邵琳琳　趙佳佳　朱圣韜　郭水龍　張澍田　孫秀梅　王擁軍

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院消化內(nèi)科　國(guó)家消化系統(tǒng)疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心　首都醫(yī)科大學(xué)消化病學(xué)系　消化疾病癌前病變北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100050)

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DEC1參與順鉑誘導(dǎo)食管鱗癌的細(xì)胞衰老

邵琳琳趙佳佳朱圣韜郭水龍張澍田孫秀梅王擁軍*

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京友誼醫(yī)院消化內(nèi)科國(guó)家消化系統(tǒng)疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心首都醫(yī)科大學(xué)消化病學(xué)系消化疾病癌前病變北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100050)

【摘要】目的探究化學(xué)治療藥物順鉑對(duì)食管鱗癌細(xì)胞衰老的影響及其機(jī)制。方法檢測(cè)4種食管鱗癌細(xì)胞株(ECA109、EC9706、TE-1、TE-3)和一株正常的人類永生化食管上皮細(xì)胞株(Het-1a)中細(xì)胞衰老因子p53、分化型胚胎軟骨發(fā)育基因1(differentiated embryo-chondrocyteexpressed gene1， DEC1)的mRNA和蛋白的表達(dá)情況；選取TE-3為研究對(duì)象，采用MTT方法檢測(cè)不同濃度的順鉑(2、4、6、8、10 μmol/L)對(duì)TE-3增生的情況，并結(jié)合衰老相關(guān)的β半乳糖苷酶染色方法，篩選出誘導(dǎo)細(xì)胞衰老的最適濃度。以順鉑最適濃度(4 μmol/L)作用TE-3 48 h，采用Western blotting方法檢測(cè)順鉑作用前后p53、DEC1蛋白水平的表達(dá)情況。結(jié)果檢測(cè)食管鱗癌細(xì)胞系中細(xì)胞衰老因子p53、DEC1的mRNA和蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)食管鱗癌細(xì)胞與食管上皮細(xì)胞相比，p53的表達(dá)均有不同程度下降，DEC1的表達(dá)均有不同程度升高。用不同濃度的順鉑(2、4、6、8、10 μmol/L)作用TE3，MTT顯示順鉑對(duì)細(xì)胞TE-3的增生抑制作用呈劑量和時(shí)間依賴性；結(jié)合衰老相關(guān)的β半乳糖苷酶染色，發(fā)現(xiàn)順鉑可誘導(dǎo)TE-3出現(xiàn)細(xì)胞衰老，并在順鉑4 μmol/L作用48 h時(shí)細(xì)胞衰老現(xiàn)象最明顯；在順鉑4 μmol/L作用TE-3細(xì)胞48 h檢測(cè)對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組的p53、DEC1的蛋白表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組中TE-3的p53、DEC1的表達(dá)量分別升高了4.6倍(P=0.040)、2倍(P=0.032)。結(jié)論順鉑可誘導(dǎo)食管鱗癌細(xì)胞呈現(xiàn)細(xì)胞衰老表型，細(xì)胞衰老相關(guān)基因p53和DEC1可能參與這一過程。

【關(guān)鍵詞】食管鱗癌；細(xì)胞衰老；DEC1；p53；順鉑

食管癌是常見惡性腫瘤之一，在全世界范圍內(nèi)發(fā)病率高，惡性程度高，病程進(jìn)展快，預(yù)后較差，患者的生存率低。我國(guó)是食管癌發(fā)病率和病死率最高的國(guó)家，每年全世界新增的30萬食管癌患者中， 約有一半發(fā)生在中國(guó)，而食管鱗狀細(xì)胞癌(esophageal squamous cell carcinoma， ESCC，以下簡(jiǎn)稱食管磷癌)占90%以上[1-2]。細(xì)胞衰老是細(xì)胞生長(zhǎng)永久受抑制的狀態(tài)，是對(duì)于非致命性刺激的一種應(yīng)答，這些刺激包括癌基因的激活、DNA 損傷、氧化應(yīng)激(reactive oxygen species， ROS)、抗腫瘤藥物等；細(xì)胞衰老能夠防止老化的或非正常細(xì)胞的進(jìn)一步生長(zhǎng)，對(duì)抗細(xì)胞的無限增生能力而對(duì)機(jī)體起到保護(hù)作用[3]。順鉑是食管癌的常用化學(xué)治療藥物，順鉑可誘導(dǎo)鼻咽癌、肺癌等發(fā)生細(xì)胞衰老。對(duì)于食管鱗癌的細(xì)胞衰老及順鉑對(duì)食管鱗癌的細(xì)胞衰老的作用尚不清楚。

