王瑾堃，劉中柱，劉艷姝，史為伍，王　振

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154003)

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尿L-FABP與LAP對(duì)2型糖尿病腎病早期診斷的意義①

王瑾堃，劉中柱，劉艷姝，史為伍，王振

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院腎內(nèi)科，黑龍江 佳木斯 154003)

摘要:目的:探討測定尿肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(liver fatty acid binding proteins,L-FABP)和亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase，LAP)在糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)早期診斷的意義及對(duì)比性研究。方法:收集正常組、單純2型糖尿病組、早期2型糖尿病腎病組、臨床2型糖尿病腎病組各30例，通過ELISA檢測各組尿L-FABP、尿LAP的濃度，并觀察其與尿蛋白排泄率(urinary albumin excretion rates,UAER)相關(guān)性，比較兩個(gè)腎小管標(biāo)記物在DN早期診斷的價(jià)值。結(jié)果:隨著DN腎臟損害程度的加重，尿L-FABP和尿LAP水平逐漸增高(P<0.05)；尿L-FABP與UAER呈正相關(guān)(r=0.64，P <0.01 )；尿LAP與UAER呈正相關(guān)(r=0.31，P <0.01 )。結(jié)論:尿L-FABP與尿LAP水平可反映DN早期腎臟損傷，尿L-FABP與尿LAP相比可較好的作為早期DN診斷指標(biāo)，為指導(dǎo)臨床DN早期診斷提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞:肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白;亮氨酸氨基肽酶;尿蛋白排泄率;糖尿病腎病

糖尿病(diabetes mellitus，DM)，是臨床上一種常見的內(nèi)分泌代謝疾病，其中30%～40%的2型糖尿病將出現(xiàn)腎臟受累，即糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)，它是糖尿病中常見的慢性微血管并發(fā)癥之一，在西方國家，DN是終末期腎臟病(end stage renal disease，ESRD)的首位病因，也是我國繼慢性腎小球腎炎后的第二位病因。有關(guān)于DN的發(fā)生發(fā)展的機(jī)制尚未完全明確，目前公認(rèn)的是由胰島素分泌或(和)作用缺陷，最終導(dǎo)致長期高血糖是DN發(fā)生的始動(dòng)因素，同時(shí)眾多細(xì)胞因子激活、炎癥介質(zhì)釋放、遺傳因素的參與也在DN發(fā)病中發(fā)揮重要作用。在DN中對(duì)占腎臟體積90%的腎小管間質(zhì)病變研究甚少，事實(shí)上，國外有報(bào)道，在DN早期也會(huì)伴有腎小管損害[1]，DN早期病理特征之一是腎臟的肥大，在很大程度上與腎小管上皮細(xì)胞肥大有關(guān)，早期發(fā)生的這些結(jié)構(gòu)變化正是啟動(dòng)和加劇腎小管間質(zhì)纖維化進(jìn)展的一個(gè)關(guān)鍵因素，相關(guān)研究還表明腎小管間質(zhì)病變的嚴(yán)重程度將直接影響DN的預(yù)后。相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，腎小管病變的標(biāo)記物有兩類，一類為低分子蛋白，另一類是腎小管上皮細(xì)胞的各種酶(統(tǒng)稱為尿酶)。此次研究中的肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(liver fatty acid binding proteins,L-FABP)和亮氨酸氨基肽酶(Leucine aminopeptidase，LAP)分別是上述兩類的標(biāo)記物的其中之一，故此本研究觀察DN不同時(shí)期二者的變化情況，對(duì)比探討其在DN早期的預(yù)警作用及臨床意義。

1資料與方法

1.1研究對(duì)象

選取2014-12～2015-12佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院住院收治2型糖尿病患者30例、早期2型糖尿病腎病30例、臨床2型糖尿病腎病30例，和同期本院體檢者30例作為正常對(duì)照粗。本研究設(shè)計(jì)得到生物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2分組

正常對(duì)照組：同期本院體檢者。

單純2型糖尿病組：參照1999年WHO提出的糖尿病診斷及鑒別診斷標(biāo)準(zhǔn):(1)空腹血糖(FPG)≥7.0mmol/L?？崭沟亩x是至少8h未攝入熱量;或(2)OGTT試驗(yàn)中2h血糖≥11.1mmol/L。試驗(yàn)應(yīng)按照世界衛(wèi)生組織(WHO)的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，用含75g無水葡萄糖溶于水中作為糖負(fù)荷;或(3)有高血糖的癥狀或高血糖危象，隨機(jī)血糖≥11. 1mmol/L。如無高血糖癥狀，標(biāo)準(zhǔn)1～2應(yīng)該再次檢測證實(shí)。

