鞠健勝,顧亞萍,霍小兵

(江蘇省泰興市中醫(yī)院,江蘇泰興 225400)

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·臨床研究·

乙肝病毒外膜大蛋白檢測的臨床應用

鞠健勝,顧亞萍,霍小兵

(江蘇省泰興市中醫(yī)院,江蘇泰興 225400)

摘要:目的通過對乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)和HBV-DNA 以及乙肝血清免疫標志物的檢測，研究HBV-LP在判斷HBV感染時的臨床意義。方法對138份乙肝患者血清HBV-DNA 采用熒光定量PCR法進行檢測，同時采用酶聯(lián)免疫吸附法對以上標本進行HBV-LP和HBV血清免疫標志物(HBV-M)檢測。結(jié)果HBV-LP與HBV-DNA 的陽性率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，不同HBV-M模式的HBV-LP與HBV-DNA的檢出結(jié)果比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結(jié)論HBV-LP可作為乙肝患者病毒復制的指標，具有與HBV-DNA類似的應用價值，較E抗原具有更高的靈敏度。

關鍵詞:乙肝病毒外膜大蛋白；乙肝血清免疫標志物；臨床應用

乙型病毒性肝炎是我國常見的消化道傳染病，中華人民共和國傳染病防治法將其列為二類傳染病。其有較高的傳染性，與多種疾病密切相關，嚴重影響著人類的健康和壽命。長期以來，臨床上以檢測乙肝病毒血清免疫標志物來判斷乙肝患者病毒復制的狀況。但隨著抗病毒藥物的大量使用，乙肝病毒發(fā)生變異的情況經(jīng)常出現(xiàn)。乙肝血清免疫標志物檢測已不能真實反映患者體內(nèi)病毒的復制情況，是否具有傳染性更不能以此為依據(jù)。而熒光定量PCR法檢測HBV-DNA是測定患者病毒復制狀況的最精確的指標，對判斷乙肝患者是否具有傳染性有直接指導意義，抗病毒治療的臨床療效觀察亦以此為依據(jù)。核酸檢測的資質(zhì)和設備許多基層醫(yī)院尚不具備，限制著HBV-DNA檢測的廣泛開展。乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP) 是HBV的包膜蛋白,包括PreS1 蛋白與PreS2 蛋白以及表面抗原。乙肝病毒的感染、復制及預后均與HBV-LP的前S 蛋白密切相關[1]。本文檢測了138例乙肝患者HBV-LP和HBV-DNA水平以及血清免疫標志物，探討三者的相互關系，以發(fā)現(xiàn)HBV-LP與乙肝病毒復制的關系和臨床意義。

1材料與方法

1.1材料本院門診138例乙型病毒性肝炎患者，時間為2015年1～7月。其中女63 例，男75例，年齡16～57歲。均符合中華醫(yī)學會肝病分會，感染病學分會共同修訂的 “慢性乙型肝炎防治指南”中的病毒性肝炎診斷標準[2]。采集所有患者空腹靜脈血5 mL，3 000 r/min離心10 min，分離血清并置于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2方法乙肝血清標志物檢測試劑盒由上?？迫A生物技術有限公司提供，方法采用酶聯(lián)免疫吸附法。HBV-DNA定量檢測試劑盒由浙江伊利康生物技術有限公司提供，方法采用實時熒光定量PCR法，檢測下限為500 IU/mL。HBV-LP檢測試劑盒由北京熱景生物技術有限公司提供，方法采用酶聯(lián)免疫吸附法。

1.3統(tǒng)計學處理采用SPSS13.0 軟件進行統(tǒng)計學分析。計數(shù)資料采用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1HBV-LP與HBV-DNA陽性率的比較138例乙肝患者血清HBV-LP的陽性率為73.9%(102/138)，HBV-DNA的陽性率為68.8%(95/138)，兩者比較差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.96，P>0.05)。兩者檢出一致率為70.3%。

2.2不同血清標志物模式組HBV-DNA與HBV-LP陽性率的比較138例乙肝患者血清標志物模式分為3組：第1組(俗稱大三陽組)，表面抗原陽性，E抗原陽性，E抗體陰性，核心抗體陽性或陰性組；第2組，表面抗原陽性，E抗原陰性，E抗體陰性，核心抗體陽性組；第3組(俗稱小三陽組)，表面抗原陽性，E抗原陰性，E抗體陽性，核心抗體陽性組。第1組，HBV-DNA陽性率為89.2%(58/65)，HBV-LP陽性率為92.3%(60/65)。第2組，HBV-DNA陽性率為70.0%(21/30)，HBV-LP陽性率為76.7%(23/30)。第3組， HBV-DNA陽性率為34.1%(16/47)，HBV-LP陽性率為40.4%(19/47)。

