楊志華，吳尚華，沈玉鵬，魏桂梅

1 甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050；2 甘肅省中醫(yī)藥研究院；3 甘肅省中醫(yī)院白銀分院

中藥復(fù)方對(duì)咳嗽變異性哮喘模型大鼠血清IgE和IL-2水平的影響*

楊志華1，2，吳尚華3，沈玉鵬1，魏桂梅3

1 甘肅省中醫(yī)院，甘肅 蘭州 730050；2 甘肅省中醫(yī)藥研究院；3 甘肅省中醫(yī)院白銀分院

目的：通過測(cè)定和分析實(shí)驗(yàn)大鼠外周血IgE和IL-2的含量，觀察中藥復(fù)方對(duì)咳嗽變異性哮喘(CAV)大鼠免疫功能的影響，探討本方對(duì)咳嗽變異性哮喘機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。方法：采用氫氧化鋁和卵蛋白激發(fā)實(shí)驗(yàn)，使大鼠形成致敏狀態(tài)，同時(shí)應(yīng)用卵蛋白單一激發(fā)實(shí)驗(yàn)方法，造模形成穩(wěn)定的咳嗽變異性哮喘模型大鼠，并隨機(jī)分為6組，各組間予相應(yīng)治療3周后腹主動(dòng)脈取血，檢測(cè)各組實(shí)驗(yàn)鼠咳嗽次數(shù)、血清IgE及IL-2水平。結(jié)果：中藥復(fù)方能緩解各實(shí)驗(yàn)組大鼠咳嗽癥狀，減少咳嗽頻次，同時(shí)降低模型大鼠血清IgE的水平，提升血清IL-2的水平。結(jié)論：中藥復(fù)方能調(diào)節(jié)IgE及IL-2水平，減少實(shí)驗(yàn)大鼠咳嗽次數(shù)，具有調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力作用，這可能是中藥復(fù)方治療CVA的機(jī)制之一。

咳嗽變異性哮喘；免疫調(diào)節(jié)作用；中藥復(fù)方

咳嗽變異性哮喘(CVA)是近年來小兒常見的慢性呼吸系統(tǒng)疾病，本病以春秋冬季明顯，以刺激性干咳、突發(fā)性、陣發(fā)性咳嗽等癥狀為主要表現(xiàn)，是一種以慢性氣道炎癥及氣道高反應(yīng)、高敏感性為主要病變特點(diǎn)的特殊類型的哮喘表現(xiàn)形式，可因各種誘發(fā)因素而發(fā)病。其本質(zhì)是細(xì)胞因子參與調(diào)節(jié)的慢性氣道炎癥［1］，IL-4是IgE合成促進(jìn)因

子；LI-2是一種B細(xì)胞生長(zhǎng)因子和嗜酸細(xì)胞分化因子，這兩類細(xì)胞因子表達(dá)失常與Th1/Th2細(xì)胞功能的失衡有關(guān)［2-3］。有研究［4］發(fā)現(xiàn)咳嗽變異性哮喘患者黏膜水腫、上皮細(xì)胞脫落、部分基底膜增厚，與典型哮喘相似，IgE介導(dǎo)的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)在咳嗽變異型哮喘的病理方面起重要作用，體內(nèi)IgE水平的增高可以反映支氣管哮喘患者的特應(yīng)征的存在［5］。因此，Th1細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子和Th2細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子之間的失衡是目前哮喘免疫治療的關(guān)鍵點(diǎn)。調(diào)節(jié)血清中Th1及Th2釋放的細(xì)胞因子水平，可抑制或阻斷氣道慢性炎癥，這可能是治療咳嗽變異性哮喘的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。常見的IL-2和IgE兩種細(xì)胞因子是此種氣道炎癥的主要效應(yīng)細(xì)胞。因此，本研究通過測(cè)定大鼠外周血IgE和IL-2的含量，探討中藥復(fù)方對(duì)咳嗽變異性哮喘的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 藥物與試劑

