朱璋佩，石婭萍，閔志強(qiáng)

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青黛大鼠給藥90天胃腸毒性研究

朱璋佩，石婭萍，閔志強(qiáng)

[摘要]目的：考察青黛是否具有胃腸毒性。方法：大鼠按2.4、1.2、0.6 g生藥/kg（約相當(dāng)于臨床劑量的48倍、24倍、12倍），灌胃給予青黛，每天1次，連續(xù)90天，然后停藥恢復(fù)30天，觀察消化道毒性反應(yīng)。結(jié)果：主要毒性反應(yīng)為給藥期間給藥組動(dòng)物體重增長(zhǎng)緩慢以及大便量增多，攝食量下降，但停藥后基本恢復(fù)正常。結(jié)論：青黛可能存在一定的胃腸毒性，但具體機(jī)理未知，還需進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。

[關(guān)鍵詞]青黛；胃腸毒性；多次給藥

[作者單位]成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 611137

青黛是一味具有良好藥效作用的常用中藥，但隨著青黛在臨床上的廣泛應(yīng)用，一些復(fù)方青黛制劑不良反應(yīng)報(bào)告有所增加[1～5]。這些不良反應(yīng)主要表現(xiàn)為胃腸道反應(yīng)，但未發(fā)現(xiàn)單獨(dú)報(bào)道青黛胃腸不良反應(yīng)的有關(guān)文獻(xiàn)，因此以上不良反應(yīng)是否為青黛造成存在疑問(wèn)。本研究擬通過(guò)連續(xù)給予大鼠青黛90天，模擬青黛臨床長(zhǎng)期給藥，觀察青黛可能引起的臨床不良反應(yīng)，尤其是對(duì)消化道的影響。

1　材料和方法

1.1試藥

青黛飲片，四川江油恒源藥業(yè)提供，批號(hào)120301，試驗(yàn)時(shí)用純化水配制成所需濃度的混懸液，每次給藥前搖勻后使用。

1.2動(dòng)物

SD大鼠，SPF級(jí)，48只，體重120-160 g，雌雄各半。來(lái)源：成都達(dá)碩生物科技有限公司。生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（川）2013-24，合格證號(hào)：NO.0014599。

1.3儀器

ACS-0.6T 電子計(jì)重秤，廣東省中山市金利電子衡器有限公司；德國(guó)sartorius ALC-210.4型電子天平，德國(guó)Satorius股份有限公司；日本島津AUW120D型電子天平，XSZ-H生物顯微鏡，重慶光電儀器總公司；常州中威TSJ-Ⅲ電腦自動(dòng)組織脫水機(jī)，常州中威電子儀器廠；常州中威BMJ-Ⅲ型包埋機(jī)，江蘇省常州市中威電子儀器廠；常州中威PHY-Ⅲ病理組織漂烘儀，江蘇省常州市中威電子儀器廠；徠卡RM2126輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)，上海徠卡儀器有限公司；北京永光明202-0型臺(tái)式干燥箱，北京市永光明醫(yī)療儀器廠；日本奧林巴斯 BX41-32P02顯微鏡，日本奧林巴斯株式會(huì)社。

2　實(shí)驗(yàn)方法

2.1分組及給藥

取SD大鼠48只，鼠齡6～8周，體重120～160 g，各性別組內(nèi)每只大鼠體重不超過(guò)或低于平均體重20％，雌雄各半。分性別根據(jù)體重按隨機(jī)區(qū)組法分為對(duì)照組和高、中、低劑量組，每組12只，雌雄各半。灌胃給予受試物，每日給藥1次，給藥周期90天，停藥周期30天。高劑量按最大給藥濃度給予，折算劑量2.4 g．kg-1，中、低劑量分別為1.2、0.6 g．kg-1，分別相當(dāng)于24、12倍臨床人用劑量。對(duì)照組同法給予等體積（20 mL．kg-1）純化水。

2.2觀察及檢測(cè)指標(biāo)

給藥期、停藥恢復(fù)期間，每天觀察藥物對(duì)大鼠的中樞和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)系統(tǒng)、植物神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、泌尿生殖系統(tǒng)、皮膚和皮毛、眼等的影響。每周用電子單重秤稱體重1次，測(cè)定攝食量1次。給藥結(jié)束和恢復(fù)期結(jié)束后次晨，每組分別取6大鼠（雌雄各半），麻醉后放血處死，進(jìn)行全面細(xì)致的系統(tǒng)尸解。同時(shí)，用電子天平稱取臟器重量，并計(jì)算臟器指數(shù)。對(duì)高劑量組及空白組的消化系統(tǒng)標(biāo)本石蠟包埋切片, HE染色，在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。

2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料計(jì)算平均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差，判斷數(shù)據(jù)是否正態(tài)性，若為正態(tài)分布則采用獨(dú)立參數(shù)t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，否則采用非參數(shù)檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