早期2型糖尿病腎?。壕鲜澜缧l(wèi)生組組1999年對(duì)2型糖尿病腎病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，UAER30～300mg/24 h。臨床2型糖尿病腎?。壕鲜澜缧l(wèi)生組組1999年對(duì)2型糖尿病腎病的診斷標(biāo)準(zhǔn)，UAER>300 mg/24 h。因24h UAER受尿量收集準(zhǔn)確與否、被檢查對(duì)象活動(dòng)狀態(tài)、取標(biāo)本標(biāo)準(zhǔn)與否等諸多因素影響，近年以檢測清晨第一次尿或隨意一次尿液中蛋白或白蛋白與肌酐比值(Urinary albumin to creatinine ratio,ACR)代替24h UAER[2]。

1.3排除標(biāo)準(zhǔn)

糖尿病病程較短，一般少于5年；短期內(nèi)腎功能迅速惡化；不伴視網(wǎng)膜病變；突然出現(xiàn)水腫和大量蛋白尿而腎功能正常；顯著腎小管功能減退；依從性較差的患者。

1.4相關(guān)指標(biāo)收集及檢測

1.4.1樣品收集

受試者非高熱量飲食一天，女性(非月經(jīng)期)晨起清洗外陰后留取中段尿5mL，男性晨起留取中段尿5mL，用一次性潔凈塑料尿杯留取尿液，并同時(shí)抽取靜脈血5mL,1500r/min離心5min清液存于-80℃冰箱保存，集中使用前避免反復(fù)凍融。其他所需血液及尿液標(biāo)本當(dāng)日檢測。

1.4.2收集臨床資料

收集所有研究對(duì)象的相關(guān)臨床資料，包括基本資料(年齡、性別、體重指數(shù)等)，臨床檢查資料(空腹血糖、糖化血紅蛋白、胰島功能、尿微量白蛋白、尿肌酐等)。

1.4.3尿L-FABP和尿LAP檢測

將待檢測尿液標(biāo)本從-80℃冰箱取出，并在室溫下解凍，將尿L-FABP和尿LAP試劑盒從4℃冰箱取出，在室溫下至少復(fù)溫半小時(shí)，通過ELISA檢測二者OD值，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1各組間一般資料相關(guān)指標(biāo)比較

結(jié)果顯示：本實(shí)驗(yàn)納入健康患者30例作為正常對(duì)照組，90例2型糖尿病病例，各組間性別、年齡、體重指數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

2.2各組間病程、空腹血糖、糖化血紅蛋白指標(biāo)比較

結(jié)果顯示：早期2型DN組及 臨床2型DN組病程較DM對(duì)照組長(P<0.05)；早期2型DN組及臨床2型DN組之間差異不顯著(P>0.05)；糖尿病各組中空腹血糖、糖化血紅蛋白均明顯高于正常對(duì)照組(P<0.05)，糖尿病各組間差異不顯著(P>0.05)。

2.3各組尿L-FABP、LAP、ACR水平情況的檢測

結(jié)果顯示：單純2型DM組、早期2型DN組、臨床2型DN組患者中，尿L-FABP、LAP水平、ACR水平均明顯高于健康體檢者(P<0.05)；并且，隨著糖尿病腎病病情的加重，尿L-FABP、LAP、ACR水平逐漸升高(P<0.05)。見表1。