1.1.1 中藥復(fù)方 中藥復(fù)方由蜜麻黃、射干、黃芩、五味子、半夏、僵蠶、蟬蛻等藥物組成(甘肅省中醫(yī)院藥劑科提供)。以中劑量0.380 g/mL為等效劑量，按照1∶2∶4比例配置(分別為小、中、高劑量)，并將配置好的溶液置于4℃冰箱保存待用。1.1.2 小葵花肺熱咳喘口服液(陽(yáng)性對(duì)照組) 小葵花肺熱咳喘口服液(海南新中正制藥有限公司生產(chǎn)，國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)Z20140506)由石膏、連翹、魚腥草、麻黃等藥物組成，按照人與動(dòng)物藥物換算等效劑量為0.95 mg/kg，配置藥液在4℃冰箱保存。

1.1.3 試劑 大鼠IgE、IL-2定量夾心ELISA檢測(cè)試劑盒均購(gòu)自上海西唐生物有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用健康4周齡清潔級(jí)Wistar大鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量(100±20)g，由蘭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：2014-11-006。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組將60只清潔級(jí)大鼠隨機(jī)分為6組，A組(空白對(duì)照組)、B組(模型對(duì)照組)、C組(陽(yáng)性對(duì)照組)、D組(中藥復(fù)方小劑量組)、E組(中藥復(fù)方中劑量組)、F組(中藥復(fù)方高劑量組)，每組10只。

1.4 模型復(fù)制參照咳嗽變異性哮喘豚鼠模型復(fù)制方法［3］，采用卵蛋白和氫氧化鋁激發(fā)致敏并用卵蛋白激發(fā)的方法復(fù)制大鼠CVA模型。各實(shí)驗(yàn)組大鼠正常飼養(yǎng)1周，待其適應(yīng)環(huán)境后開始實(shí)驗(yàn)，除空白對(duì)照組外，其余實(shí)驗(yàn)組均在第1、8天每只大鼠腹腔注射10%卵蛋白和Al(OH)3混合溶液1 mL致敏。從第2周起，B、C、D、E、F 組大鼠置于密閉有機(jī)玻璃罩內(nèi)，給予含1%OVA溶液的生理鹽水超聲霧化激發(fā)20分鐘，每日早晨8時(shí)進(jìn)行超聲霧化，連續(xù)10日，激發(fā)前30分鐘，C、D、E、F 組分別灌胃給藥治療(C組予小葵花肺熱咳喘口服液灌胃1 mL；D、E、F組分別予中藥復(fù)方灌胃0.95、1.90、2.85 mL)。第3周記錄實(shí)驗(yàn)組大鼠咳嗽頻次，并于腹主動(dòng)脈取血，分離血清進(jìn)行IL-2、IgE細(xì)胞因子水平的測(cè)定。

1.5 模型評(píng)估進(jìn)行激發(fā)實(shí)驗(yàn)時(shí)，觀察各組大鼠反應(yīng)，若有陣發(fā)性咳嗽、嗆咳、毛發(fā)聳立，呼吸困難或憋氣，呼吸頻率增快，煩躁多動(dòng)等癥狀兩種或兩種以上者，或抽搐、虛脫現(xiàn)象之一者，均提示造模成功。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS 15.0軟件包分析，計(jì)量資料以(±s)表示，采用單因素方差分析，組間多重比較采用SNK-q檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 體征觀察空白對(duì)照組大鼠體質(zhì)量穩(wěn)定增長(zhǎng)，毛色光亮，反應(yīng)靈活，行動(dòng)便捷，呼吸頻率正常，節(jié)律整齊。各實(shí)驗(yàn)組大鼠在激發(fā)前呼吸平穩(wěn)，無特殊異常癥狀。激發(fā)實(shí)驗(yàn)后出現(xiàn)陣發(fā)性咳嗽，嗆咳，或打噴嚏，流清涕，鼻癢，呼吸急促，煩躁多動(dòng)等癥狀。

2.2 大鼠咳嗽頻次測(cè)定與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組咳嗽頻次增加；與模型對(duì)照組相比，陽(yáng)性對(duì)照組及中藥復(fù)方小、中劑量組咳嗽頻次明顯減少；與陽(yáng)性對(duì)照組比較，中藥復(fù)方小、中劑量組咳嗽頻次相對(duì)減少，見表1。

表1 各組大鼠咳嗽頻次比較

2.3 血清IL-2檢測(cè)結(jié)果與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組血清IgE值升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與模型對(duì)照組相比，陽(yáng)性對(duì)照組、中藥復(fù)方各劑量組血清IgE降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與高劑量組相比，小劑量組血清IgE升高，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，見表2。

