胡楚勝，朱燕莉

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樂復(fù)能對(duì)克羅恩病的免疫調(diào)節(jié)作用及臨床療效

胡楚勝1，朱燕莉2*

1.鄂州市華容區(qū)人民醫(yī)院消化內(nèi)科，湖北 鄂州

[摘要]目的觀察樂復(fù)能對(duì)克羅恩病的臨床療效以及免疫調(diào)節(jié)作用。方法收集2013年1月至2015年3月黃石市中心醫(yī)院消化內(nèi)科診治的克羅恩病患者76例，使用數(shù)字法隨機(jī)分為觀察組和對(duì)照組，每組38例。流式細(xì)胞儀檢測(cè)Th17和Treg細(xì)胞；ELISA法檢測(cè)IL-17、IL-10和IL-6的表達(dá)；比較兩組患者的臨床療效、復(fù)發(fā)率和不良反應(yīng)。結(jié)果兩組患者治療前Th17和Treg細(xì)胞比例以及IL-17、IL-10、IL-6表達(dá)水平比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，治療后觀察組在Th17細(xì)胞、IL-17和IL-6的降低方面以及Treg和IL-10的升高方面優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05)。觀察組臨床治療有效率為92.1%，顯著高于對(duì)照組的73.7%(P<0.05)。觀察組復(fù)發(fā)率為7.9%，顯著低于對(duì)照組的23.7%(P<0.05)。觀察組臨床不良反應(yīng)發(fā)生率為10.5%，顯著低于對(duì)照組的31.6%(P<0.05)。結(jié)論樂復(fù)能可以改善克羅恩病患者Th17、Treg細(xì)胞以及IL-17、IL-10因子失衡，臨床療效顯著，使用安全，具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。

[關(guān)鍵詞]克羅恩病；樂復(fù)能；Th17細(xì)胞；Treg細(xì)胞

0引言

克羅恩病(Crohn′s disease，CD)是炎癥性腸病的一種，表現(xiàn)為消化道慢性非特異性炎癥，目前病因尚不明確，涉及到遺傳、環(huán)境、免疫調(diào)節(jié)紊亂等多種因素[1]，臨床表現(xiàn)為腹痛、腹瀉、腹部包塊、腸梗阻以及腸外損害等[2]。目前克羅恩病缺乏特效的治療藥物[3]，傳統(tǒng)的類固醇皮質(zhì)激素和柳氮磺胺嘧啶等藥物對(duì)其誘導(dǎo)緩解有效，但仍有相當(dāng)一部分患者不能夠達(dá)到理想的治療效果[4-5]。樂復(fù)能(Novaferon)是一種新型的免疫調(diào)節(jié)生物制劑，動(dòng)物研究顯示，樂復(fù)能可以減低炎癥性腸炎小鼠模型的炎癥狀態(tài)[6]，因此本研究觀察樂復(fù)能對(duì)克羅恩病患者的免疫調(diào)節(jié)作用以及臨床療效，以期為樂復(fù)能治療克羅恩病提供更多的循證醫(yī)學(xué)證據(jù)。

1材料和方法

1.1臨床病例資料收集2013年1月至2015年3月黃石市中心醫(yī)院消化內(nèi)科診治的克羅恩病患者76例，克羅恩病診斷參照《炎癥性腸病診斷及治療的共識(shí)意見(2012)》[7]。排除標(biāo)準(zhǔn)：1個(gè)月內(nèi)曾應(yīng)用過糖皮質(zhì)激素、柳氮磺胺吡啶和免疫抑制劑治療者，克羅恩病活動(dòng)指數(shù)(CDAI)<150或>450者，伴發(fā)免疫功能缺陷及其他免疫異常性疾病者，伴發(fā)其他急、慢性炎癥疾病以及其他炎癥性腸病者。76例患者使用數(shù)字法隨機(jī)分為常規(guī)治療組(對(duì)照組)和樂復(fù)能治療組(觀察組)，每組38例。對(duì)照組男16例，女22例，年齡18～67歲，平均(42.6±9.7)歲，平均病程(1.64±0.41)年，平均CDAI(264.53±52.14)分；觀察組男14例，女24例，年齡18～66歲，平均(42.1±9.2)歲，平均病程(1.70±0.46)年，平均CDAI(277.12±60.26)分。兩組患者在性別、年齡、病程和CDAI臨床資料方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2治療方法對(duì)照組口服柳氮磺胺吡啶抗炎，1 g/次，4次/d。觀察組應(yīng)用樂復(fù)能10 μg肌注，每周2次，4周為1個(gè)療程，連續(xù)用藥2個(gè)療程。記錄不良反應(yīng)并評(píng)價(jià)臨床療效。2個(gè)療程后隨訪半年，記錄兩組復(fù)發(fā)情況。

