劉琳，郝鵬飛，張麗，張雪琰，呂寧，徐琴，王建華（.山東檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心，山東青島6600；.臨沂檢驗(yàn)檢疫局綜合技術(shù)服務(wù)中心，山東臨沂76034）

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高效液相色譜法測(cè)定葡萄酒中多種糖醇

劉琳1，郝鵬飛1，張麗2，張雪琰1，呂寧1，徐琴1，王建華1
（1.山東檢驗(yàn)檢疫局技術(shù)中心，山東青島266002；2.臨沂檢驗(yàn)檢疫局綜合技術(shù)服務(wù)中心，山東臨沂276034）

建立葡萄酒中多種糖醇的高效液相色譜檢測(cè)方法。采用色譜柱WatersXbridgeAmide（3.5μm，4.6mm×250mm），流動(dòng)相為丙酮-水［77∶23（體積比），并在每1 000 mL丙酮-水流動(dòng)相中加入三乙胺0.23 mL］，用示差折光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。丙三醇、木糖醇、山梨糖醇、麥芽糖醇的線性范圍為0.084 mg/mL～100 mg/mL，最低檢出限為0.016 mg/mL～0.282 mg/mL，3種葡萄酒樣品中4種糖醇的回收率為75.682%～115.476%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.022～3.682，該方法應(yīng)用于葡萄酒中糖醇的檢測(cè)快速、準(zhǔn)確、高效。

高效液相色譜法；示差折光檢測(cè)器；麥芽糖醇；糖醇；葡萄酒

麥芽糖醇、木糖醇、山梨糖醇、丙三醇這幾種常見的糖醇經(jīng)常應(yīng)用或是存在于我們?nèi)粘５氖称分?。糖醇是糖的加氫還原產(chǎn)物，擁有甜度低、熱量低等特點(diǎn)，是一類新型的甜味劑，經(jīng)常被應(yīng)用于低糖食品，糖尿病人保健食品以及低能量低糖功能性食品。

葡萄酒是一種營(yíng)養(yǎng)豐富的飲料，富含人體所需的維他命、糖及微量元素，具有促進(jìn)血液循環(huán)、降低血脂、軟化血管等功效。隨著人們生活水品的提高，葡萄酒這種以前相對(duì)高端小受眾的商品逐漸走上了平常百姓的日常餐桌。在中國(guó)，人們受喝酒習(xí)俗及口味的影響，紅酒的銷售量很大，人們紅酒的攝入量也很大，而且中國(guó)人對(duì)干紅、干白葡萄酒這類傳統(tǒng)的葡萄酒其酸澀口味喜愛度不是特別高，更喜愛含糖量較高、口感較甜的半甜、甜型葡萄酒類，由于對(duì)甜度的追求使部分葡萄酒生產(chǎn)者在葡萄酒加工中添加甜味劑。所以為了判定葡萄酒的優(yōu)劣，既具有有益的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)又具有調(diào)節(jié)口味作用的糖醇在紅酒的檢測(cè)中就越來(lái)越多，作為新型甜味劑類的糖醇檢測(cè)也越來(lái)越被重視。

國(guó)內(nèi)糖醇的研究多集中在配制乳，發(fā)酵乳等檢測(cè)方面，對(duì)葡萄酒中的糖醇檢測(cè)涉及很少，所以本試驗(yàn)研究一種測(cè)定葡萄酒中多種糖醇的檢測(cè)方法。

1　材料與方法

1.1試劑、標(biāo)準(zhǔn)品與樣品

麥芽糖醇、木糖醇、山梨糖醇、丙三醇，純度均＞99%；丙酮（色譜純）；三乙胺（優(yōu)級(jí)純）；乙酸鋅（分析純）；亞鐵氰化鉀（分析純）；試驗(yàn)用水Millipore超純水。

干白葡萄酒、干紅葡萄酒、甜型葡萄酒以及起泡酒等本試驗(yàn)用酒均為市售商品。

1.2儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀1100（配示差折光檢測(cè)器）：美國(guó)Agilent公司；液相色譜柱WatersXbridgeAmide（3.5μm，4.6 mm×250 mm）：美國(guó)Waters公司；MILLI-Q純水儀：MilliPore公司；MS 3 basic混勻器：美國(guó)IKA公司；KQ-100E超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；PL602-S天平：Mettler-Toledo公司；CR22GⅢ離心機(jī)：日本HITACHI；移液槍（10-100 μL，20-200 μL，100-1000 μL，5000 μL）：Eppendorf公司；0.22 μm濾膜：德國(guó)Membrana公司；22%乙酸鋅（純度99.0%）：天津市化學(xué)試劑三廠；10.6%亞鐵氰化鉀（純度99.5%）：醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑公司。

1.3色譜條件

色譜柱：Waters Xbridge Amide（3.5 μm，4.6 mm× 250 mm）；流動(dòng)相：?jiǎn)瘟鲃?dòng)相（丙酮∶水=77∶23，每1 000 mL流動(dòng)相加入0.230 mL三乙胺）等度洗脫；柱溫：70℃；流速：0.8 mL/min；進(jìn)樣量：10 μL。