表1　各組尿L-FABP、LAP、ACR水平情況

注：*與正常對(duì)照組相比較P<0.05；△與單純DM組相比較P<0.05；#與早期DN組相比較P<0.05。

2.4相關(guān)性分析

尿L-FABP與UAER呈正相關(guān)(r=0.64，P<0.01 )；尿LAP與UAER呈正相關(guān)(r=0.31，P<0.01)。

3討論

目前，DM的高發(fā)病率已成為一個(gè)全球性的健康問題，其中，DN是DM患者常見并發(fā)癥之一。目前，我們在臨床上通過腎臟組織活檢來明確DN診斷仍然不能被絕大部分患者所接受，那么我們就需要在血、尿樣本中積極尋找相關(guān)生物學(xué)標(biāo)記物，以便能夠早期的、無創(chuàng)傷性地確認(rèn)腎損傷的存在并動(dòng)態(tài)地觀察其變的進(jìn)程。熟知的mALB雖然可以作為經(jīng)典的腎小球損傷生物學(xué)標(biāo)記物來判斷用于早期DN診斷[3]，但是，其對(duì)于早期腎損傷的定位和程度，它并不具備敏感性，只是在腎小球?yàn)V過功能明顯減退之后才會(huì)出現(xiàn)蛋白尿，并且其受。近年來，許多相關(guān)研究表明，在DN早期階段腎小球、腎小管損傷是同時(shí)出現(xiàn)的，而且腎小管損傷的程度決定著腎纖維化的進(jìn)展，因此，全面深入從腎小管相關(guān)標(biāo)記物研究入手，可以更有助于對(duì)DN早期診斷。

腎小管標(biāo)記物分為兩類，一類是為低分子蛋白，尿L-FABP作為其中一種分子蛋白，在脂類代謝相關(guān)疾病中參與脂肪酸的代謝調(diào)節(jié)，可作為高甘油三酯血癥、脂肪肝和消化道腫瘤等疾病的早期檢測及輔助診斷的一個(gè)重要指標(biāo)。一些研究還表明，在急性腎損傷時(shí)，尿L-FABP表達(dá)水平也明顯增高[4]，而與DN十分相關(guān)的病理生理功能就是它可以作為一種內(nèi)源性抗氧化劑解毒物質(zhì)，在DN早期，長期高血糖可引發(fā)微小血管結(jié)構(gòu)的破壞，同時(shí)慢性高血糖造成許多種蛋白質(zhì)發(fā)生糖基化反應(yīng)，導(dǎo)致糖基化產(chǎn)物大量堆積，最終加重腎小管間質(zhì)缺氧，而L-FABP很可能作為一種有效的內(nèi)源性抗氧化劑在缺氧性疾病中發(fā)揮重要作用，所以當(dāng)腎小管缺氧時(shí)可以上調(diào)腎臟L-FABP基因的表達(dá)水平, 并可增加源自近端小管的尿L-FABP的水平，故此，其有助于DN早期的發(fā)現(xiàn)，并可反映DN損害程度[5]。另一類是腎小管上皮細(xì)胞的各種酶(統(tǒng)稱為尿酶)，作為另一類監(jiān)測腎小管早期損傷的標(biāo)記物，在相關(guān)文獻(xiàn)上報(bào)道過的尿酶有很多種類，其中應(yīng)用較多的為N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)和丙氨酸氨基肽酶(AAP)。目前對(duì)LAP的臨床應(yīng)用主要局限在肝膽系統(tǒng)疾病上，但測定尿中LAP用于腎臟損害的診斷，國內(nèi)僅見個(gè)別報(bào)道，研究表明其主要位于腎小管上皮細(xì)胞的溶酶體內(nèi)，在病理情況下，由于各種原因?qū)е履I實(shí)質(zhì)尤其是腎小管受損時(shí)，可引起大量LAP通過尿液排出，常在亞臨床期就可出現(xiàn)尿酶排泄增多[6]，故此可早期反映腎損害的性質(zhì)和程度。因此，測定尿中LAP，可以初步探討尿LAP對(duì)DN早期診斷臨床意義及應(yīng)用價(jià)值。

生活方式改善、有效控制血糖是DM和DN治療及基礎(chǔ)，但是若能做到早期發(fā)現(xiàn)DN，對(duì)延緩其進(jìn)展是至關(guān)重要的，本實(shí)驗(yàn)將對(duì)DN的側(cè)重點(diǎn)放在研究腎小管方面，檢測二者方法簡單，靈敏度較高，尿液收集簡便、無創(chuàng)、快速等優(yōu)點(diǎn)，有望成為DN早期發(fā)現(xiàn)的理想生物標(biāo)記物。

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基金項(xiàng)目：①佳木斯大學(xué)研究生科技創(chuàng)新項(xiàng)目，編號(hào)：LM2015-044。

作者簡介：王瑾堃(1988～)女，黑龍江伊春人，在讀碩士研究生。 通訊作者：劉中柱(1964～)男，黑龍江嫩江人，學(xué)士，教授，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:liuzhongzhu75@163.com。

中圖分類號(hào)：R587.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1008-0104(2016)04-0138-02

(收稿日期：2016-02-02)