杜榴恩
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(1,3)-β-D葡聚糖檢測(cè)聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)獲得性免疫缺陷綜合征合并侵襲性真菌病診斷的價(jià)值*
杜榴恩①
【摘要】目的:探討分析(1,3)-β-D葡聚糖(BDG)檢測(cè)(G試驗(yàn))聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)于獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)合并侵襲性真菌病(IFD)的臨床診斷價(jià)值。方法:選擇本院收治的疑似合并IFD的AIDS患者59例作為研究對(duì)象,同時(shí)實(shí)施G試驗(yàn)及CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。按照IFD診斷標(biāo)準(zhǔn),將患者分為IFD組31例及非IFD組28例。分析IFD組和非IFD組的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果及不同檢測(cè)方法的陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果:IFD組CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著低于非IFD組,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);IFD組患者的G試驗(yàn)結(jié)果顯示陽(yáng)性率為74.19%,聯(lián)合診斷結(jié)果顯示陽(yáng)性率為90.32%;非IFD組患者G試驗(yàn)結(jié)果顯示陽(yáng)性率為17.86%,聯(lián)合診斷結(jié)果顯示陽(yáng)性率為10.71%,兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論:G試驗(yàn)聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)于確診AIDS合并IFD,具有極高的價(jià)值,值得推廣應(yīng)用。
【關(guān)鍵詞】(1,3)-β-D葡聚糖; CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù); AIDS; IFD
①?gòu)V東省肇慶市第一人民醫(yī)院 廣東 肇慶 526060
Medical Innovation of China, 2016,13(16):035-038
First-author's address:The First People's Hospital of Zhaoqing City,Zhaoqing 526060,China
侵襲性真菌疾?。↖FD)是人類免疫缺陷病毒(HIV)感染者/獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)患者的常見(jiàn)合并癥之一,該病也是導(dǎo)致AIDS患者死亡的重要原因,具有較高的致死率[1]。研究認(rèn)為,IFD發(fā)病較為隱匿,不具有典型的臨床表現(xiàn),目前還無(wú)成功率較高的治療方式。因此,其早期以及特異性的診斷,有助于改善預(yù)后。既往常規(guī)應(yīng)用真菌培養(yǎng)以及病理活檢方式實(shí)施IFD檢查,但實(shí)施真菌培養(yǎng),其陽(yáng)性檢出率低,需要較長(zhǎng)的時(shí)間;實(shí)施病理活檢,則具有創(chuàng)傷性,而且難以操作,這兩種方法均不能取得理性的效果。目前,較多的前沿研究均將非培養(yǎng)診斷作為IFD診斷的研究方向,其中(1,3)-β-D葡聚糖(BDG)檢測(cè)(G試驗(yàn))已得到廣泛應(yīng)用,并已經(jīng)成為IFD的一種診斷標(biāo)準(zhǔn)。本院積極探討分析(1,3)-β-D葡聚糖(BDG)檢測(cè)(G試驗(yàn))聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)于獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)合并侵襲性真菌?。↖FD)的臨床診斷價(jià)值,取得了具有推廣價(jià)值的經(jīng)驗(yàn),基本情況如下。
