陳　希，陳園園，牟　琴，楊　靜，范　玲，張大勇，王治國，豆　虎，鄒　琳，包黎明△

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院臨床分子醫(yī)學(xué)中心/重慶市兒科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/兒童發(fā)育疾病研究省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400014；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 400014；3.國家衛(wèi)生計(jì)生委臨床檢驗(yàn)中心，北京 100730)

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實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評(píng)染色體檢測(cè)水平效果分析*

陳希1，陳園園1，牟琴1，楊靜1，范玲1，張大勇1，王治國3，豆虎2，鄒琳1，包黎明1△

(1.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院臨床分子醫(yī)學(xué)中心/重慶市兒科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室/兒童發(fā)育疾病研究省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400014；2.重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，重慶 400014；3.國家衛(wèi)生計(jì)生委臨床檢驗(yàn)中心，北京 100730)

目的分析參加美國病理學(xué)會(huì)(CAP)室間質(zhì)評(píng)的能力比對(duì)檢驗(yàn)(PT)后，染色體檢測(cè)水平的變化。方法分析2011～2014參加CAP PT的結(jié)果，并根據(jù)CAP評(píng)審結(jié)果，得出該實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞遺傳學(xué)染色體質(zhì)控測(cè)試的準(zhǔn)確率，并通過分析該實(shí)驗(yàn)室參加CAP前后的染色體條帶水平、異常檢出率及染色體檢測(cè)失敗率，評(píng)估CAP室間質(zhì)評(píng)項(xiàng)目對(duì)提高該實(shí)驗(yàn)室染色體檢測(cè)水平的作用。結(jié)果2011～2014年該實(shí)驗(yàn)室參加CAP PT測(cè)試10次，共分析病例59例，判斷染色體核型正確率為100%，核型描述正確率為95.1%。該實(shí)驗(yàn)室臨床病例染色體檢測(cè)結(jié)果顯示：外周血染色體的異常檢出率為18.9%，骨髓染色體的異常檢出率為25.9%，初診白血病異常率為66.8%；外周血染色體及骨髓染色體檢測(cè)的失敗率分別為0.5%、5.0%；參加CAP后，外周血及骨髓染色體檢測(cè)失敗率均下降，染色體條帶平均水平均提高，與參加CAP前比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)論參加高水平的室間質(zhì)評(píng)項(xiàng)目可以提高細(xì)胞遺傳學(xué)染色體檢測(cè)的臨床分析水平。

細(xì)胞遺傳學(xué)；室間質(zhì)評(píng)；能力比對(duì)檢驗(yàn)

采用臨床細(xì)胞遺傳學(xué)方法檢測(cè)與疾病有關(guān)的染色體數(shù)目及結(jié)構(gòu)改變，對(duì)遺傳性疾病和腫瘤的診治起著重要作用[1]。染色體檢查所涉及的標(biāo)本種類多，包括外周血、骨髓、淋巴結(jié)、實(shí)體腫瘤、產(chǎn)前標(biāo)本等，檢測(cè)過程中手工操作較多、時(shí)間長、易受多種因素影響[2]。目前尚無全國性的細(xì)胞遺傳學(xué)檢測(cè)指導(dǎo)標(biāo)準(zhǔn)[3-4]，各實(shí)驗(yàn)室水平參差不齊，在染色體顯色條帶水平、細(xì)胞分析個(gè)數(shù)、審核流程及報(bào)告模式等方面不統(tǒng)一[5]。部分實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行了區(qū)域性的室間結(jié)果比對(duì)，但是范圍小，且缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)及權(quán)威性[6]。為了更好地監(jiān)測(cè)染色體檢查水平，提高質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)室于2011年起參加了美國病理學(xué)家學(xué)會(huì)(College of American Pathologists，CAP)主辦的細(xì)胞遺傳學(xué)的室間質(zhì)控能力比對(duì)檢驗(yàn)(proficiency test，PT)項(xiàng)目。

