曹璽 和麗生 趙遠(yuǎn) 郭世民??

摘要：目的觀察青刺果油皮炎凝膠的急性毒性試驗(yàn)和皮膚刺激試驗(yàn)。方法本試驗(yàn)采用5 g/kg.bw最大給藥量進(jìn)行家兔經(jīng)皮急性毒性試驗(yàn)；采用同體自身對(duì)照法進(jìn)行家兔皮膚刺激試驗(yàn)。結(jié)果最大給藥量給藥后動(dòng)物未出現(xiàn)中毒反應(yīng)及死亡，皮膚刺激試驗(yàn)未見紅斑及水腫，藥物組與基質(zhì)組、空白組相比，病變程度、病變范圍及病變發(fā)生率無明顯差異。結(jié)論急性毒性試驗(yàn)，未發(fā)現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)和死亡；皮膚刺激試驗(yàn)，對(duì)家兔完整皮膚和破損皮膚均無刺激性，表明青刺果油皮炎凝膠外用安全。

關(guān)鍵詞：青刺果油皮炎凝膠；急性毒性；皮膚刺激

中圖分類號(hào)：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2016）05-0052-02

青刺果為薔薇科植物青刺尖（Prinsepia utilis Royle）的果實(shí)，中文學(xué)名總花扁核木，屬薔薇科、李亞科扁核木屬植物，別名青刺尖、打油果、青那果、狗奶子、炮筒果、梅花刺、打槍果、槍子果、阿那斯（納西族），出裸（彝族）[1]。它生長于海拔 1800～3000 m 的山坡、荒地、地邊、路邊和背陰灌叢中，在寒冷的冬季仍具極強(qiáng)生命力，在我國云南、四川和貴州等省均有分布，云南以麗江及其周邊地區(qū)為主要產(chǎn)地。青刺果在云南民間具有悠久的藥用歷史，根、葉、果均可入藥或食用，具有清熱、解毒、健胃等作用。

青刺果油皮炎凝膠是云南省中醫(yī)中藥研究院根據(jù)云南省麗江納西族民間藥用方法研制，采用純天然原料，具有治療濕疹的作用[2]。本實(shí)驗(yàn)旨在研究皮膚給藥的安全性，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1實(shí)驗(yàn)材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物普通級(jí)家兔，體重2.0～3.5 kg，來源于昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（滇）2011-0004。

1.2受試物及對(duì)照品青刺果油皮炎凝膠，批號(hào)：20150901；空白凝膠基質(zhì)，均由云南省中醫(yī)中藥研究院配制。陰性對(duì)照，氯化鈉注射液，250 mL/瓶，250 mL/2.25 g，批號(hào)1114231，生產(chǎn)單位：昆明南疆制藥有限公司。

2實(shí)驗(yàn)方法

2.1急性毒性試驗(yàn)[3]

2.1.1分組普通級(jí)家兔用隨機(jī)法分為3組，即空白對(duì)照組，基質(zhì)對(duì)照組和受試物原生藥組，每組10只，雌雄各5只。分籠飼養(yǎng)，每籠1只。

2.1.2給藥途徑及劑量采用5 g/kg最大給藥量進(jìn)行經(jīng)皮急性毒性試驗(yàn)。[JP2]

2.1.3給藥方法及觀察時(shí)間動(dòng)物給藥前24h背部去毛，涂藥面積應(yīng)占體表面積10%，家兔為10 cm×16 cm。先將動(dòng)物固定，將受試物均勻涂敷于動(dòng)物背部皮膚染毒區(qū)，然后用一層薄膠片覆蓋，無刺激膠布固定，防止動(dòng)物舔食?；|(zhì)對(duì)照組按上述方法涂敷基質(zhì)，采用24 h兩次給藥的方法，給藥容量為2.5 mL/kg，給藥量為5.0 g/kg。一般封閉接觸 24 h。24 h后用溫水洗去皮膚上的受試物，再進(jìn)行局部觀察，連續(xù)觀察14 d。[JP]

2.1.4觀察指標(biāo)觀察動(dòng)物體重、皮膚黏膜、毛發(fā)光澤、呼吸、四肢活動(dòng)等及其他中毒表現(xiàn)和死亡數(shù)。

2.1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSSwin11.5軟件對(duì)動(dòng)物體重進(jìn)行成組t檢驗(yàn)和配對(duì)t檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析。

2.2皮膚刺激試驗(yàn)[4]

2.2.1試驗(yàn)分組適應(yīng)性飼養(yǎng)后，選擇健康皮膚完好的合格動(dòng)物12只用于試驗(yàn)，單籠飼養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物處理：適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，試驗(yàn)前24 h對(duì)日本大耳兔背部剪毛，分隔為3個(gè)區(qū)域各3 cm×3 cm；完整皮膚組無需任何處理，破損皮膚組用滅菌針頭以“井”字劃破表皮，以滲血為度。