總之，應(yīng)用型民辦本科高校已成為我國(guó)高等教育的重要組成部分，為確保人才培養(yǎng)質(zhì)量和滿足當(dāng)今社會(huì)對(duì)應(yīng)用型人才的需求，應(yīng)用型民辦本科高校必須建設(shè)一支強(qiáng)有力的“雙師型”教師隊(duì)伍，“雙師型”教師隊(duì)伍的建設(shè)有利于推動(dòng)應(yīng)用型民辦本科高校的深入發(fā)展。目前，應(yīng)提高“雙師型”教師的工作積極性，建立健全應(yīng)用型民辦本科高校教師獎(jiǎng)勵(lì)機(jī)制，以“幕課”的形式對(duì)青年教師進(jìn)行培訓(xùn)，多渠道籌集“雙師型”教師隊(duì)伍建設(shè)資金。只有這樣才能為“雙師型”教師的培養(yǎng)營(yíng)造良好的成長(zhǎng)氛圍，從而為社會(huì)提供更多具有高素質(zhì)的應(yīng)用型人才。

1.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配置

分別取適量麥芽糖醇、木糖醇、山梨糖醇、丙三醇標(biāo)準(zhǔn)品，配成標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，待用。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度及標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度如表1。

表1　標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液濃度及標(biāo)準(zhǔn)系列溶液濃度Table 1　Concentration of standard stock solution and standard series

1.5樣品前處理

稱取均勻的待測(cè)樣品10.0 g（精確至1.0 mg）放入100 mL容量瓶中，加水30 mL稀釋溶解，分別緩慢加入22%乙酸鋅溶液2.5mL和10.6%亞鐵氰化鉀溶液2.5 mL，混勻，靜置至室溫，再加入水定容至100 mL，混勻后，離心機(jī)離心，取上清液，用0.22 μm針頭濾膜過(guò)濾待測(cè)。

另：對(duì)起泡酒類需用超聲波清洗器消泡后稱取待測(cè)。

2　結(jié)果與討論

2.1色譜柱的選擇

Agela NH2為糖類分析傳統(tǒng)的氨基柱，在日常的分析中可以發(fā)現(xiàn)，隨著分析量的加大，尤其是在分析組分較復(fù)雜的樣品，例如葡萄酒類時(shí)，此類氨基柱樣品分離度下降很明顯，且木糖醇與山梨糖醇不能完全分離。選擇WatersXbridgeAmide（3.5μm，4.6mm×250mm）色譜柱，木糖醇與山梨糖醇完全分離，如圖1。

圖1　流動(dòng)相未加三乙胺時(shí)4種糖醇色譜圖Fig.1　Four types of sugar alcohols chromatogram used mobile phase without triethylamine

且分離度下降比較緩慢，系統(tǒng)較易平衡，所以選擇Waters Xbridge Amide（3.5 μm，4.6 mm×250 mm）色譜柱。丙酮∶水=77∶23，每1 000 mL流動(dòng)相加入0.230 mL三乙胺為流動(dòng)相。

2.2流動(dòng)相的選擇

本試驗(yàn)選取乙腈水和丙酮水兩種流動(dòng)相進(jìn)行比較。糖類分析傳統(tǒng)的氨基柱，應(yīng)用乙腈水為流動(dòng)相，但是在分析多組分糖類及糖醇時(shí)，由于部分檢測(cè)物結(jié)構(gòu)和分子量上的相似，所以不能完全分離。選擇丙酮∶水= 77∶23為流動(dòng)相，流動(dòng)相偏正相，糖醇分離度加大，但是對(duì)于木糖醇與山梨糖醇還是不能完全分離，如圖1，所以加入三乙胺，進(jìn)一步加大分離度，分別在1000mL流動(dòng)相中加入0.100、0.200、0.230、0.300mL三乙胺進(jìn)行分析，加入三乙胺分離效果圖，如圖2。

圖2　加入三乙胺分離效果圖Fig.2　Triethylamine separation rendering phase without triethylamine

試驗(yàn)得出隨著三乙胺加入量的加大，糖醇的分離度加大，木糖醇與山梨糖醇可以完全分離，但是三乙胺加入到0.230 mL以后，隨著加入量的加大分離度沒(méi)有明顯的變化，所以選擇每1 000 mL流動(dòng)相加入0.230 mL三乙胺。加入三乙胺后葡萄酒添加色譜圖如圖3。

圖3　干紅葡萄酒添加色譜圖Fig.3　The red wine with adding stardard chromatogram

最終確定丙酮∶水=77∶23，每1000mL流動(dòng)相加入0.230mL三乙胺為流動(dòng)相，4種糖醇色譜圖，如圖4，干白葡萄酒色譜圖如圖5，干紅葡萄酒色譜圖如圖6，甜白葡萄酒色譜圖如圖7。