1　材料與方法

1.1標(biāo)本來源(1)CAP室間質(zhì)控病例：通過CAP網(wǎng)站(www.cap.org)申請(qǐng)參加PT項(xiàng)目，每年收到3次測(cè)試材料，每次測(cè)試有5～8例病例，病例標(biāo)本種類包括腫瘤、外周血、產(chǎn)前組織等表本，每例病例一般含有5張細(xì)胞中期分裂圖像和簡要的病史資料。(2)臨床病例：本實(shí)驗(yàn)室至今已完成的臨床染色體檢測(cè)15 579例，其中外周血染色體檢測(cè)13 003例，病例主要來自于重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院兒童保健門診、遺傳門診、內(nèi)分泌門診、泌尿外科門診和住院部就診的疑似智力低下、發(fā)育障礙、出生缺陷及智力低下合并出生缺陷的兒童；骨髓染色體檢測(cè)2 576例，病例來自于重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院血液科的血液系統(tǒng)疾病患兒，包括白血病、血小板減少性紫癜(idiopathic trombocytopenic purpura，ITP)、貧血及白血病復(fù)查病例。

1.2方法

1.2.1CAP室間質(zhì)控按照CAP的要求分析染色體核型，采用人類細(xì)胞遺傳學(xué)國際命名體系(International System for Chromosome Nomenclature，ISCN)描述核型，分析條帶要求在400以上，最后結(jié)果以實(shí)際觀察到的最高分別率為準(zhǔn)，在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)(1個(gè)月)在CAP網(wǎng)站上報(bào)結(jié)果。CAP PT結(jié)果從兩個(gè)方面進(jìn)行判斷：(1)染色體核型判斷，主要考核實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)異常染色體的能力；(2)核型描述，主要考核實(shí)驗(yàn)室正確描述核型的能力。CAP有時(shí)還會(huì)有一些不計(jì)入評(píng)分的內(nèi)容和調(diào)查問卷，主要是了解行業(yè)中開展新項(xiàng)目、新技術(shù)的狀況。評(píng)分項(xiàng)目需要80%實(shí)驗(yàn)室回答正確才能成立，每次結(jié)果都附有對(duì)每個(gè)檢測(cè)病例的分析說明。

1.2.2臨床質(zhì)控評(píng)估方法為了滿足CAP要求，本實(shí)驗(yàn)室完善了標(biāo)本在檢驗(yàn)前中后的室內(nèi)質(zhì)控：(1)引進(jìn)了計(jì)算機(jī)數(shù)字核型分析系統(tǒng)，使分析更簡便直觀；(2)建立高分辨染色體制備方法，在恒溫恒濕干燥箱內(nèi)制片，染色體條帶水平有較大提升；(3)骨髓染色體采用多種方法培養(yǎng)，降低培養(yǎng)失敗率；(4)病例采取兩人共同分析，雙審核，降低分析失誤率。本實(shí)驗(yàn)室以條帶水平評(píng)估染色體技術(shù)質(zhì)量，每月隨機(jī)抽取骨髓及外周血染色體病例各10例，根據(jù)英國室間質(zhì)控計(jì)劃(條帶評(píng)估指南)評(píng)估染色體條帶水平[7-8]；定期統(tǒng)計(jì)骨髓及外周血染色體的異常檢出率及失敗率。

2　結(jié)　　果

2.1CAP能力測(cè)試2011～2014年共參加10次CAP能力測(cè)試，分析59例病例，標(biāo)本類型以外周血、骨髓及產(chǎn)前組織標(biāo)本為主，見表1。共54例返回評(píng)審結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)室上交的54例染色體核型分析結(jié)果全部正確，正確率為100%，核型描述正確率為92.6%(50/54)。3例核型描述與標(biāo)準(zhǔn)答案不一致，其中1例上報(bào)核型為 46,X,i(X)(q10)[2]/45,X[3]，CAP判定為45,X[3]/46,X,i(X)(q10)[2]，ISCN規(guī)定異常細(xì)胞株按數(shù)目由多至少排列；另2例由于描述位點(diǎn)未達(dá)到所提供染色體的最高分辨率而不被接受，上報(bào)核型分別為46,XX,t(11;22)(q23;q11.2)、 45,XX,t(3;3)(q21;q26),-7[5]，CAP判定為46,XX,t(11;22)(q23.3;q11.2)、45,XX,t(3;3)(q21;q26.2),-7[5]。還有1例被認(rèn)為可以接受，CAP判定為46,X,+der(4)t(4;11)(q12;q13.5)mat，本實(shí)驗(yàn)室上報(bào)核型為46,X,+der(4)t(4;11)(q13.2;q21),根據(jù)所提供的病史資料，該病例的4號(hào)異常染色體為母親遺傳所致。