1材料和方法

1.1 材料

人食管癌細(xì)胞株TE-1、TE-3、ECA109、ECA9706；正常食管永生化上皮Het-1A細(xì)胞系(本實(shí)驗(yàn)室傳代留存)，胎牛血清(美國(guó)Gibco公司)；RPMI-1640 培養(yǎng)基(美國(guó)Gibco公司)；MTT(美國(guó)Sigma公司)；p53、DEC1抗體(美國(guó)Cell Signaling公司)；辣根酶過氧化物標(biāo)記的二抗(美國(guó)Santa Cruz 公司)。

1.2方法

1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)及藥物處理

人食管癌TE-1、TE-3、ECA109、ECA9706細(xì)胞系培養(yǎng)環(huán)境相似，為37 ℃、5%(體積分?jǐn)?shù))CO2的孵箱。培養(yǎng)液為含10%(體積分?jǐn)?shù))胎牛血清的RPMI1640，順鉑質(zhì)量濃度為200 μg/mL。

1.2.2MTT法檢測(cè)細(xì)胞體外藥物敏感性

取5×103個(gè)細(xì)胞，均勻種植于Corning公司的96孔板中，代細(xì)胞貼壁后，按照不同的順鉑濃度加藥，每個(gè)濃度設(shè)置5個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)0、24、48、72 h后，向96孔板的每個(gè)孔小心加入5 mg/mL的預(yù)制MTT溶液20 μL，繼續(xù)孵育2 h。小心吸出96孔板孔內(nèi)液體，加入150 μL二甲基亞砜(DMSO)，振蕩器上震搖10 min，使用酶標(biāo)儀在490 nm波長(zhǎng)處讀出各孔的吸光度值。根據(jù)所得結(jié)果，以對(duì)照組的吸光度值為參照，計(jì)算與對(duì)照組的比值并繪制藥物濃度抑制曲線。

1.2.3Western blotting 法分析蛋白表達(dá)

不同條件處理食管癌細(xì)胞后，棄去培養(yǎng)液，PBS洗2次，把PBS 液吸取干凈后，加入蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑和細(xì)胞裂解液，冰上孵育15 min，用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下收集到1.5 mL的EP管中，4 ℃，12 000 r/min離心10 min，吸取上清至另一EP管。BCA法檢測(cè)蛋白濃度，在樣品中加入SDS-PAGE loading buffer，100 ℃煮沸10 min，冷凍保存?zhèn)溆谩８鹘M樣品采取總蛋白30 μg，經(jīng)SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)膜至PVDF膜后封閉，一抗過夜，次日加入辣根酶過氧化物標(biāo)記的二抗，室溫孵育1 h，加入ECL 底物，用Bio-Rad成像系統(tǒng)對(duì)化學(xué)發(fā)光信號(hào)進(jìn)行圖像采集，采用Quantity One 軟件比較樣本目的蛋白表達(dá)水平高低。

1.2.4衰老相關(guān)的β半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的TE-3細(xì)胞接種6孔板，細(xì)胞濃度為3×104/孔，在不同濃度順鉑處理細(xì)胞48 h后，鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，按照SA-β-gal試劑盒說明書在孔板內(nèi)進(jìn)行SA-β-gal原位染色。(1)吸棄細(xì)胞培養(yǎng)液，用PBS洗滌2次；加入1 mL SA-β-gal固定液，室溫固定15 min。(2)吸除固定液，用PBS洗2次，每次5 min；(3)吸除固定液，每孔加入1 mL 染色工作液。(4)37 ℃無CO2培養(yǎng)箱孵育過夜，用保鮮膜封住6孔板防止蒸發(fā)；(5)顯微鏡下觀察，在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)均勻一致的藍(lán)色顆粒為SA-β-gal陽性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1檢測(cè)p53和DEC1在ESCC細(xì)胞株及正常食管上皮細(xì)胞中mRNA的表達(dá)情況

