劉艷妮， 張　莉， 胡建華， 陳世健

（湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院心內(nèi)科，湖北恩施445000）

?

通心絡(luò)膠囊對(duì)異丙腎上腺素誘導(dǎo)的心肌肥厚大鼠心功能及心肌纖維化的影響

劉艷妮， 張莉， 胡建華， 陳世健*

（湖北民族學(xué)院附屬民大醫(yī)院心內(nèi)科，湖北恩施445000）

摘要：目的 探討通心絡(luò)膠囊（人參、全蝎、赤芍等）對(duì)異丙腎上腺素（ISO）誘導(dǎo)的心肌肥厚大鼠心功能及心肌纖維化的影響。方法 雄性SD大鼠45只隨機(jī)均分為對(duì)照組，ISO組和通心絡(luò)組。通心絡(luò)組給予連續(xù)28 d通心絡(luò)灌胃，而ISO組和對(duì)照組則給予生理鹽水。ISO組和通心絡(luò)組連續(xù)7 d皮下注射ISO。治療4周后，測(cè)量左心室收縮末期壓力（LVESP）、左心室舒張末期壓力（LVEDP）及左心室壓力上升與下降最大速率（±dp/dtmax）的血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)；計(jì)算心臟質(zhì)量指數(shù)（HWI）和左心室質(zhì)量指數(shù)（LVWI）；檢測(cè)血清和心肌中氧化應(yīng)激指標(biāo)超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）水平；采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清與心肌組織NO水平；采用Masson染色觀察心肌纖維化；RT-PCR檢測(cè)心肌內(nèi)皮型NO合酶（eNOS）mRNA表達(dá)量；Western blot法測(cè)定eNOS和磷酸化eNOS（p-eNOS）蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 與對(duì)照組相比，ISO組的LVESP及±dp/dtmax均減小，心肌纖維化明顯，血清與心肌SOD和NO水平降低，心肌eNOS的mRNA和蛋白表達(dá)及p-eNOS的蛋白表達(dá)均明顯減少，LVEDP、HWI、LVWI、血清和心肌MDA水平顯著增加。與ISO組相比，通心絡(luò)組LVESP及±dp/dtmax均增加，心肌纖維化程度減輕，血清及心肌SOD和NO水平均升高、心肌eNOS的mRNA和蛋白表達(dá)及p-eNOS的蛋白表達(dá)均增加，LVEDP、HWI、LVWI、血清和心肌MDA水平均顯著減少。結(jié)論 通心絡(luò)膠囊可改善ISO誘導(dǎo)的心肌肥厚大鼠的心功能并減輕心肌纖維化，其機(jī)制可能與通心絡(luò)膠囊激活eNOS/NO信號(hào)通路及抗氧化應(yīng)激有關(guān)。

關(guān)鍵詞：通心絡(luò)膠囊；異丙腎上腺素；心肌肥厚；心功能；心肌纖維化

心肌肥厚是心肌對(duì)各種有害刺激因素引起心臟功能超負(fù)荷的一種適應(yīng)性反應(yīng)，持續(xù)存在的心肌肥厚可引起心律失常及心源性猝死等多種心血管疾病的發(fā)生，從而增加心血管病患者的死亡率［1-2］。通心絡(luò)膠囊（通心絡(luò)）是依據(jù)絡(luò)病學(xué)理論，由人參、全蝎、赤芍、土鱉蟲(chóng)、檀香，降香，乳香（制）、水蛭、蟬蛻、蜈蚣、酸棗仁（炒）及冰片12種中藥研制而成一種復(fù)方制劑，不但具有益氣、活血及通絡(luò)等功效，其還可以擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈從而改善心肌缺血［3］。既往研究發(fā)現(xiàn)通心絡(luò)對(duì)異丙腎上腺素（ISO）誘導(dǎo)的急性心肌損傷具有保護(hù)作用［4-5］，但通心絡(luò)對(duì)ISO慢性作用誘導(dǎo)的心肌肥厚動(dòng)物心功能及心肌纖維化的影響，既往并無(wú)相關(guān)研究。因此，本研究擬對(duì)這一問(wèn)題進(jìn)行探討。