1.1一般資料 本研究中所涉及的對(duì)象均為本院2014年8月-2015年8月期間收治的疑似合并IFD 的AIDS患者,共59例,其中男40例,女19例;患者年齡18~65歲,平均(48.5±5.5)歲。所有研究對(duì)象均符合美國(guó)疾病預(yù)防與控制中心(CDC)制定的AIDS相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn),具有抗HIV陽(yáng)性,并經(jīng)本院實(shí)驗(yàn)室篩查確診。參照《血液病/惡性腫瘤患者侵襲性真菌感染的診斷標(biāo)準(zhǔn)與治療原則》,將所有研究對(duì)象分為非IFD組(28例)和IFD組(31例)[2]。其中IFD診斷標(biāo)準(zhǔn)為:通過(guò)組織病理學(xué)檢查發(fā)現(xiàn)真菌或者無(wú)菌組織培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)真菌;患者有IFD宿主/環(huán)境因素、臨床及影像學(xué)表現(xiàn),均有臨床診斷意義的微生物學(xué)依據(jù)(排除G試驗(yàn));患者具有IFD宿主/環(huán)境因素、臨床及影像學(xué)表現(xiàn),沒(méi)有微生物學(xué)依據(jù)。
1.2方法 (1)樣本采集:將疑似合并IFD 的AIDS患者采集肝素鈉和乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝血漿樣本各2 mL,分別實(shí)施G試驗(yàn)以及CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。同時(shí)送檢痰液實(shí)施真菌培養(yǎng)及涂片,另外送檢血液、骨髓、尿液、大便、胸腔積液、腹水、腦脊液真菌培養(yǎng)及涂片。(2)G試驗(yàn):應(yīng)用含肝素鈉真空玻璃管采集血液2 mL送檢,應(yīng)用MB-80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)以及G試驗(yàn)試劑盒實(shí)施檢測(cè)。當(dāng)BDG≥20 pg/mL時(shí),則可判定結(jié)果為G試驗(yàn)陽(yáng)性。(3)CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù):抽取EDTA-K2抗凝靜脈血2 mL送檢,應(yīng)用FACSCantoⅡ流式細(xì)胞儀、6色TBNK試劑和FRCS溶血素檢測(cè)CD4+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù),單位為cell/μL。(4)真菌培養(yǎng)及鑒定:對(duì)提取到的患者血液、骨髓、腦脊液、痰液以及其他深部組織液實(shí)施真菌培養(yǎng),應(yīng)用全自動(dòng)微生物分析系統(tǒng)以及真菌鑒定片實(shí)施真菌鑒定,按照真菌形態(tài)以及菌落特征等對(duì)菌種進(jìn)行確定。
1.3觀察指標(biāo) 分析IFD組和非IFD組的CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果及不同檢測(cè)方法的陽(yáng)性率檢測(cè)結(jié)果。
1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析,計(jì)量資料采用(±s)表示,比較采用t檢驗(yàn),計(jì)數(shù)資料采用 字2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2.1兩組的一般情況 IFD組中G試驗(yàn)陽(yáng)性患者為23例,其中確診IFD者共10例,病原菌方面:含念珠菌2例,曲霉1例,新生隱球菌2例,毛霉1例,馬爾尼菲青霉4例;臨床診斷IFD者共10例,可疑病原菌方面:含念珠菌2例,曲霉2例,馬爾尼菲青霉1例,細(xì)菌真菌混合感染5例,2例死亡;擬診IFD者共3例,含1例胃鏡確診真菌感染,2例存在影像學(xué)改變。非IFD組中G試驗(yàn)陽(yáng)性患者為3例,25例存在肺部感染,23例存在口腔真菌感染,該組患者深部真菌其他檢查均表現(xiàn)為陰性,22例得以緩解,5例因病菌感染加重,1例因多器官功能衰竭死亡。
2.210例確診IFD患者G試驗(yàn)結(jié)果情況 10例IFD確診患者中,有7例G試驗(yàn)陽(yáng)性(陽(yáng)性率70.00%),3例G試驗(yàn)假陰性(假陰性率30.00%),其BDG范圍為15.53~>1000.00 pg/mL,見(jiàn)表1。
表1 10例IFD確診患者真菌感染G試驗(yàn)BDG結(jié)果情況
2.3AIDS患者IFD與CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)分析 IFD 組CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著低于非IFD組,兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表2。
表2 AIDS患者IFD與CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)分析 例