采用RT-PCR方法檢測(cè)在4種食管鱗癌細(xì)胞株ECA109、EC9706、TE-1、TE-3和一株永生化食管上皮細(xì)胞株Het-1a中的p53、DEC1 mRNA的表達(dá)。結(jié)果如圖1所示，各細(xì)胞株均可見p53不同程度的表達(dá)，其中食管癌細(xì)胞株TE-1、TE-3和正常食管上皮細(xì)胞株Het-1a中，p53(117bp)表達(dá)相對(duì)較高，DEC1(339bp)在EC9706、TE-1、TE-3中呈高表達(dá)。各細(xì)胞株均可見GAPDH(309bp)條帶。該結(jié)果提示p53、DEC1在正常食管上皮以及不同分化程度食管鱗癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2檢測(cè)p53和DEC1在ESCC細(xì)胞株及正常食管上皮細(xì)胞中蛋白的表達(dá)情況

采用Western blotting方法檢測(cè)4種食管鱗癌細(xì)胞株ECA109、EC9706、TE-1、TE-3和一株永生化正常食管上皮細(xì)胞株Het-1a中P53、DEC1蛋白的表達(dá)。結(jié)果如圖2所示，P53蛋白在TE-1、TE-3、Het-1a中高表達(dá)，在ECA109、EC9706中低表達(dá)；而DEC1在TE-1、TE-3、EC9706相對(duì)高表達(dá)，在ECA109、Het-1a相對(duì)低表達(dá)，各細(xì)胞株均可見β-actin表達(dá)。與正常食管永生化細(xì)胞株Het-1a相比，P53在ESCC細(xì)胞中的表達(dá)有不同程度的降低；而DEC1在ESCC細(xì)胞表達(dá)有不同程度的升高。

2.3MTT檢測(cè)不同濃度順鉑對(duì)食管癌細(xì)胞株TE-3增生的影響

以TE-3為研究對(duì)象用順鉑進(jìn)行干預(yù)。分別用順鉑2、4、6、8、10 μmol/L處理TE-3細(xì)胞24 h后，將培養(yǎng)基更換為不含藥物的全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)72 h，分別于給藥后0、24、48、72、96 h觀察細(xì)胞形態(tài)及檢測(cè)細(xì)胞增生情況。與空白對(duì)照組相比，隨著藥物濃度及培養(yǎng)時(shí)間增加，細(xì)胞增生的抑制明顯增加(0.550±0.275，n=6，P=0.000， 圖3)。在對(duì)照組，細(xì)胞形態(tài)呈圓形或者短梭形，細(xì)胞核為圓形或橢圓形，胞質(zhì)豐富；在低劑量順鉑組(4和 6 μmol/L)，細(xì)胞體積增大扁平，胞質(zhì)中空泡增多；在高劑量順鉑組(8和10 μmol/L)，可見細(xì)胞變小變圓，數(shù)量減少。在4 μmol/L時(shí)，細(xì)胞增長(zhǎng)曲線基本為水平線，即細(xì)胞未見明顯增生，此時(shí)為誘導(dǎo)細(xì)胞衰老的最佳濃度；選取順鉑濃度為4 μmol/L為最佳誘導(dǎo)細(xì)胞衰老濃度，進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。

圖1　DEC1、p53在永生化食管上皮細(xì)胞株Het-1a和食管鱗癌細(xì)胞株中ECA109、EC9706、TE-1、TE-3的mRNA表達(dá)

圖2　DEC1、p53在永生化食管上皮細(xì)胞株Het-1a和食管鱗癌細(xì)胞株中ECA109、EC9706、TE-1、TE-3的蛋白的表達(dá)

圖3　MTT檢測(cè)不同濃度順鉑對(duì)食管癌

2.4衰老相關(guān)的β半乳糖苷酶染色檢測(cè)食管癌細(xì)胞株TE-3衰老情況

SA-β-gal是常用的用于檢測(cè)細(xì)胞衰老的標(biāo)志物，在實(shí)驗(yàn)中用于檢測(cè)不同濃度順鉑作用下細(xì)胞的衰老情況。順鉑濃度4 μmol/L作用TE-3細(xì)胞48 h后，細(xì)胞體積變大，胞質(zhì)內(nèi)空泡增多，突觸增多變長(zhǎng)，70%以上衰老相關(guān)β半乳糖苷酶染色陽性，呈現(xiàn)出細(xì)胞衰老