1 材料與方法

雄性SD大鼠45只，體質(zhì)量250～300 g，購(gòu)自武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（合格證號(hào)SCXK［鄂］2007-0006）。將動(dòng)物隨機(jī)分為對(duì)照組、ISO組和通心絡(luò)組，每組各15只。既往研究證實(shí)，持續(xù)的β腎上腺受體過(guò)度激活可以引起心肌細(xì)胞肥大及心肌纖維化，因此在本實(shí)驗(yàn)中我們采用連續(xù)注射β腎上腺受體激動(dòng)劑ISO（Sigma公司，美國(guó)）來(lái)制備大鼠心肌肥厚模型。通心絡(luò)組給予連續(xù)28 d通心絡(luò)灌胃［2 g/（kg·d），以嶺藥業(yè)，石家莊］［6］，而ISO組和對(duì)照組則給予等體積生理鹽水灌胃［1 mL/（kg·d）］。ISO組和通心絡(luò)組在藥物灌胃的第22天開(kāi)始連續(xù)7 d皮下注射ISO ［2.5 mg/（kg·d）］［7］，而對(duì)照組則注射等體積生理鹽水［1 mL/（kg·d）］。在給藥及飼養(yǎng)過(guò)程中未出現(xiàn)動(dòng)物死亡。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)檢測(cè) 在完成所有藥物干預(yù)4周后，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行血流動(dòng)力學(xué)評(píng)價(jià)。給予戊巴比妥鈉（30 mg/kg，Sigma公司，美國(guó)）麻醉后，于右側(cè)頸部縱行切開(kāi)分離右頸總動(dòng)脈，將一根2F的millar導(dǎo)管（Millar公司，美國(guó)）經(jīng)右頸總動(dòng)脈插至左心室，連接PowerLab生理記錄儀（AD公司，澳大利亞），測(cè)量左心室收縮末期壓力（LVESP）、左心室舒張末期壓力（LVEDP）及左心室壓力上升與下降最大速率（±dp/dtmax）等血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)。

2.2 心臟解剖學(xué)改變及Masson染色評(píng)價(jià)心肌纖維化 每組各選5只動(dòng)物麻醉后開(kāi)胸取出心臟，剪除周?chē)Y(jié)締組織和肺臟，濾紙吸盡殘血后稱(chēng)重，作為全心質(zhì)量。接著分離左心室并稱(chēng)重，作為左心質(zhì)量。以全心質(zhì)量、左室質(zhì)量與體質(zhì)量之比計(jì)算心臟質(zhì)量指數(shù)（HMI）和左心室質(zhì)量指數(shù)（LVMI）。隨后將左心室心肌組織置于經(jīng)10％甲醛溶液固定8～12 h后，采用乙醇梯度脫水并常規(guī)石蠟包埋、切片，隨后進(jìn)行Masson染色。Masson染色使膠原纖維在光鏡下呈藍(lán)綠色，而心肌細(xì)胞則呈紅色。光鏡下拍照、電腦存儲(chǔ)，采用Image Pro-Plus軟件（Media Cybernetics公司，美國(guó)）對(duì)心肌纖維化進(jìn)行分析，測(cè)量心肌間質(zhì)膠原總面積和圖像總面積，用以計(jì)算膠原容積百分比（CVF）。

2.3 血清和心肌組織SOD、MDA及NO水平測(cè)定每組各選5只動(dòng)物，藥物麻醉后采用斷頭法處死，取全血及左心室心肌組織各3.5 mL和100 mg。全血室溫放置1 h后置于離心機(jī)（sc-359852，日立公司，日本）中，在4℃下1 000 r/min離心10 min，分離血清后，EP管分裝置于-80℃冰箱保存待測(cè)。心肌組織加入0.6 mL生理鹽水，使用組織勻漿機(jī)（800S，Waring公司，美國(guó)）研磨制成10％的組織勻漿，隨后4℃，14 000 r/min，離心10 min，取上清液置于-80℃冰箱保存待測(cè)。SOD的檢測(cè)采用黃嘌呤氧化酶法；MDA檢測(cè)采用硫代巴比妥酸法；NO水平檢測(cè)采用ELISA試劑盒（RD公司，美國(guó)），操作過(guò)程嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)在全自動(dòng)酶標(biāo)儀（BL680，BIO-RAD公司，美國(guó)）上完成。