2.4 血清IgE檢測(cè)結(jié)果與空白對(duì)照組比較，模型對(duì)照組血清IL-2 值降低，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；與模型對(duì)照組比較，陽(yáng)性對(duì)照組、中藥復(fù)方各劑量組血清IL-2升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；中藥復(fù)方組間比較，高劑量組與低劑量組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，與中劑量組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表3。

表2 各組大鼠血清IL-2含量(±s)

表2 各組大鼠血清IL-2含量(±s)

注：▲表示與空白對(duì)照組比較，P＜0.05；#表示與模型對(duì)照組比較，P＜0.01；★表示與高劑量組比較，P＜0.05。

組別 只數(shù) IL-2/(pg·mL-1)空白對(duì)照組 10 26.73±2.56模型對(duì)照組 10 15.68±2.12▲陽(yáng)性對(duì)照組 10 22.07±1.61#中藥復(fù)方小劑量組 10 21.43±2.46#★中藥復(fù)方中劑量組 10 23.26±1.36#中藥復(fù)方高劑量組 10 25.56±1.67#

表3 各組大鼠血清IgE含量(±s)

表3 各組大鼠血清IgE含量(±s)

注：▲表示與空白對(duì)照組比較，P＜0.01；#表示與模型對(duì)照組比較，P＜0.05；★表示與高劑量組相比，P＜0.05。

組別 只數(shù) IgE/(IU·mL-1)空白對(duì)照組 10 102.56±19.32模型對(duì)照組 10 169.34±20.28▲陽(yáng)性對(duì)照組 10 98.33±11.13#中藥復(fù)方小劑量組 10 117.81±12.19#★中藥復(fù)方中劑量組 10 107.63±11.63#中藥復(fù)方高劑量組 10 96.06±12.55#

3 討論

咳嗽變異性哮喘以持續(xù)咳嗽或咳嗽反復(fù)發(fā)作為主要臨床表現(xiàn)，本病屬中醫(yī)“咳嗽”“百日咳”“哮喘”等范疇。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為宿痰留伏是本病發(fā)生的溯源，如《丹溪心法》提出“哮喘專主于痰”，風(fēng)邪其性宣發(fā)開瀉，且屬陽(yáng)邪，易侵襲上焦肺衛(wèi)，肺失宣肅，肺氣不利，引動(dòng)伏痰，風(fēng)氣與痰涎交阻氣道，出現(xiàn)咳嗽、喘息、呼吸困難、喉中痰鳴等癥狀。中醫(yī)認(rèn)為小兒發(fā)育未臻，肺臟嬌嫩，外感邪氣，郁閉于肺，肺管不利，氣道痙攣，是本病發(fā)生的本質(zhì)。風(fēng)邪與痰液是本病發(fā)生的病理因素。發(fā)病的性質(zhì)與小兒素體相關(guān)，陽(yáng)虛、寒痰內(nèi)伏者，易發(fā)為寒性哮喘，感受風(fēng)熱之邪者，易表現(xiàn)熱性哮喘，但小兒體稟“純陽(yáng)”，又為稚陰稚陽(yáng)之體，多從陽(yáng)化熱、化火，故多以痰熱互結(jié)，壅塞氣道，搏擊氣道，發(fā)為本病。故喻嘉言云：“咳者，肺之本病也。”汪昂亦言：“肺主氣，又屬金，主聲，故咳必由于肺也?！爆F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為本病多發(fā)生于冬春季，主要表現(xiàn)為刺激性干咳，晨起及夜間咳嗽為主，天氣驟變或接觸過敏原后癥狀更突出，且具有反復(fù)發(fā)作、突發(fā)性等特點(diǎn)，追溯其病理生理基礎(chǔ)是持續(xù)的氣道炎癥和氣道高反應(yīng)性，與中醫(yī)學(xué)中“風(fēng)為陽(yáng)邪，其性開泄，風(fēng)性主動(dòng)，風(fēng)善行而數(shù)變”的致病特點(diǎn)極為相似［6］。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)多以抗過敏、緩解支氣管痙攣、緩解氣道高反應(yīng)為基本治療方案，但存在恢復(fù)期抵抗力低下，具有反復(fù)發(fā)作性及突發(fā)性表現(xiàn)，而中藥復(fù)方制劑具有多靶點(diǎn)、毒副作用小等特點(diǎn)，能對(duì)患兒機(jī)體綜合調(diào)理、提高全身免疫力，減少重復(fù)性發(fā)作癥狀。本實(shí)驗(yàn)中藥復(fù)方由蜜麻黃、半夏、五味子、僵蠶、蟬蛻、射干等藥物組成，其中麻黃辛散，疏風(fēng)宣肺，散寒平喘，以驅(qū)邪外出；五味子酸斂，二者一收一散，調(diào)節(jié)氣機(jī)，預(yù)防肺氣宣發(fā)太過；半夏為燥濕化痰，溫化寒痰之要藥，尤善治臟腑之濕痰；蟬蛻甘咸，散風(fēng)熱、宣肺、定痙；僵蠶辛咸，祛風(fēng)解痙，化痰散結(jié)。本方在宣肺止咳的同時(shí)，應(yīng)用疏風(fēng)通絡(luò)、解痙藥物，尤其是蟲類藥物如僵蠶、蟬蛻等的應(yīng)用，疏利上焦以散風(fēng)邪，透邪外出，舒張氣道，解痙止咳。諸藥合用，共奏宣肺止咳，祛風(fēng)解痙之功效［7］?，F(xiàn)代藥理研究［8］證實(shí)不少風(fēng)藥具有提高細(xì)胞免疫功能，減輕機(jī)體對(duì)過敏因素的應(yīng)激反應(yīng)，拮抗組胺，抗過敏性炎癥，可使肺之小氣道由痙攣?zhàn)優(yōu)槭鎻?，氣道通順?/p>