圖4　4種糖醇色譜圖Fig.4　Four types of sugar alcohols chromatogram

圖5　干白葡萄酒色譜圖Fig.5　The white wine chromatogram

圖6　干紅葡萄酒色譜圖Fig.6　The red wine chromatogram

圖7　甜白葡萄酒色譜圖Fig.7　The sweet wine chromatogram

2.3線性范圍、檢出限、精密度和重現(xiàn)性

以2.1、2.2選擇的色譜條件進(jìn)行檢測(cè)得出干白葡萄酒、干紅葡萄酒、甜白葡萄酒中糖醇檢出情況，如表2。

表2　葡萄酒中糖醇的含量Table 2　The content of sugar alcohol in wine　mg/g

由圖5看出，葡萄酒譜圖基線比較平穩(wěn)，糖醇可以被完全分離，因?yàn)椴煌谴嫉臋z測(cè)信號(hào)響應(yīng)有差別，所以檢出限有比較大的差別，表3為葡萄酒中4種糖醇線性方程。

由表3可以得出，4種糖醇相關(guān)系數(shù)均在0.99以上，線性較好，線性范圍為0.084 mg/mL～100mg/mL，最低檢出限為0.016 mg/mL～0.282 mg/mL，線性范圍比較大，且靈敏度較高。

干紅葡萄酒添加色譜圖，如圖5，對(duì)3種葡萄酒中4種糖醇進(jìn)行添加回收驗(yàn)證，如表4。

表3　葡萄酒中4種糖醇線性Table 3　The linears of 4 types of sugar alcohols in wine

表4　3種葡萄酒中4種糖醇回收率Table 4　The Recoveries of 4 Types of Sugar alcohols in 3 Types of Wine

由表4可以看出，3種葡萄酒中4種糖醇的3種不同濃度回收率均在75.682%～115.476%之間，回收率較好。

3種葡萄酒在3種不同濃度下4種糖醇的精密度如表5所示。

表5　3類葡萄酒中4種糖醇精密度（n=6）Table 5　The precision of 4 types of sugar alcohols in 3 types of wine（n=6）

由表5可以看出，此方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.022～3.682之間，精密度比較高，重現(xiàn)性比較好。

3　結(jié)論

本試驗(yàn)主要是通過(guò)對(duì)3種常見的葡萄酒（干白葡萄酒、干紅葡萄酒、甜白葡萄酒）基質(zhì)進(jìn)行試驗(yàn)研究，通過(guò)色譜柱、流動(dòng)相選擇等方法，建立了能夠適合葡萄酒基質(zhì)的色譜條件，從而對(duì)葡萄酒建立系統(tǒng)和完整的高效液相色譜檢測(cè)方法。丙三醇、木糖醇、山梨糖醇、麥芽糖醇的線性范圍為0.084 mg/mL～100 mg/mL，最低檢出限為0.016 mg/mL～0.282 mg/mL，3種葡萄酒樣品中4種糖醇的回收率為75.682%～115.476%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.022～3.682，結(jié)果表明：此方法的精密度，重復(fù)性良好。

［1］中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).GB/T 22221-2008食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、乳糖的測(cè)定高效液相色譜法［S］.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2008

［2］中華人民共和國(guó)國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.GB/T 18932.22-2003蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖含量的測(cè)定方法液相色譜示差折光檢測(cè)法［S］.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2003

［3］曹英華，賈麗，錢春燕，等.蒸發(fā)光散射液相色譜測(cè)定無(wú)糖酸奶中糖醇［J］.食品研究與開發(fā)，2011，32（2）:117-120

［4］吳軍輝.新型糖類功能性食品添加劑及其應(yīng)用［J］.糧食加工，2012，37（3）:64-66

［5］于趁，閆正，蔡立鵬，等.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測(cè)定無(wú)糖糕餅中糖醇含量［J］.食品工業(yè)科技，2011，31（3）:362-364

［6］史海良，楊紅梅，王浩，等.高效液相色譜-蒸發(fā)光散射法測(cè)定無(wú)糖食品中糖醇［J］.分析試驗(yàn)室，2009，28（S1）:294-296

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Determination of Multiple Sugar Alcohols in Wine by HPLC

LIU Lin1，HAO Peng-fei1，ZHANG Li2，ZHANG Xue-yan1，Lü Ning1，XU Qin1，WANG Jian-hua1
（1.Technology Center for Shandong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Qingdao 266002，Shandong，China；2.Comprehensive Technical Service Center for Linyi Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Linyi 276034，Shandong，China）

A method was established to determine multiple sugar alcohol in wine by HPLC.Use colume of Wa ters Xbridge Amide（3.5 μm，4.6 mm×250 mm），Mobile phase was acetone water（77∶23，volume ratio，0.230 mL triethylamine per 1 000 mL acetone water）by RID.The linear range of glycerol，xylitol，sorbitol，maltitol were 0.084 mg/L-100 mg/L.Limit of minium detection were 0.016 mg/mL-0.282 mg/mL.The sample recoveries were 75.682%-115.476%，relative standard precisionswere 0.022-3.682.The method wasrapid，accurate，efficient.

HPLC；RID；maltitol；sugar alcohols；wine

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.13.035

劉琳（1982—），女（漢），工程師，碩士研究生，研究方向：食品分析化學(xué)。

2015-09-30