2.4 RT-PCR檢測(cè)內(nèi)皮型NO合酶（eNOS）的mRNA表達(dá)量 剪取左心室心肌組織100 mg，將其剪碎后加入1 mL預(yù)冷的Trizol液，在冰上將組織充分研磨提取總RNA，隨后根據(jù)Fermentas反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)將總RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。使用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)eNOS mRNA和內(nèi)參GaPdh的引物，并由Invitrogen公司合成。eNOS mRNA引物序列正向?yàn)?' -AACATGTGTCCTTGCTCGAGGCA-3'，反向?yàn)?' -TTCCGGCGTCCACCCTGATCCTAA-3'，擴(kuò)增片段長(zhǎng)340 bp。內(nèi)參GaPdh的引物正向?yàn)?' -CATCACCATCTTCCAGGAGCG-3'，反向?yàn)?' -TGACCTTGCCCACAGCCTT'G-3'，擴(kuò)增片段長(zhǎng)443 bp。eNOS PCR擴(kuò)增條件為95℃預(yù)變性3 min后，95℃變性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸45 s，共34個(gè)循環(huán)。GaPdh PCR反應(yīng)條件為94℃變性1 min，60℃退火30 s，72℃延伸45 s，共30個(gè)循環(huán)。取5 μL PCR產(chǎn)物行凝膠電泳，使用凝膠成像系統(tǒng)對(duì)eNOS的mRNA表達(dá)量行半定量分析，結(jié)果用eNOS/GaPdh表示。

2.5 Western blot檢測(cè)eNOS和磷酸化eNOS（peNOS）蛋白表達(dá)量 剪取左心室組織（50～100 mg），使用勻漿器進(jìn)行勻漿并提取膜蛋白，采用BCA法對(duì)蛋白濃度定量分析后，將膜蛋白樣本置于-80℃冰箱中待用。勻漿及提取膜蛋白的具體步驟及方法參照文獻(xiàn)［6］，采用8％的聚丙烯酰胺凝膠電泳分離膜蛋白，隨后將膜蛋白電轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜上，置于含5％脫脂奶粉的TBST緩沖液中室溫封閉3 h，隨后分別加入抗eNOS（1∶800）和p-eNOS（1∶1 000）的單克隆抗體Ⅰ抗及抗GAPDH單克隆抗體Ⅰ抗（1∶2 000）（Sigma公司，美國(guó)），4℃孵育過(guò)夜。第2天，采用TBST緩沖液對(duì)膜洗滌3次（每次15 min），室溫加入相應(yīng)的二抗（l∶1 500）孵育1 h，隨后再次TBST緩沖液洗膜3次（每次15min）。采用增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法將膜置于暗處反應(yīng)5 min，后X光片曝光顯影和定影，凝膠成像系統(tǒng)拍照。

2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，并采用Tukey事后檢驗(yàn)法進(jìn)行組間兩兩比較，以p<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)結(jié)果 與對(duì)照組相比，ISO 組LVESP及±dp/dtmax均減?。╬<0.01），LVEDP增大（p<0.01）；在給予通心絡(luò)干預(yù)后，通心絡(luò)組LVESP及±dp/dtmax均較ISO組增大（p<0.01），而LVEDP較ISO組減?。╬<0.01），結(jié)果見(jiàn)表1。這些結(jié)果表明，通心絡(luò)能有效改善ISO慢性作用引起的大鼠血流動(dòng)力學(xué)紊亂及心功能下降。

表1　3組血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的比較（±s，n=15，1 mmHg =0.133 KPa）Tab.1 Com parison of hemodynam ic indexes in three groups（±s，n=15，1 mm Hg =0.133 KPa）

表1　3組血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的比較（±s，n=15，1 mmHg =0.133 KPa）Tab.1 Com parison of hemodynam ic indexes in three groups（±s，n=15，1 mm Hg =0.133 KPa）