2.4G試驗(yàn)聯(lián)合CD+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷IFD的結(jié)果比較 IFD組患者的G試驗(yàn)結(jié)果顯示陽(yáng)性率為74.19%,聯(lián)合診斷結(jié)果顯示陽(yáng)性率為90.32%;非IFD組患者G試驗(yàn)結(jié)果顯示陽(yáng)性率為17.86%,聯(lián)合診斷結(jié)果顯示陽(yáng)性率為10.71%,兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表3。
表3 G試驗(yàn)聯(lián)合CD+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)診斷IFD的結(jié)果比較 例(%)
AIDS患者的特征性生理病理變化即重度免疫功能缺陷,HV-1能夠通過(guò)膜上的一種糖蛋白gp120 與CD4+細(xì)胞結(jié)合,CD4屬于gp120的受體。人類CD4+細(xì)胞則主要為輔助性T細(xì)胞(Th),在HV-1進(jìn)入到輔助性T細(xì)胞之后,會(huì)隨著病毒而不斷的被復(fù)制,借助于細(xì)胞凋亡機(jī)制而出現(xiàn)破壞,引發(fā)體內(nèi)Th/Ts比例倒置,從而出現(xiàn)嚴(yán)重的免疫缺陷,顯著提高機(jī)體的感染及某些腫瘤易感性,最終導(dǎo)致患者死亡。目前AIDS傳染研究,已經(jīng)證實(shí)血液、精液以及宮頸分泌物均能夠傳染,傳染途徑則包括:性接觸傳播、經(jīng)血液傳播以及母嬰傳播。針對(duì)這些情況,想要對(duì)患者實(shí)施早期診斷,有效控制傳播發(fā)展,則必須實(shí)施有效的臨床檢測(cè)。目前患者臨床檢測(cè)中主要方式為G試驗(yàn),即對(duì)患者真菌細(xì)胞壁成分BDG實(shí)施有效檢測(cè),聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè),更有助于提高患者的臨床檢測(cè)陽(yáng)性率,從而及早發(fā)現(xiàn)AIDS患者,實(shí)施有效治療及控制傳染。
G試驗(yàn)主要用于檢測(cè)真菌細(xì)胞壁成分BDG,人體吞噬細(xì)胞在吞噬真菌后,將持續(xù)釋放該物質(zhì),從而提升血液及體液中的BDG含量,但是針對(duì)淺部真菌感染而言,則不會(huì)存在類似現(xiàn)象。G試驗(yàn)主要適用于除新生隱球菌和接合菌之外的所有深部真菌感染早期診斷,尤其是針對(duì)念珠菌、鐮刀菌、毛抱子菌等具有明顯診斷效果,但該方式無(wú)法辨別和確定菌種。相關(guān)研究認(rèn)為,G試驗(yàn)對(duì)于惡性血液病患者合并IFD而言,其診斷敏感性以及特異性均較高,該方法對(duì)于侵襲性真菌而言,是一種高效的非培養(yǎng)檢測(cè)方式和手段[3]。
對(duì)于AIDS患者而言,其免疫功能具有嚴(yán)重缺陷,該類患者需要實(shí)施終身治療[4]。T淋巴細(xì)胞中,起輔助誘導(dǎo)作用的CD4+T淋巴細(xì)胞進(jìn)行性減少,免疫功能下降,而IFD發(fā)生率顯著提升[5-7]。研究認(rèn)為,CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)是目前條件下用于監(jiān)測(cè)AIDS感染的重要參數(shù),CD4+T淋巴細(xì)胞水平同IFD之間具有緊密關(guān)系,同時(shí)也與AIDS合并IFD的發(fā)生情況以及存活時(shí)間等具有密切關(guān)系[8-13]。由此可以明顯看出CD4+T淋巴細(xì)胞在AIDS合并IFD檢測(cè)及預(yù)后評(píng)估中具有重要檢測(cè)價(jià)值。
G試驗(yàn)對(duì)IFD早期診斷具有重要參考價(jià)值,但現(xiàn)實(shí)中存在假陽(yáng)性以及假陰性問(wèn)題,對(duì)該檢測(cè)方法的推廣應(yīng)用造成了制約[14-15]。真菌感染與病原菌的毒力以及患者免疫水平存在密切關(guān)系,所以CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)能夠作為AIDS合并IFD的重要預(yù)測(cè)指標(biāo)。本研究認(rèn)為,G試驗(yàn)聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù),對(duì)AIDS合并IFD具有較高的診斷能力,可以作為AIDS患者IFD搶先治療的依據(jù)。