本研究結(jié)果表明中藥復(fù)方可緩解各實(shí)驗(yàn)組大鼠咳嗽癥狀，減少咳嗽次數(shù)；降低哮喘模型大鼠血清IgE的水平，提升血清IL-2的水平，而IgE及IL-2是引起CVA的主要細(xì)胞因子，通過調(diào)節(jié)二者血清含量，抑制或阻斷氣道慢性炎癥，達(dá)到調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能紊亂的目的，這可能是中藥復(fù)方制劑治療咳嗽變異性哮喘的作用機(jī)制之一，為開發(fā)新藥奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，也是目前治療小兒咳嗽變異性哮喘發(fā)生的關(guān)鍵所在。

［1］ 陳芳瑜，陳紅梅.中藥超聲霧化治療咳嗽變異性哮喘［J］.福建中醫(yī)藥，1996，27(5)：34-35.

［2］ 許建中，吳銀根，李明華.中西醫(yī)結(jié)合哮喘病學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：368.

［3］ 高士宗.黃帝素問直解［M］.2版.北京：科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社，1982：25-623.

［4］ 黃少丹，鐘南山.咳嗽變異型哮喘的支氣管炎癥及變態(tài)反應(yīng)特征［J］.中華結(jié)核和呼吸雜志，1997，20(5)：283-286.

［5］ 陸為華.中藥治療小兒咳嗽變異型哮喘120例［J］.上海中醫(yī)藥雜志，1999(7)：24-25.

［6］ 梁麗娜，李江全.論風(fēng)邪在小兒過敏性咳嗽發(fā)病機(jī)制中的重要作用［J］.中國(guó)中醫(yī)急癥，2011，20(8)：1355-1356.

［7］ 康妍萌.肅肺平肝養(yǎng)陰湯治療小兒咳嗽變異性哮喘的臨床研究［M］.濟(jì)南：山東中醫(yī)藥大學(xué)，2005：57.

［8］ 王強(qiáng)，孫增濤.祛風(fēng)解痙法治療咳嗽變異性哮喘［J］.吉林中醫(yī)藥，2007，27(10)：23-24.

Effects of Chinese Herbal Compound on Serum IgE and IL-2 Levels in Cough Variant Asthma Model Rats

YANG Zhihua1,2,WU Shanghua3,SHEN Yupeng1,WEI Guimei3
1 Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine,Lanzhou 730050,China;
2 Gansu Provincial Academy of traditional Chinese Medicine;
3 Baiyin Branch of Gansu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

R256.12

A

1004-6852(2016)11-0015-03

2015-10-25

甘肅省中醫(yī)藥管理局課題(編號(hào)GZK-2014-30)。

楊志華(1983—)，女，在讀博士研究生，主治醫(yī)師。研究方向：兒科常見病、多發(fā)病的中醫(yī)診治及中醫(yī)兒科教學(xué)和科研。