluid and plasma comcentrations of leptin，NPY，andα-MSH in obese women and their relationship to negative energy balance［J］.JClin Endo Meta，2001，80（10）：4849-4853.

［15］JequierE.Leptin signaling，adiposity，and energy balance［J］. Ann NY Acad Sci，2002，967（1）：379-388.

［16］Bell ME，Bhatnagar S，Susan F.Disruption of arcuate/ paraventricular nucleus connections changes body energy balance and response to acute stess［J］.JNeuroscience，2000，20（17）：6707-6713.

［17］Baldark PA.Hypothalamic Y2 receptors regulate bone formation［J］.JClin Invest，2002，109（7）：915-921.

［18］Ducy P，Amling M，Takeda S，et al.Leptin inhibits bone formation through a hypothalamic relay：a center control of bonemass［J］.Cell，2000，100（2）：197-207.

［19］Cornish J，Callon KE，Mountjoy KG，etal.Alpha-melanocyte stimulating hormone is a novel regulator of bone［J］. Am J Physiol Endocrinol Metab，2003，284（6）：1181-1190.

［20］張燕，曾榮峰，于巍，等.2型糖尿病男患者骨密度變化及影響因素［J］.現(xiàn)代醫(yī)院，2014，14（11）：38-40.

［21］何靜，蔣瓊.定量超聲骨密度測(cè)定診斷老年性骨質(zhì)疏松的臨床價(jià)值［J］.現(xiàn)代醫(yī)院，2014，14（12）：73-74.

［22］肖向陽(yáng).老年骨質(zhì)疏松性胸腰椎壓縮性骨折采用中西醫(yī)綜合療法治療效果探討［J］.中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2014，11（27）：138-141.

［23］楊娟，談敏，胡群力，等.絕經(jīng)后婦女2型糖尿病腎病患者骨代謝指標(biāo)變化分析［J］.中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2014，11（26）：10-12.

［24］朱曉峰，王廷春，楊麗，等.補(bǔ)腎活血中藥復(fù)方對(duì)去卵巢大鼠骨密度和骨組織神經(jīng)肽Y的影響［J］.中國(guó)老年學(xué)雜志，2015，35（11）：2284-2886.

Effect of Zhuanggu Zhitong Prescription on neuropeptide Y andαmelanocyte stimulating hormone in the hypothalamus of ovariectomized rats with osteoporosis

YIZhongyuan1GAN Guoxing2GUO Xiaoling1LIU Yu3RAO Jianhua1LIBifeng3
1.Department of Pharmacy，Qingyuan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Province，Qingyuan 511500，China；2.Department of Science and Education，Qingyuan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Province，Qingyuan511500，China；3.Orthopedic Center，Qingyuan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Guangdong Province，Qingyuan511500，China

Objective To observe the effect of Zhuanggu Zhitong Prescription on the neuropeptide Y（NPY）andαmelanocyte stimulating hormone（α-MSH）in the hypothalamus of ovariectomized rats with osteoporosis and to investigate its mechanism of anti-osteoporosis.Methods Seventy two SD rats weighed about 200 g were randomly divided into sham operation group（12 rats）and model group（60 rats），the model group was bilateral ovariectomized，the sham operation group was excised equal weight fat around the ovary.After the modeling，the rats were randomly divided into model group，Zhuanggu Zhitong Prescription high-dose group（13.2 g/kg），Zhuanggu Zhitong Prescription middle-dose group（6.6 g/kg），Zhuanggu Zhitong Prescription low-dose group（3.3 g/kg）and estradiol valerate group，with 12 rats in each group.5 days after operation，drug therapy was started，the model group and sham operation group were given equal volume of water for 13 weeks.After the drug delivery，the bone mineral density and contents of NPY and α-MSH in the hypothalamus were detected.Results In the sham operation group，the content of NPY in the hy-pothalamus was（59.6395±6.4535）ng/L，the content ofα-MSH was（5.8261±0.6375）ng/L，and the femoral bone mineral density was（0.3485±0.0780）g/cm2.Compared with the sham operation group，the content of NPY in the hypothalamus of model group［（73.8488±7.0814）ng/L］was significantly increased，and theα-MSH［（5.0314±0.5442）ng/L］was significantly declined，the bone mineral density［（0.3045±0.0650）g/cm2］was significantly declined，there were statistically significant differences（P＜0.05 or P＜0.01）.Compared with the model group，the content of NPY in the Zhuanggu Zhitong Prescription high-dose group［（65.0930±6.3953）ng/L］was significantly declined，the content ofα-MSH［（6.0570±0.5196）ng/L］was significantly increased，the femoral bone mineral density［（0.3524±0.0730）g/cm2］was significantly increased（P＜0.05）；the content of NPY in the Zhuanggu Zhitong Prescription middle-dose group［（58.6163±5.9419）ng/L］was significantly declined，the content ofα-MSH［（5.5766±0.5324）ng/L］was significantly increased，the femoral bone mineral density［（0.3507±0.0790）g/cm2］was significantly increased；the content of NPY in the Zhuanggu Zhitong Prescription low-dose group［（54.9419±4.6512）ng/L］was significantly declined，the content of α-MSH［（5.8743±0.4813）ng/L］was significantly increased，the femoral bone mineral density［（0.3498±0.0690）g/cm2］was significantly increased，the differences were all statistically significant（P＜0.05 or P＜0.01）.Conclusion Promoting the expression ofα-MSH and restraining the secretion of NPY may be one of the mechanism of Zhuanggu Zhitong Prescription in anti-osteoporosis.

Osteoporosis；Zhuanggu Zhitong Prescription；Neuropeptide Y；α-melanocyte stimulating hormone

R285.5

A

1673-7210（2016）01（b）-0020-04

2015-10-13本文編輯：張瑜杰）

廣東省清遠(yuǎn)市社會(huì)發(fā)展領(lǐng)域自籌經(jīng)費(fèi)科技計(jì)劃項(xiàng)目（2015B055）。

甘國(guó)興（1984.10-），男，碩士研究生；研究方向：中藥新藥開(kāi)發(fā)與研究。