注：與對(duì)照組比較，*p<0.01；與ISO組比較，#p<0.01

組別　LVESP/mmHg　LVEDP/mmHg?。?dp/dtmax）/（mmHg·s-1）　?。?dp/dtmax）/（mmHg·s-1）對(duì)照組118.34±7.83　3.65±0.27　8 945.34±317.18　5 989.56±332.64 ISO組　82.17±6.39*　5.18±0.46*　7 119.79±278.54*　3 587.76±260.62*通心絡(luò)組　102.76±6.72#　4.45±0.31#　8 247.93±287.37#　4 648.02±301.90#

3.2 各組動(dòng)物解剖學(xué)改變及Masson染色結(jié)果 與對(duì)照組相比，ISO組HWI及LVWI均明顯增大（p<0.01），而通心絡(luò)組HWI及LVWI均較ISO組減?。╬<0.01），見(jiàn)圖1，提示通心絡(luò)可以減輕ISO慢性刺激引起的的心肌肥厚。此外，Masson染色顯示，對(duì)照組心室肌間膠原堆積少，ISO組心室肌間膠原纖維堆積明顯多，通心絡(luò)組心室肌間膠原堆積量介于兩者之間。膠原纖維定量分析結(jié)果提示，ISO組的CVF顯著高于對(duì)照組［（16.32± 3.55）％與（3.35±1.12）％，p<0.01］，而通心絡(luò)組的CVF較ISO組顯著降低［（9.76±2.67）％與（16.32±3.35）％，p<0.01］，見(jiàn)圖1。以上結(jié)果說(shuō)明，通心絡(luò)能有效降低ISO持續(xù)刺激引起的心室肌纖維化。

3.3 血清及心肌組織氧化應(yīng)激指標(biāo)結(jié)果 與對(duì)照組相比，ISO組血清和心肌MDA水平均明顯增加，而血清和心肌SOD水平顯著降低（p< 0.01）；與ISO組相比，通心絡(luò)組血清和心肌SOD水平均明顯升高，而血清和心肌MDA水平顯著降低（p<0.01），結(jié)果見(jiàn)圖2。這些結(jié)果提示，通心絡(luò)能減輕ISO持續(xù)刺激引起的氧化應(yīng)激反應(yīng)。

注：與對(duì)照組比較，**p<0.01；與ISO組比較，##p<0.01圖1　3組心臟質(zhì)量指數(shù)、左心室質(zhì)量指數(shù)及M asson染色（×400）結(jié)果 （n=5）Fig.1 Results of heart weight indexes，left ventricleweight indexes and M asson stainings（×400）in three groups（n=5）

注：與對(duì)照組比較，**p<0.01；與ISO組比較，##p<0.01圖2　3組血清和心肌SOD、MDA及NO水平（n=5）Fig.2 Serum and myocardial SOD，MDA and NO levels in three groups（n=5）

3.4 血清及心肌組織NO水平結(jié)果 與對(duì)照組相比，ISO組血清和心肌NO水平均明顯減少（p< 0.01）；給予通心絡(luò)干預(yù)后，通心絡(luò)組血清和心肌NOD水平較ISO組顯著升高（p<0.01），結(jié)果見(jiàn)圖2。這些結(jié)果提示，通心絡(luò)能減輕ISO慢性作用引起的NO合成減少。

3.5 各組eNOS mRNA的表達(dá)結(jié)果 RT-PCR結(jié)果顯示，ISO組心室eNOS mRNA的表達(dá)量顯著低于對(duì)照組（p<0.01），而給予通心絡(luò)干預(yù)后，通心絡(luò)組心室eNOS mRNA表達(dá)量較ISO組顯著上調(diào)（p<0.01），結(jié)果見(jiàn)圖3。這一結(jié)果提示，ISO持續(xù)刺激可引起eNOS mRNA水平的下調(diào)，而通心絡(luò)能減輕ISO持續(xù)刺激引起的eNOS mRNA的改變。

注：與對(duì)照組比較，**p<0.01；與ISO組比較，##p<0.01圖3　3組左心室eNOS m RNA表達(dá)（n=5）Fig.3 mRNA expressions of eNOS in left ventricular tissues in three groups（n=5）