本次研究中,G試驗(yàn)對(duì)IFD組患者的臨床診斷陽(yáng)性率為74.19%,陰性率為25.81%,其敏感度低主要為AIDS患者的新生隱球菌感染率比較高,并且和后壁莢膜使實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)假陰性有一定相關(guān)性,本次患者臨床診斷過(guò)程中2例被診斷為新生隱球菌陽(yáng)性。患者的新生隱球菌具有厚莢膜,很難進(jìn)行BDG釋放入血,對(duì)患者實(shí)施磺胺類藥物抗感染治療,并且對(duì)其檢測(cè)BDG值是在臨界范圍上,所以可以確定患者為假陰性結(jié)果。由本臨床研究結(jié)果可以明顯看出,G試驗(yàn)聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)在AIDS合并IFD臨床診斷中的陽(yáng)性率顯著高于單純的G試驗(yàn)檢測(cè),G試驗(yàn)聯(lián)合CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)對(duì)于確診AIDS合并IFD具有極高的價(jià)值,值得推廣應(yīng)用。但也要注意對(duì)患者的臨床確診越早越好,實(shí)施G試驗(yàn)診斷時(shí)會(huì)受到多種因素的影響,同時(shí)也無(wú)法避免因?yàn)榛颊哒婢腥緦?dǎo)致的假陰性情況,對(duì)其臨床診斷率具有一定的影響,從而影響診斷準(zhǔn)確率以及治療效果。因此可以結(jié)合多種檢測(cè)方式共同診斷,以提高患者的早期診斷準(zhǔn)確率,并及時(shí)對(duì)患者實(shí)施有效治療。
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Significance of the Detection of (1,3)-β-D Glucan and CD4+T Lymphocyte Count for the Diagnosis of Invasive Fungal Disease in Patients with AIDS
DU Liu-en
【Key words】(1,3)-β-D glucan; CD4+T lymphocyte count; Acquired immune deficiency syndrome(AIDS); Invasive fungal disease(IFD)
【Abstract】Objective:To discuss the diagnosis significance of the detection of (1,3)-β-D glucan (BDG) and CD4+T lymphocyte count for the diagnosis of invasive fungal disease (IFD) in patients with Acquired Immune Deficiency Syndrome (AIDS).Method:Patients with AIDS suspected to suffer from IFD treated in our hospital were selected as the study objects,G test and CD4+T lymphocyte count were performed and detected simultaneously. According to the diagnosis standard of IFD, the patients were divided into IFD group of 31 cases and non-IFD group of 28 cases.G test for diagnosing IFD was analyzed for sensitivity and specificity. The results of CD4+T lymphocyte count and the positive rate of different detection methods of two groups were analyzed.Result:The CD4+T lymphocyte count in IFD group was significantly lower than that in non IFD group,the difference was statistically significant(P<0.05);G test results showed that the positive rate of IFD group was 74.19%, and the positive rate was 90.32%,G test results showed that the positive rate was 17.86% in the non IFD group,and the positive rate was 10.71%,the differences were statistically significant(P<0.05). Conclusion:G test combined CD4+T lymphocyte count has great value in diagnosing IFD with AIDS,it is worthy of generalizing and applying.
doi:10.3969/j.issn.1674-4985.2016.16.010
*基金項(xiàng)目:肇慶市科學(xué)技術(shù)局課題(201504030808)
通信作者:杜榴恩
收稿日期:(2015-12-08) (本文編輯:周亞杰)
中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新2016年16期