表型；而在8 μmol/L和10 μmol/L濃度的順鉑作用下，TE-3細(xì)胞大量死亡，數(shù)量明顯減少，細(xì)胞體積變小，在作用96 h后，只有少數(shù)完整細(xì)胞(圖4)。因此，低劑量的順鉑可使食管鱗癌細(xì)胞發(fā)生衰老，而高劑量的藥則導(dǎo)致細(xì)胞死亡，選取順鉑濃度4 μmol/L作用時(shí)間為48 h進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2.5順鉑作用TE-3檢測(cè)細(xì)胞衰老前后P53、DEC1的變化情況

順鉑可損傷DNA導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，也可通過損傷DNA 而誘導(dǎo)細(xì)胞的加速性衰老。采用Western blotting法檢測(cè)順鉑4 μmol/L作用前后細(xì)胞中DEC1、P53表達(dá)情況，結(jié)果顯示，TE-3：順鉑作用48 h時(shí)，實(shí)驗(yàn)組中(48D)p53蛋白表達(dá)量較對(duì)照組(48C)升高 (P=0.029)，實(shí)驗(yàn)組中(48D)DEC1表達(dá)量較對(duì)照組(48C)升高(P=0.020)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05，圖5)。

圖4　不同濃度順鉑對(duì)食管癌細(xì)胞株TE-3作用及TE-3經(jīng)順鉑處理后衰老相關(guān)的β半乳糖苷酶染色

圖5　順鉑處理前后p53、DEC1蛋白表達(dá)變化

48C: 48 h in negative control； 48D: 48 h in the group of cisplatin；*P<0.05,**P<0.01vs48C;DEC1: differentiated embryo-chondrocyte-expressed gene1.

3討 論

野生型p53基因，是最重要的腫瘤抑制因子之一，p53可在DNA損傷、ROS產(chǎn)生、端粒酶失活等因素作用下被激活。P53蛋白通過與其基因內(nèi)部或上游的p53反應(yīng)元件相結(jié)合的方式反式激活相應(yīng)基因的轉(zhuǎn)錄，導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯、細(xì)胞衰老和凋亡。分化型胚胎軟骨發(fā)育基因1(differentiated embryo-chondrocyteexpressedgene1，DEC1) 定位于人類染色體3p25. 3-26 上，含有堿性螺旋-環(huán)-螺旋(bHLH)結(jié)構(gòu)域[4]，它屬于轉(zhuǎn)錄因子，能夠抑制多種細(xì)胞系的細(xì)胞增生，DEC1在腫瘤組織中也有表達(dá)，如胰腺癌[5]、口腔癌[6]、胃癌[7]、腎癌等。CHIP 技術(shù)分析p53與DEC1基因的啟動(dòng)子相結(jié)合，通過p53反應(yīng)元件從轉(zhuǎn)錄水平調(diào)節(jié)DEC1。另外，DEC1 的過表達(dá)是通過誘導(dǎo)細(xì)胞停滯在G1 期而促進(jìn)細(xì)胞衰老。因此認(rèn)為，DEC1在DNA損傷誘導(dǎo)的早衰分子機(jī)制中可能屬于p53的下游因子。

順鉑作為上皮來源腫瘤的一線類化學(xué)治療藥物，在臨床上得到廣泛的應(yīng)用，包括：肺癌、卵巢癌、睪丸癌、膀胱癌、頭頸部癌等。作用機(jī)制主要是與DNA上的核堿鳥嘌呤、腺嘌呤和胞嘧啶形成DNA單鏈內(nèi)兩點(diǎn)的交叉聯(lián)結(jié)，也可以形成雙鏈間的交叉聯(lián)結(jié)，從而破壞DNA的結(jié)構(gòu)和功能來起到促進(jìn)細(xì)胞凋亡，來起到破壞腫瘤的作用，除此之外，指出順鉑能激活絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK))信號(hào)通路途徑，進(jìn)而參與到細(xì)胞周期相關(guān)的調(diào)控中，在一些腫瘤中呈現(xiàn)出細(xì)胞衰老樣的形態(tài)變化。大劑量的順鉑導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，低劑量順鉑可致DNA損傷，有可能參與ESCC的細(xì)胞衰老。