2.2臨床標(biāo)本檢測(cè)本實(shí)驗(yàn)室已完成15 252例臨床病例的染色體檢測(cè)，其中外周血染色體13 016例，異常檢出率達(dá)18.9%(2 460/13 016)，以數(shù)目異常為主，占82.0%(2 017/2 460)，其次為結(jié)構(gòu)異常，占18.0%(443/2 460)；骨髓染色體2 236例，異常檢出率為25.9%(580/2 354)，數(shù)目異常占47.2%(274/580)，結(jié)構(gòu)異常占52.8%(306/580)，初診白血病病例異常率高達(dá)66.8%。

表1　　2011～2013年CAP室間質(zhì)評(píng)標(biāo)本及核型類型

2.3染色體檢測(cè)水平提高本實(shí)驗(yàn)室2007～2013年染色體條帶平均水平不斷提升，見圖1。2011～2013年骨髓及外周血條帶水平較2007～2010年均提高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；骨髓染色體條帶平均水平從每單倍體371條帶提高到471條帶，外周血條帶平均水平從每單倍體403條帶提高到515條帶。外周血染色體及骨髓染色體檢測(cè)失敗率分別為0.5%(65/13 082)和5.0%(118/2 354)，保持在較低水平，在2011年參加CAP后染色體檢測(cè)成功率明顯上升，見圖2。骨髓染色體檢測(cè)失敗率從2007～2010年的7.8%(70/899)降低至2011～2013年的3.8%(55/1 455)，外周血染色體檢測(cè)失敗率從2007～2010年的1.0%(64/6 324)下降至2011～2013年的0.03%(2/6 758)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

圖1　　2007～2013年染色體條帶水平

圖2　　2007～2013年染色體檢測(cè)失敗率

3　討　　論

本實(shí)驗(yàn)調(diào)查結(jié)果顯示，外周血染色體的異常檢出率達(dá)18.9%，骨髓染色體的異常檢出率為25.9%，均與國際報(bào)道水平相當(dāng)[6]。2011～2013年骨髓及外周血條帶水平較2007～2010年均提高，骨髓及外周血染色體檢測(cè)失敗率均下降，表明參加CAP后，加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制，使檢測(cè)失敗率有所降低。從以上本實(shí)驗(yàn)室的調(diào)查結(jié)果與經(jīng)驗(yàn)來看，參加室間質(zhì)評(píng)(如CAP PT)項(xiàng)目可以提高細(xì)胞遺傳學(xué)染色體檢測(cè)分析水平[8]，通過增加染色體條帶分辨率，可發(fā)現(xiàn)染色體微小缺失及易位。本實(shí)驗(yàn)室染色體檢查的質(zhì)量指標(biāo)(失敗率及檢出率)達(dá)到國際同類實(shí)驗(yàn)室的水平，這可能與本實(shí)驗(yàn)室不斷改進(jìn)方法，如建立高分辨染色體的檢測(cè)技術(shù)，引進(jìn)數(shù)字化核型分析系統(tǒng)，以及分析人員技術(shù)培訓(xùn)等密不可分。參加國際性PT項(xiàng)目存在標(biāo)本遞送、費(fèi)用較貴等問題，有必要在中國開展國內(nèi)細(xì)胞遺傳學(xué)染色體室間質(zhì)評(píng)項(xiàng)目，本實(shí)驗(yàn)室于2013年協(xié)助國家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)臨床檢驗(yàn)中心開展全國醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室染色體核型分析質(zhì)量調(diào)查評(píng)估活動(dòng)，此次調(diào)查包括5例病例，每例含5張中期分裂象的圖片，采用選擇題的方式，有139家實(shí)驗(yàn)室參與，準(zhǔn)確率均達(dá)95%以上。此次室間質(zhì)評(píng)調(diào)查為今后開展全國細(xì)胞遺傳學(xué)室間質(zhì)評(píng)奠定了基礎(chǔ)。

