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        壯藥香花護乳凝膠劑的薄層色譜鑒別及急性毒性實驗研究

        2016-11-11 19:41:21張青青余勝民蘇青黃琳蕓

        張青青++余勝民++蘇青++黃琳蕓

        【摘要】目的:建立壯藥香花護乳凝膠劑的薄層鑒別方法,并探討其皮膚用藥的安全性。方法:采用TCL法對處方中龍血竭、莪術(shù)進行定性鑒別,采用健康家兔進行皮膚急性毒性試驗。結(jié)果:TCL鑒別分離度良好,專屬性強;該制劑對家兔完整皮膚和破損皮膚均無急性毒性反應(yīng)。結(jié)論:TCL法可作為該制劑質(zhì)量控制方法之一;該制劑臨床經(jīng)皮膚給藥是安全的。

        【關(guān)鍵詞】壯藥香花護乳凝膠劑;薄層色譜法;急性毒性

        【中圖分類號】R9144【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517(2016)18-0008-02

        壯藥香花護乳凝膠劑是我院自制的外用制劑,由龍血竭、蒲公英、莪術(shù)等8味藥材組成,具有活血化淤,軟堅散結(jié)的作用,臨床用于治療氣滯血瘀引起的乳腺增生癥。方中主藥龍血竭具有活血化瘀,止痛的功效,莪術(shù)具有行氣活血,消積止痛的功效。為控制該制劑產(chǎn)品質(zhì)量,本研究對龍血竭、莪術(shù)進行了薄層色譜鑒別,并采用動物皮膚急性毒性的試驗研究其安全性,為臨床用藥的提供理論依據(jù)。

        1儀器與材料

        11儀器XS 205 BDU梅特勒電子分析天平(瑞士梅特勒公司);SB2200超聲波清洗器(上海必能信超聲有限公司);UV-1型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠);微量進樣器(上海醫(yī)用激光設(shè)備廠)。

        12材料龍血竭對照藥材(批號110781-200613)、莪術(shù)對照藥材(批號110625-200902)由中國藥品生物制品檢定所提供。香花護乳凝膠劑和試藥均由廣西壯醫(yī)醫(yī)院藥劑科提供。硅膠G、H薄層板(青島海洋化工集團公司)。所用試劑均為分析純。

        13動物健康成年白色家兔20只,雌雄各半,體質(zhì)量20~25Kg,一級合格,由廣西醫(yī)科大學動物中心提供,合格證號:HCXK桂2009-0002,動物房溫度[BF]:([BFQ]25±1)℃,相對濕度:50%~70%。試驗期間動物單獨分籠標準飼料飼養(yǎng),自由飲水與攝食。

        2薄層鑒別方法與結(jié)果[1]

        21龍血竭的薄層鑒別取本品10g,加乙醚10mL,密塞,振搖10min,濾過,取濾液作為供試品溶液。另取缺龍血竭的供試品10g、龍血竭對照藥材01g,同法制成陰性對照溶液、對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗,吸取上述供試品溶液、陰性樣品溶液、對照藥材溶液各10μL,分別點于同一硅膠G薄層板上,以三氯甲烷-甲醇(95∶[KG-*3/5]05)溶液為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外燈(365nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的熒光斑點。陰性無干擾。見圖1。

        22莪術(shù)的薄層鑒別取本品內(nèi)容物10g,置具塞三角瓶中,加石油醚(30~60℃)10mL,超聲處理20分鐘,濾過,濾液蒸干,殘渣加無水乙醇1mL使溶解,作為供試品溶液。另各取莪術(shù)供試樣品10g、莪術(shù)對照藥材05g,同上述方法制得陰性對照溶液、對照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國藥典》2010年版一部附錄Ⅵ B)試驗,吸取上述三種溶液各10μL,分別點于同一硅膠H薄層板上,以石油醚(30~60℃)–乙酸乙酯(96:4)為展開劑,展開,取出,晾干,噴以5%磷鉬酸試液,在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中,在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上,顯相同顏色的斑點(莪術(shù)特征斑點a的Rf值為052,b的Rf值為056)。陰性無干擾。見圖2。

        3皮膚急性毒性試驗[2]

        31分組及給藥將20只家兔隨機分為5組,每組4只,即完整皮膚受試藥組,完整皮膚賦形劑組,破損皮膚受試藥組,破損皮膚賦形劑組,生理鹽水組。于實驗前24h,將每只家兔背部脊柱兩側(cè)用剪刀去毛,再用8%硫化鈉脫毛(每側(cè)約為10cm×10cm)。給藥前檢查去毛皮膚是否受損傷,有損傷的皮膚不宜進行實驗。破損皮膚的制作采用滅菌注射針頭將去毛消毒皮膚“#”字型劃破,以輕度滲血為度。

        按照分組分別在家兔背部去毛區(qū)涂生理鹽水2mL,空白凝膠劑及香花護乳凝膠劑涂藥量為每只2g,用消毒紗布和無刺激性膠布將涂藥區(qū)覆蓋固定。給藥24h后,用溫水洗去殘留涂抹物。去除涂抹物后1、24、48、72h至第7日,每日觀察涂抹部位有無紅斑和水腫等情況,以及上述變化的恢復(fù)情況和時間,并按評分標準打分及強度標準判斷刺激強度。若有死亡動物應(yīng)及時進行尸檢并進行病理學檢查。

        32皮膚刺激性反應(yīng)評分標準根據(jù)《中藥藥理實驗方法學》,以紅斑、水腫等為評價指標。評分標準及刺激強度評價標準分別見表1、2。

        每組動物平均分值=∑紅斑和水腫積分/每組動物數(shù)

        33測定結(jié)果由表3可知,香花護乳凝膠劑與其空白凝膠劑對完整皮膚組和破損皮膚組動物的受試部位均無紅腫、紅斑、腫脹等刺激變化,其皮膚刺激平均分值均<050分,表明兩者對正常皮膚和破損皮膚均無刺激性;生理鹽水組動物皮膚無紅腫、紅斑及水腫等刺激現(xiàn)象。

        4討論

        本方劑型為凝膠膏劑,根據(jù)各藥材所含主要活性成分及理化性質(zhì)對方中藥材進行定性研究,龍血竭的展開劑三氯甲烷和甲醇的比例經(jīng)過反復(fù)試驗,最后以三氯甲烷–甲醇(95∶[KG-*3/5]05)分離效果最佳;莪術(shù)對比了環(huán)乙烷–醋酸乙酯(8∶[KG-*3/5]2)、石油醚(30~60℃)–乙酸乙酯(96∶[KG-*3/5]4),發(fā)現(xiàn)后者斑點分離度較清晰,展開效果更好,故選擇后者。由結(jié)果可知,認為本次實驗所選方法科學準確,具有較好重現(xiàn)性,能較好地控制該制劑質(zhì)量。

        皮膚刺激性試驗結(jié)果表明,香花護乳凝膠劑對完整皮膚、破損皮膚均無刺激性反應(yīng),未見毒性癥狀表現(xiàn),表明本制劑是安全可靠的。

        參考文獻

        [1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

        [2]李儀奎.中藥藥理實驗方法學(第二版)[M].上海:上??茖W技術(shù)出版社,2006.

        (編輯:梁志慶)

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