3.6 eNOS及p-eNOS蛋白表達(dá)結(jié)果 Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)eNOS和p-eNOS蛋白在3組動(dòng)物間的表達(dá)，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，ISO組心室eNOS 和p-eNOS蛋白表達(dá)水平顯著下降（p<0.01）；而與ISO組相比，通心絡(luò)組心室eNOS和p-eNOS蛋白表達(dá)水平明顯升高（p<0.01），結(jié)果見(jiàn)圖4。這些結(jié)果表明，ISO持續(xù)刺激可抑制eNOS的激活，而通心絡(luò)可減輕ISO慢性作用對(duì)eNOS激活的影響。

注：與對(duì)照組比較，**p<0.01；與ISO組比較，##p<0.01圖4　3組左心室p-eNOS和eNOS蛋白表達(dá)（n=5）Fig.4 Protein expressions of p-eNOS and eNOS in left ventricular tissues in three groups（n=5）

4 討論

ISO是一種非選擇性β受體激動(dòng)劑，因其慢性作用可引起心肌產(chǎn)生病理性肥厚而常被用來(lái)制備心肌肥厚模型［7］。在本研究中我們同樣采用ISO慢性注射制備心肌肥厚模型，結(jié)果顯示，ISO組動(dòng)物不僅LVESP、LVEDP和±dp/dtmax等血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)均較對(duì)照組出現(xiàn)顯著改變，且心肌間質(zhì)膠原大量堆積，提示ISO組動(dòng)物心功能受損及心肌發(fā)生嚴(yán)重纖維化，這與既往報(bào)道相一致［8-9］。當(dāng)給予通心絡(luò)干預(yù)后，通心絡(luò)組動(dòng)物血流動(dòng)力學(xué)各指標(biāo)及心肌纖維化程度均較ISO組顯著改善，提示通心絡(luò)對(duì)ISO誘導(dǎo)的心肌肥厚大鼠有改善心功能并減輕心肌纖維化的作用。

在本研究中，ISO慢性作用下調(diào)了心肌eNOS 及p-eNOS蛋白表達(dá)量，并降低了心肌NO水平，而這些改變?cè)诮o予通心絡(luò)干預(yù)后均顯著減輕。NO 是L-精氨酸在NO合酶催化下生成的一種生物活性氣體，內(nèi)皮細(xì)胞與心肌細(xì)胞均能合成和分泌NO［10］。既往研究顯示，NO可以通過(guò)舒張血管減少心臟的壓力負(fù)荷、降低心肌氧耗及直接滅活氧自由基等途徑抑制心肌肥厚［11-12］。此外，一些增加機(jī)體NO合成的藥物被證實(shí)具有改善心肌肥厚動(dòng)物心功能及減輕心肌纖維化的作用［13］。eNOS是心肌細(xì)胞NO合酶的常見(jiàn)類(lèi)型，其主要與生理濃度的NO合成有關(guān)。p-eNOS是eNOS活化形式，其表達(dá)下降可直接導(dǎo)致NO合成減少。Massion等人發(fā)現(xiàn)eNOS基因敲除小鼠與野生型小鼠相比，更易發(fā)生心室肥厚［12］。而eNOS基因過(guò)表達(dá)小鼠則能抵抗ISO誘導(dǎo)心肌肥厚作用［14］。早期的一些研究均發(fā)現(xiàn)，通心絡(luò)可以促進(jìn)機(jī)體NO合成從而發(fā)揮心血管保護(hù)作用［15］。近期Wang等人發(fā)現(xiàn)，通心絡(luò)可通過(guò)激活A(yù)kt/eNOS信號(hào)通路來(lái)增加心肌組織NO水平，從而改善壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的心力衰竭大鼠心功能并減輕心肌纖維化程度［16］。因此，我們認(rèn)為通心絡(luò)改善心肌肥厚大鼠心功能及心肌纖維化可能與其激活eNOS/NO相關(guān)信號(hào)通路來(lái)增加NO的合成有關(guān)。

此外，既往研究結(jié)果證實(shí)，持續(xù)的ISO刺激可導(dǎo)致心肌氧化應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生［8］。在氧化應(yīng)激反應(yīng)作用下，心肌成纖維細(xì)胞將發(fā)生增殖和遷移，并最終分化為成肌纖維細(xì)胞，成肌纖維細(xì)胞又可分泌基質(zhì)金屬蛋白酶，使膠原纖維合成增加，進(jìn)而引起心肌纖維化［17］。在本研究中，通心絡(luò)干預(yù)一方面降低了ISO慢性刺激大鼠血清和心肌氧化損傷標(biāo)志物MOD水平，另一方面升高了血清和心肌抗氧化酶SOD水平。這些結(jié)果提示通心絡(luò)對(duì)ISO慢性刺激大鼠發(fā)揮了抗氧化應(yīng)激的作用，這可能是通心絡(luò)降低心室纖維化的另一個(gè)機(jī)制。