2.2.2給藥途徑及劑量取受試物、基質(zhì)對(duì)照、生理鹽水分別在去毛區(qū)域左上、右上，左下3塊皮膚每天涂抹1次，連續(xù)涂抹 7 d。

2.2.3給藥方法及觀察時(shí)間分別取相應(yīng)的凝膠或生理鹽水0.5 mL涂于相應(yīng)的皮膚，每天涂抹1次，連續(xù)涂抹7 d，左下區(qū)域皮膚為基質(zhì)對(duì)照，右上區(qū)域皮膚作為陰性對(duì)照，給予相應(yīng)的受試物后用一層保鮮膜覆蓋和二層紗布，再用無刺激性膠布加以固定。每次涂抹前應(yīng)剪毛，用水或無刺激性溶劑清除殘留受試物，1 h后觀察結(jié)果，按表1評(píng)分，對(duì)照區(qū)和試驗(yàn)區(qū)同樣處理。

2.2.4觀察指標(biāo)一般觀察：每天觀察動(dòng)物精神、活動(dòng)、飲食等一般狀況，同時(shí)每周稱一次體重。每天肉眼觀察及記錄涂敷部位紅斑、水腫、色素沉著、出血點(diǎn)、皮膚情況出現(xiàn)和消退時(shí)間，并參照表1對(duì)紅斑和水腫情況進(jìn)行評(píng)分。

2.2.5結(jié)果評(píng)價(jià)按下列公式計(jì)算每天每只動(dòng)物平均積分，以表 1 判定皮膚刺激性強(qiáng)度。

每天每只動(dòng)物平均積分=[SX（]∑紅斑和水腫積分[]受試動(dòng)物數(shù)[SX）][JB<2/]14

3實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1急性毒性試驗(yàn)

3.1.1一般情況及體征給藥后動(dòng)物未出現(xiàn)中毒反應(yīng)和死亡，24 h后用溫水洗去皮膚上的試驗(yàn)受試物，未觀察到皮膚紅斑、丘疹、水腫等反應(yīng)。連續(xù)飼養(yǎng)觀察14 d，2組動(dòng)物一般狀況好，解剖動(dòng)物，主要臟器、器官未見明顯異常改變。

3.1.2體重變化給藥前、給藥后7 d、14 d體重組間比較無顯著性差異（P>0.05），試驗(yàn)前后組內(nèi)比較有顯著性差異（P<0.01），提示兩組動(dòng)物體重均有增長。見表3。

3.2皮膚刺激試驗(yàn)

3.2.1變化家兔皮膚連續(xù)7天外涂青刺果油皮炎凝膠后，動(dòng)物行為活動(dòng)、進(jìn)食飲水及精神狀態(tài)等一般情況良好，動(dòng)物體重均有增長，組間比較和比較均無顯著性差異（P>0.05），給藥前后組內(nèi)比較有顯著性差異（P<0.05）。

3.2.2局部肉眼觀察結(jié)果連續(xù)7d皮膚外涂青刺果油皮炎凝膠，于每天給藥前、每次除藥物后1 h以及末次給藥后24、48和72 h肉眼觀察，完整皮膚組基質(zhì)對(duì)照區(qū)、空白對(duì)照區(qū)和試驗(yàn)區(qū)三塊皮膚未見紅斑及水腫。破損皮膚組基質(zhì)對(duì)照區(qū)、空白對(duì)照區(qū)和試驗(yàn)區(qū)皮兩三塊皮膚給藥第1、2 d可見輕微發(fā)紅，無水腫，于第3 d基本恢復(fù)，考慮是用滅菌針頭人為制造破損皮膚引起的損傷。皮膚刺激強(qiáng)度評(píng)分<0.5。各試驗(yàn)組皮膚刺激評(píng)分見表5。

3.2.3病理組織學(xué)檢查給藥末期和恢復(fù)期破損皮膚組，完整皮膚組均可見表皮不同程度的增生，真皮乳頭層不同程度的淋巴細(xì)胞浸潤，給藥末期破損皮膚組的皮膚病變重于完整皮膚組，但藥物組與基質(zhì)組、空白組相比，病變程度、病變范圍及病變發(fā)生率無明顯差異。停藥恢復(fù)14天后，破損皮膚和完整皮膚組均較末次給藥72小時(shí)后病變減輕，病變范圍縮小。

4結(jié)論

青刺果油凝膠以最大給藥量法進(jìn)行家兔急性經(jīng)皮毒性試驗(yàn)，未發(fā)現(xiàn)明顯毒性反應(yīng)和死亡，劑量為5.0 g/kg，為臨床用藥量的333.33倍；青刺果油皮炎凝膠進(jìn)行家兔多次皮膚刺激試驗(yàn)，在本實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)家兔完整皮膚和破損皮膚均無刺激性，表明青刺果油皮炎凝膠外用安全。

參考文獻(xiàn)：

[1]江蘇植物研究所.新華本草綱要[M].第3冊(cè).上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1990.195.

[2]張宇，蔣召雪.野生青刺果研究綜述[J].西昌學(xué)院學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2007，21（3）：34-36.

[3]中華人民共和國衛(wèi)生部藥政局.中藥新藥研究指南（藥學(xué)、藥理學(xué)、毒理學(xué)）[S].1994：209.

[4]國家食品藥品監(jiān)督管理局.藥物研究技術(shù)指導(dǎo)原則[S].北京.中國醫(yī)藥科技出版社，2005：227-242，243-254.