全國醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室染色體室間質(zhì)量評(píng)價(jià)才剛起步，室間質(zhì)評(píng)的組織形式還需進(jìn)一步完善，評(píng)價(jià)的質(zhì)控物要有一定的代表性和穩(wěn)定性，評(píng)定的方法和標(biāo)準(zhǔn)可以參照CAP細(xì)胞遺傳學(xué)PT的評(píng)定方法，通過室間質(zhì)評(píng)活動(dòng)可以提高細(xì)胞遺傳學(xué)的檢查質(zhì)量，為遺傳疾病及腫瘤診治提供依據(jù)。筆者對(duì)今后室間質(zhì)評(píng)工作提出了以下建議：(1)建立全國統(tǒng)一的細(xì)胞遺傳學(xué)和分子熒光原位雜交的行業(yè)技術(shù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；(2)定期開展室間質(zhì)控活動(dòng)，監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)室染色體檢查水平；(3)開展培訓(xùn)班，提高從業(yè)人員業(yè)務(wù)水平；(4)把室間質(zhì)評(píng)結(jié)果作為臨床實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證的主要指標(biāo)之一；(5)鼓勵(lì)有條件的實(shí)驗(yàn)室參加國際室間質(zhì)評(píng)。

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Assessment of effect of laboratory external quality assessment program on cytogenetic testing*

ChenXi1，ChenYuanyuan1，MuQin1，YangJing1，F(xiàn)anLing1，ZhangDayong1，WangZhiguo3，DouHu1，ZouLin1，BaoLiming1△

(1.CenterforClinicalMolecularMedicine,AffiliatedChildren′sHospitalofChongqingMedicalUniversity/KeyLaboratoryofPediatricsinChongqing/MinistryofEducationKeyLaboratoryofChildDevelopmentandDisorders,Chongqing400014,China；2.DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedChildren′sHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400014；3.CenterforClinicalLaboratoriesofNationalHealthandFamilyPlanningCommission,Beijing100730,China)

ObjectiveTo analyze the change of chromosome test level after participating in the inter-laboratory proficiency test(PT) program of the College of American Pathologists(CAP).MethodsThe results for participating in CAP PT during 2011-2014 were analyzed,the accuracy of the cytogenetic chromosome quality control test in this laboratory was obtained according to the CAP evaluation results,and the effect of CAP external quality assessment item on increasing the chromosome detection level in this laboratory was evaluated by analyzing the chromosome band levels before and after participating in CAP.ResultsThis laboratory participated in CAP PT test for 10 times during 2011-2014,a total of 59 cases were analyzed,the accuracy rate for judging chromosome karyotype was 100%,the karyotype description accuracy rate was 95.1%.The chromosome test results of clinical cases in this laboratory displayed that peripheral blood chromosome abnormal detection rate was 18.9% and bone marrow chromosome abnormal detection rate was 25.9%,the abnormal rate of newly diagnosed leukemia was 66.8%; the detection failure rates of peripheral blood chromosome and bone marrow chromosome were 0.5% and 5.0% respectively; the detection failure rates of peripheral blood chromosome and bone marrow chromosome after participating in CAP were decreased,the chromosome band average level was improved,showing statistical difference compared with those before participating in CAP(P<0.01).ConclusionParticipating in high quality external laboratory assessment item can increase the clinical analytic level of cytogenetic chromosome test.

cytogenetics；external quality assessment；proficiency test

重慶市衛(wèi)生局課題資助項(xiàng)目(2012-2-100)。作者簡介：陳希(1983-)，主管技師，碩士，主要從事血液病及遺傳病研究?！?/p>

，E-mail:lbaogene@yahoo.com。

R394.2

A

1671-8348(2016)21-2917-03

2016-01-16

2016-04-03)

論著·臨床研究doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.21.011