總之，在本研究中發(fā)現(xiàn)，通心絡(luò)可改善ISO誘導(dǎo)的心肌肥厚大鼠心功能并減輕心肌纖維化，其機(jī)制可能與通心絡(luò)激活eNOS/NO信號(hào)通路及抗氧化應(yīng)激有關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

［1］ Tin L L，Beevers DG，Lip G Y.Hypertension，left ventricular hypertrophy，and sudden death［J］.Curt Cardiol ReP，2002，4（6）：449-457.

［2］ Podrid P J，Myerburg R J.Epidemiology and stratification of risk for sudden cardiac death［J］.Clin Cardiol，2005，28 （11）：I3-I11.

［3］ 尤士杰，楊躍進(jìn)，陳可冀，等.通心絡(luò)對(duì)急性心肌梗死患者再灌注后心肌和微血管的保護(hù)性研究［J］.中華心血管病雜志，2005，33（5）：433-437.

［4］ 趙明中，劉 嵐，汪家瑞，等.通心絡(luò)膠囊對(duì)異丙腎上腺素致大鼠心肌損傷保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2001，21（1）：51-53.

［5］ 丘志春，張國(guó)華，楊開(kāi)清.通心絡(luò)膠囊對(duì)異丙腎上腺素誘導(dǎo)大鼠心肌損傷的保護(hù)作用［J］.湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2004，10（8）：59-62.

［6］ 吳相春，來(lái) 靜，李?lèi)?ài)然，等.通心絡(luò)對(duì)缺氧預(yù)適應(yīng)小鼠腦組織細(xì)胞凋亡因子表達(dá)的影響［J］.中國(guó)病理生理雜志，2010，26（9）：1713-1717.

［7］ Tang Y Q，Wang M H，Le X Y，et al.Antioxidantand cardioprotective effects of Danshensu［3-（3，4-dihydroxyphenyl）-2-hydroxypropanoic acid from Salvia miltiorrhiza］on isoproterenol-induced myocardial hypertrophy in rats［J］.phytomedicine，2011，18（12）：1024-1030.

［8］ Zhang G X，Kimura S，Nishiyama A，et al.Cardiac oxidative stressin acute and chronic isoproterenol-infused rats［J］.Cardiovasc Res，2005，65（1）：230-238.

［9］ Liu T，Shi S B，Qin M，et al.Effects of dantrolene treatment on ventricular electrophysiology and arrhythmogenesis in rats with chronicβ-adrenergic receptor activation［J］.JCardiovasc pharmacol Ther，2015，20（4）：414-427.

［10］ Tamargo J，Caballero R，Gómez R，etal.Cardiac electrophysiological effects of nitric oxide［J］.Cardiovasc Res，2010，87 （4）：593-600.

［11］ 吳慶玲，周祖玉，徐建國(guó).黃連素對(duì)異丙腎上腺素誘導(dǎo)的大鼠心肌肥厚的影響［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2008，17 （3）：1956-1958.

［12］ Massin P B，Balligand J L.Modulation of cardiac contraction relaxation and rate by the endothelial nitric oxide synthase （eNOS）：lessons from genetically modified mice［J］.J physiol，2003，546（Pt1）：63-75.

［13］ Lin Y，Wang LN，Xi Y H，etal.L-arginine inhibits isoproterenol-induced cardiac hypertrophy through nitric oxide and polyamine pathways［J］.Basic Clin pharmacol Toxicol，2008，103 （2）：124-130.

［14］ Ozaki M，Kawashima S，Yamashita T，et al.Overexpression of endothelial nitric oxide synthase attenuates cardiac hypertrophy induced by chronic isoproterenol infusion［J］.Circ J，2002，66（9）：851-856.

［15］ 趙明奇，劉 艷，趙丹洋，等.通心絡(luò)改善缺血心肌供血的NO機(jī)制研究［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2003，9（6）：43-45.