1.3臨床療效分析治療8周后評(píng)估兩組患者的臨床療效。顯效：臨床癥狀體征消失，結(jié)腸鏡檢黏膜恢復(fù)正常；好轉(zhuǎn)：臨床癥狀體征顯著減輕，結(jié)腸鏡檢黏膜輕度炎癥；無效：臨床癥狀體征以及結(jié)腸鏡檢無明顯好轉(zhuǎn)，甚至加重。有效率=(顯效+好轉(zhuǎn))/總例數(shù)×100%。

1.4輔助性T細(xì)胞(Th17)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果采集患者治療前、治療8周后靜脈血2 mL，裂解紅細(xì)胞，0.8 mL PBS緩沖液懸浮細(xì)胞，各取200 mL懸浮細(xì)胞按照說明書加入FITC-CD4和PE-CD17抗體(抗體購自美國(guó)RD公司)各10 μL，以及加入抗體相應(yīng)的同型對(duì)照。再各取200 mL懸浮細(xì)胞按照說明書加入FITC-CD4和APC-CD25抗體(抗體購自美國(guó)RD公司)各10 μL，同時(shí)加入抗體相應(yīng)的同型對(duì)照。抗體避光染色30 min，使用美國(guó)B-D公司FACSCalibur流式細(xì)胞儀檢測(cè)Th17細(xì)胞(CD4+、CD17+)和Treg細(xì)胞(CD4+、CD25+)比例的變化。

1.5白介素-17(IL-17)、IL-10和IL-6表達(dá)的檢測(cè)采集患者治療前、治療8周后靜脈血2 mL，使用ELISA法檢測(cè)IL-17、IL-10和IL-6因子的表達(dá)，試劑盒購于上海西塘生物科技有限公司，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，使用分光光度計(jì)檢測(cè)上述因子表達(dá)水平的變化。

2結(jié)果

2.1兩組治療前后Th17、Treg細(xì)胞比例的變化治療前，兩組Th17和Treg細(xì)胞比例比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，兩組Th17細(xì)胞比例顯著減低，Treg細(xì)胞比例顯著升高(P<0.05或P<0.01)，且兩組Th17、Treg比例比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1　兩組治療前后Th17和Treg細(xì)胞比例比較(例)

注：與治療前比較，*P<0.05，**P<0.01；與對(duì)照組比較，#P<0.05

2.2兩組治療前后IL-17、IL-10和IL-6表達(dá)變化治療前，兩組患者IL-17、IL-10和IL-6表達(dá)水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后，兩組均出現(xiàn)IL-17、IL-6減低和IL-10升高(P<0.05或P<0.01)，且兩組IL-17、IL-6及IL-10比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2　兩組治療前后IL-17、IL-10和IL-6表達(dá)比較(μg/mL)

注：與治療前比較，*P<0.05，**P<0.01；與對(duì)照組比較，#P<0.05

2.3兩組臨床療效比較對(duì)照組有效率為73.7%，顯著低于觀察組的92.1%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

2.4兩組復(fù)發(fā)率比較對(duì)照組復(fù)發(fā)9例，復(fù)發(fā)率為23.7%，觀察組復(fù)發(fā)3例，復(fù)發(fā)率為7.9%，觀察組復(fù)發(fā)率顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

2.5兩組臨床不良反應(yīng)觀察對(duì)照組發(fā)熱3例，惡心嘔吐5例，食欲不振3例，肝功能輕度異常1例，不良反應(yīng)發(fā)生率為31.6%；觀察組惡心嘔吐2例，皮疹1例，肝功能輕度異常1例，不良反應(yīng)發(fā)生率為10.5%。觀察組不良反應(yīng)發(fā)生率顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

表3　兩組臨床療效比較(例，%)