細(xì)胞衰老是細(xì)胞對(duì)非致命性刺激的一種應(yīng)答，這些刺激包括癌基因的激活、DNA 損傷、氧化應(yīng)激、抗腫瘤藥物等；細(xì)胞衰老能夠防止老化的或非正常細(xì)胞的進(jìn)一步生長(zhǎng)，對(duì)抗細(xì)胞的無限增生能力而對(duì)機(jī)體起到保護(hù)作用[8]。衰老的細(xì)胞仍具有生活學(xué)活性，但是細(xì)胞的基因和蛋白的表達(dá)譜發(fā)生了很大變化，使其只能維持基本代謝過程，而缺乏合成DNA和細(xì)胞增生的能力[9]，即使是在分裂素的刺激下。細(xì)胞衰老存在相應(yīng)的標(biāo)志物。目前廣泛應(yīng)用的，且特異性較高的為衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶染色[10-12]，是指在pH為6時(shí)，衰老細(xì)胞內(nèi)溶酶體活動(dòng)，進(jìn)而溶酶體水解酶增加，與x-gal反應(yīng)生成的藍(lán)色物質(zhì)增多，聚集在胞質(zhì)內(nèi)，使細(xì)胞質(zhì)呈現(xiàn)藍(lán)色。此外衰老相關(guān)的異染色質(zhì)聚集(senescence-associated heterochromatin foci，SAHF)是與衰老相關(guān)的表觀遺傳學(xué)上的改變，也可用于提示細(xì)胞衰老的存在[13-14]。

在食管鱗癌細(xì)胞株和食管永生化正常細(xì)胞株中分別從mRNA、蛋白水平檢測(cè)p53、DEC1表達(dá)，P53在食管鱗癌細(xì)胞株中表達(dá)較食管永生化細(xì)胞株下降，DEC1表達(dá)則升高；而在同一細(xì)胞系列TE中，對(duì)于p53野生型及突變型，p53、DEC1表達(dá)結(jié)果也存在差異。因此，在不同的食管鱗癌細(xì)胞系中，p53、DEC1的表達(dá)存在差異。采用不用濃度的順鉑作用于TE-3，觀察24、48、72、96 h時(shí)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)及p53、DEC1的蛋白水平均發(fā)生改變。TE-3中，順鉑濃度為2 μmol/L時(shí)，隨著細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞數(shù)目逐漸增加，未見到明顯的細(xì)胞增生抑制的現(xiàn)象，行衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶染色，部分細(xì)胞呈現(xiàn)衰老相關(guān)表型；對(duì)于順鉑為4、6、8、10 μmol/L時(shí)隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞數(shù)目成下降趨勢(shì)，而且細(xì)胞形態(tài)發(fā)生明顯變化，細(xì)胞體積變大，突起增多，胞質(zhì)內(nèi)空泡增多，衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶染色示胞質(zhì)藍(lán)染；在順鉑濃度為4 μmol/L，作用48 h時(shí)，上述形態(tài)學(xué)改變及衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶染色最明顯。因此，順鉑可使食管鱗癌細(xì)胞呈現(xiàn)增生抑制、細(xì)胞衰老的現(xiàn)象，且在一定濃度作用下，呈現(xiàn)出劑量和時(shí)間依賴性。

本研究表明，低劑量順鉑濃度4 μmol/L可誘導(dǎo)TE-3發(fā)生細(xì)胞衰老，表現(xiàn)為細(xì)胞體積變大，突起增多，胞質(zhì)內(nèi)空泡增多，衰老相關(guān)β-半乳糖苷酶染色陽性率高，并且細(xì)胞數(shù)目成下降趨勢(shì)。此外，低劑量順鉑作用下p53、DEC1表達(dá)均發(fā)生改變，表明低濃度的順鉑可誘導(dǎo)食管鱗癌細(xì)胞發(fā)生衰老，且p53、DEC1可能參與這一過程。