［16］ Wang B，Yang Q，BaiWW，etal.Tongxinluo protectsagainst pressure overload-induced heart failure in mice involving VEGF/ Akt/eNOS pathway activation［J］. p LoS One，2014，9 （6）：e98047.

［17］ 富華穎，李廣平，劉長(zhǎng)樂(lè).普羅布考對(duì)糖尿病兔心房重構(gòu)及心房顫動(dòng)發(fā)生的干預(yù)作用［J］.中華臨床醫(yī)師雜志：電子版，2012，24（6）：7978-7981.

Effects of Tongxinluo Capsules on cardiac function and m yocardial fibrosis in rats w ith isoproterenol-induced cardiac hypertrophy

LIU Yan-ni， ZHANG Li， HU Jian-hua， CHEN Shi-jian*
（DePartment of Cardiovascular，Minda HosPital Affiliated to Hubei University for Nationalities，Enshi445000，China）

ABSTRACT：AIM To explore the effects of Tongxinluo（TXL）Capsules（Ginseng Radix et Rhizoma，ScorPio，paeoniae Radix rubra，etc.）on cardiac function and myocardial fibrosis in ratswith isoproterenol（ISO）-induced cardiac hypertrophy.METHODS Forty-fivemale SD ratswere randomly and equally divided into three groups，control group，ISO group and TXL group.Rats in the TXL group were consecutively intragastric administrated with TXL for twenty-eight days，and then received the hypodermic injection of ISO for seven days togetherwith the control group，while rats in the control and ISO groups received normal saline.Fourweeks after the treatment，the hemodynamic parameters，including left ventricular end systolic pressure（LVESP），left ventricular end diastolic pressure（LVEDP），maximum rate of pressure development（+dp/dtmax）and maximum rate of pressure decline （-dp/dtmax）were measured.The indexes of heart weight/body weight and left ventricle weight/body weight，which were defined as heartweight index（HWI）and left ventricleweight index（LVWI），respectively，were cal-book=968,ebook=14culated.Masson's trichrome staining was used for evaluatingmyocardial fibrosis，oxidative stress for levels ofmalondialdehyde（MDA）and superoxide dismutase（SOD）in serum and tissue.The levels of nitric oxide（NO）in serum and tissue were alsomeasured by ELISA.ThemRNA of endothelial NO synthase（eNOS）wasmeasured by RT-PCR.The protein expressions of eNOS and phosphorylation of eNOS（p-eNOS）were detected byWestern blot. RESULTS Compared with the control group，the LVESP and±dp/dtmaxdeclined；myocardial fibrosis severed；levels of SOD and NO in serum and myocardium decreased；mRNA of eNOS and protein expressions of p-eNOS and eNOS reduced；LVEDP，HWI，LVWIand levels of MDA in serum and myocardium increased，in the ISO group. Compared with the ISO group，the TXL group improved LVESP and±dp/dtmax；augmented levels of SOD and NO in serum and myocardium；increased mRNA of eNOS and protein expressions of p-eNOS and eNOS；however，reduced LVEDP，HWI，LVWI，degree ofmyocardial fibrosis and levels of MDA in serum and myocardium.CONCLUSION TXLCapsules can improve cardiac function and attenuatemyocardial fibrosis in ratswith ISO-induced cardiac hypertrophy.It indicates that eNOS/NO signal pathway and anti-oxidative stress may be involved in its mechanism.

KEY WORDS：Tongxinluo（TXL）Capsules；isoproterenol；cardiac hypertrophy；cardiac function；myocardial fibrosis

*通信作者：陳世健（1977—），男，碩士，主治醫(yī)師，研究方向?yàn)楣谛牟?、肥厚性心肌病及心律失常。Tel：（0718）8301777，E-mail：17253669@qq.com

作者簡(jiǎn)介：劉艷妮（1986—），女，護(hù)師，研究方向?yàn)楣谛牟　⒎屎裥孕募〔〖靶穆墒С?。Tel：（0718）8301386，E-mail：742779616 @qq.com

收稿日期：2015-10-12

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.05.002

中圖分類(lèi)號(hào)：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-1528（2016）05-0967-06