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05

3討論

Th17、Treg細(xì)胞是一種新發(fā)現(xiàn)的CD4+T細(xì)胞亞群成員[8]，Th17細(xì)胞通過分泌IL-17促進(jìn)炎癥反應(yīng)，Treg細(xì)胞通過分泌IL-10抑制炎癥反應(yīng)，Th17/Treg細(xì)胞及其分泌的IL-17/IL-10因子在體內(nèi)維持著一定的平衡[9]。已有研究顯示，克羅恩病患者體內(nèi)存在Th17/Treg細(xì)胞以及IL-17/IL-10因子的失衡[10-11]。本研究的結(jié)果顯示，治療后觀察組IL-17因子低于對(duì)照組，同時(shí)IL-10因子高于對(duì)照組。IL-6致炎因子是IL-17/IL-10平衡調(diào)控的下游因子[12]，本研究中觀察組IL-6也低于對(duì)照組，說明樂復(fù)能有利于克羅恩病患者Th17/Treg細(xì)胞及IL-17/IL-10因子失衡狀態(tài)的恢復(fù)，對(duì)克羅恩病患者的炎癥狀態(tài)有顯著的抑制作用。李富軍等[6]的研究也表明，樂復(fù)能可以顯著降低克羅恩病模型小鼠炎性因子的表達(dá)。

克羅恩病缺乏特效的治療藥物，尋找新的治療方法和藥物一直是消化內(nèi)科醫(yī)生關(guān)注的熱點(diǎn)[13]。柳氮磺吡啶在腸微生物作用下分解成5-氨基水楊酸，后者停留在腸壁組織中起到抗菌消炎和免疫抑制作用，是臨床上常用的治療輕、中度活動(dòng)期克羅恩病患者的氨基水楊酸鹽類藥物[14]。近年來，生物治療成為克羅恩病治療的熱點(diǎn)，并取得了不錯(cuò)的臨床效果[15]。樂復(fù)能是采用基因穿梭法，從12種人α干擾素基因中得到的新型生物制劑，具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)功能。本研究顯示，樂復(fù)能治療克羅恩病的臨床療效優(yōu)于傳統(tǒng)水楊酸。傳統(tǒng)的氨基水楊酸類藥物長(zhǎng)期應(yīng)用的不良反應(yīng)較多，而且患者復(fù)發(fā)率高。本研究觀察到樂復(fù)能治療克羅恩病的臨床不良反應(yīng)發(fā)生率低于傳統(tǒng)水楊酸治療，且隨訪半年后復(fù)發(fā)率較低。

總之，樂復(fù)能可以改善克羅恩病患者Th17/Treg細(xì)胞以及IL-17/IL-10因子失衡，臨床療效顯著，使用安全，具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。

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Immunomodulatory effects and clinical efficacy of novaferon in the treatment of Crohn′s disease

HU Chu-sheng1,ZHU Yan-li2*

(1.Department of Gastroenterology,Ezhou Huarong People′s Hospital,Ezhou 436030,China;2.Department of Endoscopy Center,Huangshi Central Hospital,Huangshi 435000,China)

[Abstract]ObjectiveTo observe the immunomodulatory effects of novaferon on patients with Crohn′s disease and its clinical efficacy.MethodsSeventy-six patients with Crohn′s disease in Huangshi Central Hospital from January 2013 to March 2015 were randomly divided into observation group (n=38) and control group (n=38).The Th17 and Treg cells were detected by cytometry.The expression of IL-17,IL-10 and IL-6 was detected by ELISA.The clinical effect,recurrence rate and adverse reactions of the two groups were compared.ResultsBefore treatment,there was no significant difference in Th17 and Treg cells ratio,or the expression of IL-17,IL-10 and IL-6(P>0.05).After treatment,the levels of Th17 cells,IL-17 and IL-6 in observation group were higher than those of control group with lower levels of Treg cells and IL-10 (P<0.05).The clinic effective rate of observation group was higher than that of control group (92.1% vs. 73.7%,P<0.05).The recurrence rate in observation group was lower than that of control group (7.9% vs. 23.7%P<0.05).The adverse reactions rate of observation group was lower than that of control group(10.5% vs. 31.6%,P<0.05).ConclusionNovaferon can regulate Th17/Treg and improve IL-17/IL-10 immune balance,with significant clinical efficacy and safety in treating patients with Crohn′s disease.

Key words：Crohn′s disease;Novaferon;Th17 cells;Treg cells

收稿日期：2015-10-09

*通信作者

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201606017

436030；2.湖北省黃石市中心醫(yī)院內(nèi)鏡中心，湖北 黃石 435000