卜凡強，楊超群，呂振興，陳俊廷，張衛(wèi)東，白麗明

?

4種藥用植物抗氧化活性的研究

卜凡強1，楊超群1，呂振興2，陳俊廷1，張衛(wèi)東2，白麗明1

（齊齊哈爾大學(xué) 1. 化學(xué)與化工學(xué)院，2. 材料科學(xué)與工程學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161006）

采用DPPH法測定馬蘭、鼠曲草、刺五加和蒼耳等4種藥用植物醇提液的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和甲醇不同極性部位的抗氧化活性．結(jié)果表明，4種植物不同極性部位對DPPH均有清除作用，其中馬蘭的乙酸乙酯部位的清除作用最好．

馬蘭；刺五加；藥用植物；DPPH；抗氧化活性

在人體產(chǎn)生的自由基及其誘導(dǎo)作用下，不僅能加速人體衰老還能引起多種疾病，抗氧化劑能有效清除自由基，延緩人體衰老和預(yù)防疾病．目前，常見的抗氧化劑多為合成制劑，動物實驗研究表明，其對生物體有潛在的毒副作用[1-4]．因此，近年來尋找安全、無副作用的天然抗氧化劑逐漸成為研究熱點[5-6]．我國是藥用植物資源豐富的國家，豐富的中草藥使用經(jīng)驗為尋找到天然抗氧化劑提供了便利條件．本文選取被傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認為兼具醫(yī)療和保健功效的４種中草藥（馬蘭、鼠曲草、刺五加、蒼耳），采用DPPH法，研究其不同極性部位的提取物清除自由基的抗氧化能力，旨在為上述藥物的有效開發(fā)和利用提供理論依據(jù)．

1材料與試劑

1.1實驗藥材

馬蘭（2014年8月采于齊齊哈爾市嫩江江畔），鼠曲草、刺五加（購于江西藥材批發(fā)中心），蒼耳（采集于黑龍江省蘭溪縣）．經(jīng)齊齊哈爾大學(xué)生命科學(xué)與農(nóng)林學(xué)院楊曉杰教授鑒定為菊科馬蘭（），菊科鼠曲草（），五加科刺五加（），菊科蒼耳（）．

1.2儀器與試劑

TU-1900型雙光束紫外可見分光光度計（北京普希通用儀器有限公司）；HK-5200型超聲波清洗器（上海漢克科學(xué)儀器有限公司）；HC-100型華晨高速多功能粉碎機（浙江省永康市金穗機械制造廠）；電子分析天平BS-124S（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）．DPPH（東京化工廠）；抗壞血酸（天津市光復(fù)精細化工研究所）；無水乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、甲醇等均為分析純．

2實驗方法

2.14種植物不同極性部位的制備

將干燥的4種植物各1 000 g粉碎，用乙醇（6 L）浸泡3 d后過濾，重復(fù)此過程4次，合并提取液，濃縮后加水依次用等體積石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取4次獲得；甲醇部位是再次利用上述方法獲得原浸膏后，利用硅膠柱色譜經(jīng)100%乙酸乙酯洗脫后，再以100%甲醇作流動相洗脫得到的產(chǎn)物．將各部位萃取液水浴蒸干后減壓干燥，置冰箱中冷藏，備用．

2.2DPPH溶液的配制及標準曲線的繪制

準確稱取DPPH 0.002 0 g，加無水乙醇溶解，棕色瓶定容至50 mL，質(zhì)量濃度為0.04 mg·L-1，作為儲備液，最終以質(zhì)量濃度依次為：0.002，0.004，0.008，0.010和0.015 mg·L-1作為實驗測試質(zhì)量濃度，并用紫外分光光度計在517 nm處測定其吸光度，繪制標準曲線．

2.3陽性對照品和樣品溶液的配制

準確稱取抗壞血酸標準品0.025 0 g，4種植物不同極性提取物各0.5 g，無水乙醇溶解，均以質(zhì)量濃度5 mg·mL-1作為樣品溶液，備用．

2.4DPPH自由基清除率的測定

在10 mL棕色容量瓶中，加入DPPH標準品儲備液2 mL，再加入一定量的樣品溶液，定容，最終各樣品實驗質(zhì)量濃度分別為5，1，0.5，0.25，0.1，0.05和0.025 mg·mL-1，錫箔紙包裹避光，振蕩并搖勻，靜置30 min，置于1 cm比色皿中，波長517 nm處測得吸光度（i）；以無水乙醇2 mL代替DPPH重復(fù)上述實驗，測得吸光度（j）；再分取無水乙醇、DPPH儲備液2 mL，定容，測得吸光度（c）．平行測定3次．按公式計算樣品溶液對DPPH自由基的清除率[7-8]．

2.5抗壞血酸對DPPH自由基的清除率

自由基清除率的測定：將質(zhì)量濃度為5 mg·mL-1的抗壞血酸按2.4方法進行測定，對照溶液最終稀釋濃度為5，1，0.5，0.25，0.1，0.05和0.025 mg·mL-1，并計算其清除率．