表1　不同血清標志物模式組HBV-LP與HBV-DNA

*：P<0.05，與第1組比較。

3討論

乙肝病毒血清標志物檢測作為經(jīng)典的診斷乙型肝炎指標，是人體對乙肝病毒免疫狀態(tài)的直接反映。臨床通過乙肝病毒E抗原的轉(zhuǎn)換判斷體內(nèi)乙肝病毒的復制情況，觀察患者是否具有傳染性。但隨著研究的深入，發(fā)現(xiàn)乙肝病毒血清標志物檢測有許多臨床問題無法解決[3]。而熒光定量PCR法檢測HBV-DNA水平是衡量患者體內(nèi)病毒復制狀況的最精確的指標，對判斷患者是否具有傳染性有直接指導意義，為臨床抗病毒治療療效評估的最重要指標[4]。但由于核酸檢測的資質(zhì)和設備許多基層醫(yī)院尚不具備，極大限制著HBV-DNA檢測的廣泛開展。

HBV-LP是乙肝病毒的包膜蛋白,空間上具有2種不同跨膜結(jié)構(gòu)，其外側(cè)能夠與易感細胞受體結(jié)合，而內(nèi)側(cè)能夠與HBV核殼體膜結(jié)合。包括表面抗原和前S蛋白(PreS1 蛋白和PreS2 蛋白)，是HBV Dane氏顆粒和亞病毒顆粒的主要包膜成分[5]。該蛋白在病毒組裝時，是基質(zhì)類似蛋白；在病毒進入時作為受體蛋白起作用；同時還行使調(diào)節(jié)功能。HBV-LP的前S區(qū)具有獨特的立體構(gòu)象拓撲結(jié)構(gòu)，在組裝病毒外殼時，分泌出組裝完整的病毒外殼。HBV-LP還具有反式激活作用，能夠激活多種啟動子，具有轉(zhuǎn)錄激活功能。HBV-LP與肝細胞的毒性，病毒的復制，反式激活病毒，上調(diào)cccDNA拷貝數(shù)，致癌性等都有著密切的聯(lián)系[6]。

本研究顯示，138例乙肝患者HBV-LP和HBV-DNA陽性率無顯著性差異。檢出一致率為70.3%。在138例乙肝患者中，65例E抗原陽性者HBV-LP和HBV-DNA陽性率均較高，但E抗原陰性者中亦有50%左右的患者HBV-LP和HBV-DNA呈陽性。這表明HBV-LP在判斷乙肝患者體內(nèi)病毒復制水平，是否具有傳染性等方面優(yōu)于E抗原，與乙肝病毒指數(shù)具有較相似的臨床價值。HBV-LP陽性率各組均高于HBV-DNA陽性率，原因可能是由于HBV-DNA的檢測限為500 IU/mL，一些低濃度的患者被誤判為陰性[7]。抗病毒藥物并不能抑制已形成的病毒表達蛋白，只能抑制HBV-DNA的復制。故HBV-LP轉(zhuǎn)陰時間較HBV-DNA要晚一些[8]。

綜上所述，HBV-LP可作為判斷乙肝患者是否具有傳染性，監(jiān)測病毒復制的指標，具有與HBV-DNA類似的應用價值，較E抗原具有更高的靈敏度。 酶聯(lián)免疫吸附法檢測簡便，快速，無需特殊的儀器和資質(zhì)，可以在基層醫(yī)院推廣應用。

參考文獻

[1]范公忍,熊錦華,李樹玲.乙型肝炎病毒外膜大蛋白檢測與HBV-DNA及血清標志物的相關性分析[J].現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志,2011，26(3)：127-131.

[2]中華醫(yī)學會肝病分會,感染病學分會.慢性乙型肝炎防治指南[J].中華肝臟病雜志,2005,10(4):348-357.

[3]葉儒軍,魏威.乙肝病毒與乙肝病毒標志物的相關性研究[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2012,23(1):2932-2933.

[4]歐陽淑蘭，王霞平.乙型肝炎病毒DNA及其血清標志物檢測分析[J].檢驗醫(yī)學與臨床，2011，8(17):2140-2141.

[5]Wang NY,Zhang D,Zhao W,et al,Hepatitis B Virus Large surface Protein as a candidate biomarker for evalvating hepatitis B Virus infection[J].Clin Biochem,2011,44(14):1199-1204.

[6]謝服役,孫琦,陳巍.乙肝病毒大蛋白在乙肝患者診療中的臨床意義[J].中華實驗和臨床病毒學雜志,2013,27(4):280-282.

[7]龍暉.乙型肝炎患者622例前S1抗原與乙型肝炎病毒e抗原乙型肝炎病毒-DNA的相關性探討[J].實用醫(yī)技雜志,2014,20(6):641-642.

[8] 高錦,徐愛芳,王妙嬋,等.乙肝病毒外膜大蛋白檢測在核苷類似藥物治療CHB患者中的價值研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志,2013,18(1):3471-3473.

(收稿日期：2015-11-11)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.09.059

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)09-1281-02