總之，細(xì)胞衰老作為腫瘤發(fā)生發(fā)展的天然屏障，可以在化學(xué)治療藥物所致的應(yīng)激狀態(tài)下而得以呈現(xiàn)?；熕幬镌谕砥谀[瘤的治療中占據(jù)重要地位，主要通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡而抑制細(xì)胞增生甚至消滅腫瘤細(xì)胞。本研究發(fā)現(xiàn)化療藥物可誘導(dǎo)ESCC表現(xiàn)出細(xì)胞衰老，而起到抑制細(xì)胞增生的作用；同時(shí)在誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞衰老的過程中，細(xì)胞衰老標(biāo)志物還可能為腫瘤治療的療效判斷及預(yù)后估計(jì)提供重要信息；就這兩點(diǎn)而言，細(xì)胞衰老的相關(guān)研究為腫瘤的治療提供了新的思路和方法。但是，還有一種觀點(diǎn)認(rèn)為，衰老的腫瘤細(xì)胞可以釋放衰老相關(guān)分泌因子，如IL-6等，反而促進(jìn)腫瘤的發(fā)生及發(fā)展，因此深入了解衰老腫瘤細(xì)胞發(fā)生機(jī)制的也是一重大命題，同樣值得關(guān)注及進(jìn)一步探索。

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編輯慕萌

Association of DEC1 and cellular senescence of esophageal squamous cell carcinoma induced by cisplatin

Shao Linlin， Zhao Jiajia, Zhu Shengtao，Guo Shuilong，Zhang Shutian， Sun Xiumei， Wang Yongjun*

(DepartmentofGastroenterology，BeijingFriendshipHospital，CapitalMedicalUniversity；NationalClinicalResearchCenterforDigestiveDiseases；FacultyofGastroenterologyofCapitalMedicalUniversity；BeijingKeyLaboratoryforPrecancerousLesionofDigestiveDiseases，Beijing100050，China)

【Abstract】Objective To investigate whether cisplatin could induce senescence in esophageal squamous cell carcinoma (ESCC).MethodsFour ESCC cell lines (ECA109， EC9706， TE-1， TE-3)and one normal esophageal epithelial cell line (Het-1a) were analyzed for this study. Reverse-transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and Western blotting were employed to detect the mRNA and protein expression of p53 and differentiated embryo-chondrocyte-expressed gene1 (DEC1) in ESCC cell lines. MTT and senescence associated β-galactosidase were used to explore an appropriate cisplatin concentration to induce proliferation inhibition and cellular senescence in TE-3 cell line. Further， Western blotting was employed to detect the expression of DEC1 and p53.ResultsIn this study， we identified that p53 had a lower expression compared with normal esophageal epithelial cells by testing mRNA and protein expression of different esophageal cancer cell lines， while the expression of DEC1 had a higher expression. MTT assay showed that cisplatin inhibited the growth of TE-3 in a dose-and time-dependent manner. Combined MTT with senescence associated β-galactosidase， 4uM and 48 hours were chosen as most appropriate condition to induce cellular senescence. Elevated levels of senescence associated β-galactosidase were observed in TE-3 cells when exposed to low doses of cisplatin. TE3 cell experienced morphological changes following drug exposure accompanied with up regulation of DEC1 and p53.ConclusionOur results revealed that cisplatin could induce cellular senescence in esophageal squamous cell carcinoma. Meanwhile， p53 and DEC1 may be involved in this process.

【Key words】esophageal squamous cell carcinoma；cellular senescence； DEC1；p53；cisplatin

(收稿日期：2015-12-25)

【中圖分類號(hào)】R 655.4

[doi：10.3969/j.issn.1006-7795.2016.01.004]

*Corresponding author， E-mail：wyj_30302@163.com

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金(81302160， 81272447)， 國(guó)家消化系統(tǒng)疾病臨床醫(yī)學(xué)研究中心基金(2015BAI13B09)。 This study was supported by National Natural Science Foundation of China (81302160， 81272447)， National Clinical Research Center for Digestive Diseases (2015BAI13B09).

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-01-2718∶10網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3662.R.20160127.1810.042.html

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