3結(jié)果與討論

3.1DPPH標準工作曲線

取DPPH待測液，用無水乙醇溶劑作為空白參比，波長517 nm處測得各待測液吸光度．以DPPH質(zhì)量濃度（mg·mL-1）為橫坐標，吸光度為縱坐標做標準曲線（見圖1）．標準曲線方程為：=493.43-0.070 1，2=0.997 7．

3.2不同部位提取物的清除率曲線

根據(jù)2.4的測定方法，測定了4種植物不同極性部位不同質(zhì)量濃度的吸光度，并計算清除率，以清除率對各部位質(zhì)量濃度作圖，得到不同部位提取物的清除率曲線（見圖2~5）．

由圖2~5可見，在一定質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，DPPH的清除率（）與各部位的質(zhì)量濃度（）呈正相關(guān)，4種植物4種極性部位在0.025~5 mg·mL-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，均有一定的清除DPPH自由基的能力，其中以植物馬蘭總體的清除率為最高，0.05 mg·mL-1質(zhì)量濃度時，各極性部位的清除率已到達50%以上，且當(dāng)質(zhì)量濃度增大到5 mg·mL-1時，清除率幾乎達到100%，超過陽性對照品c．不同極性部位不同質(zhì)量濃度下4種植物表現(xiàn)出的對DPPH自由基清除效果不同，在所測試的0.025~5 mg·mL-1質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，石油醚和乙酸乙酯部位的清除率順序均為：馬蘭＞刺五加＞蒼耳＞鼠曲草；正丁醇和甲醇部位的清除率順序均為：馬蘭＞刺五加﹥鼠曲草﹥蒼耳；同時，在高質(zhì)量濃度時，鼠曲草的清除活性有較大的增強．

4結(jié)語

通過測定4種天然藥用植物和抗壞血酸對DPPH自由基的清除率，得出4種藥用植物對DPPH自由基均有消除效果．而作為生長廣泛，常被用于藥食兩用的植物馬蘭則表現(xiàn)出較強的抗氧化活性，有望通過分離獲得安全、無毒的抗氧化化合物．

[1] 王和才，胡秋輝．DPPH法測定紫紅薯提取物清除自由基的能力[J]．食品研究與開發(fā)，2010，31（1）：132-135

[2] 勾明玥，劉梁，張春枝．采用DPPH法測定26種植物的抗氧化活性[J]．食品與發(fā)酵工業(yè)，2010，36（3）：148-150

[3] 林詩云，王炯，馮桂權(quán)，等．6種天然藥提取物清除自由基和抗氧化活性研究[J]．云南民族大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2010，19（3）：204-206

[4] 劉玉鵬，劉梅．30種中草藥的抗氧化活性研究[J]．煙臺大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)與工程版，2000，13（1）：70-73

[5] 陳玫，張海德，陳敏，等．幾種中藥的不同溶劑組分的抗氧化活性研究[J]．中山大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2006，45（6）：131-134

[6] 謝學(xué)明，鐘遠聲，李熙燦．22種華南地產(chǎn)藥材的抗氧化性研究[J]．中藥藥理與臨床，2006，22（1）：48-52

[7] 孔凡剛，張麗，鞏麗麗，等．DPPH法測定桑椹不同極性部位的抗氧化活性[J]．山東中醫(yī)雜志，2015，34（11）：865-868

[8] 董秀英，呂青濤，張國英，等．DPPH法測定九州蟲草不同極性部位抗氧化活性[J]．中國實驗方劑學(xué)雜志，2011，17（10）：70-73

Anti-oxidative activity of four medicinal plants

BU Fan-qiang1，YANG Chao-qun1，Lü Zhen-xing2，CHEN Jun-ting1，ZHANG Wei-dong2，BAI Li-ming1

（1. School of Chemistry and Chemical Engineering，2. School of Materials Science and Engineering，Qiqihar University，Qiqihar 161006，China）

To investigate the antioxidant activity of different polarities of four medicinal plants（，，，. Antioxidant activity of the petroleum ether fraction（EVP），acetic ether fraction（EVE），-butanol fraction（EVB）and methanol fraction（EVM） were determined by the DPPH assay. The results showed that different polarities of four medicinal plants are capable of clearing DPPH，among which the acetic ether fractionfromis the most effective.

；；medicinal plants；DPPH；antioxidant activity

Q946

A

10.3969/j.issn.1007-9831.2016.04.009

2016-02-17

黑龍江省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目（201510221021）

卜凡強（1994-），男，黑龍江雞西人，在讀本科生．E-mail：669027608@qq.com

白麗明（1968-），女，黑龍江齊齊哈爾人，教授，博士，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究．E-mail：blm68@163.com

1007-9831（2016）04-0035-03