3　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1一般情況觀察

給藥2天后，高、中、低劑量組大鼠排便量均較對(duì)照組多，高劑量組個(gè)別動(dòng)物出現(xiàn)稀便，顏色呈青黛藥色，給藥10天后大便質(zhì)軟但成形，中、低劑量組給藥期間大便形狀一直正常，但顏色較深；停藥3天后，各組動(dòng)物大便形狀及排量恢復(fù)正常，其余未發(fā)現(xiàn)任何異常情況。

3.2體重變化

給藥7日后，與對(duì)照組比較，給藥組大鼠體重有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義下降（p＜0.05 、p＜0.01），此后逐漸恢復(fù)，除中劑量組雄性動(dòng)物給藥35天后，其余各組動(dòng)物在給藥14天后體重與對(duì)照組比較開(kāi)始無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)，但高、中劑量組大鼠體重均數(shù)在給藥期間一直小于對(duì)照組動(dòng)物，停藥后逐漸恢復(fù)與對(duì)照組基本一致，低劑量組動(dòng)物體重受影響相對(duì)較小。結(jié)果表明藥物對(duì)動(dòng)物體重增長(zhǎng)有一定影響，特別是高、中劑量。大鼠體重變化結(jié)果參見(jiàn)圖1～3。

1　體重變化圖(♀♂合計(jì))

圖2　體重變化圖(♀)

圖3　體重變化圖(♂)

3.3攝食量

各組動(dòng)物給藥后，攝食量均較給藥前有下降，其中高劑量組下降程度最大，整個(gè)給藥期間攝食量均小于對(duì)照組，但停藥后逐漸恢復(fù)到對(duì)照組水平，而中、低劑量組在整個(gè)試驗(yàn)期間攝食量數(shù)量及變化趨勢(shì)與對(duì)照組基本相同，說(shuō)明此兩組動(dòng)物攝食量未明顯收到藥物影響。見(jiàn)圖4～6。

圖4　攝食量變化圖(♀♂合計(jì))

圖5　攝食量變化圖(♀)

圖6　攝食量變化圖(♂)

3.4系統(tǒng)尸解及臟器指數(shù)檢查結(jié)果

3.4.1系統(tǒng)尸解結(jié)果 體表檢查：對(duì)照組與給藥組大鼠外觀健康, 被毛光澤、無(wú)脫毛，皮膚粘膜無(wú)出血點(diǎn)、潰瘍及色斑，乳腺及外生殖器官無(wú)異常可見(jiàn), 各天然孔無(wú)異常分泌物。

胸腹壁皮下組織:對(duì)照組與給藥組大鼠動(dòng)物胸腹壁皮下組織未見(jiàn)出血和感染現(xiàn)象。

腹腔及盆腔檢查: 對(duì)照組與給藥組大鼠腹腔內(nèi)無(wú)積液、血液和滲出物, 各臟器位置正常, 肝、脾、胃、胰、大網(wǎng)膜、膀胱、腹膜等的形狀、位置、質(zhì)地等無(wú)異?？梢?jiàn)。腸道無(wú)出血點(diǎn)和腸道未見(jiàn)寄生蟲。雄性生殖器和雌性生殖器未見(jiàn)腫瘤、畸形或其他異常。

胸腔檢查: 對(duì)照組與給藥組大鼠胸腔無(wú)積液、出血及滲出物, 心、肺等臟器位置、大小、形狀、色澤、質(zhì)地均正常。

顱內(nèi)檢查：對(duì)照組與給藥組大鼠顱腔無(wú)積液及出血，腦未見(jiàn)水腫、膿腫、血腫和萎縮等異常情況。

3.4.2臟器指數(shù) 青黛大鼠長(zhǎng)毒灌胃給藥90天及停藥30天期間，各臟器指數(shù)檢查，各給藥組與對(duì)照組比較未見(jiàn)異常(p＞0.05)。

3.5病理組織學(xué)檢查

組織病理學(xué)檢查綜合肉眼與鏡下所見(jiàn)，大鼠給藥期與恢復(fù)期，高劑量組與對(duì)照組相比，組織形態(tài)無(wú)明顯差異，消化道器官（食道、胃、十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸、直腸、頜下腺、腮腺、胰腺、肝）均未出現(xiàn)與受試物明顯有關(guān)的組織器質(zhì)性損害的病理改變，得出結(jié)論：在試驗(yàn)劑量條件下的給藥期和恢復(fù)期，青黛對(duì)大鼠無(wú)病理?yè)p害。

4　討論及結(jié)論

針對(duì)青黛在臨床上暴露出的一系列胃腸道毒性反應(yīng)特征，本次通過(guò)90天的長(zhǎng)期給藥毒性試驗(yàn)，模擬病人長(zhǎng)期服藥，結(jié)合動(dòng)物試驗(yàn)期間的攝食量、體重檢查以及消化器官病理檢查等指標(biāo)，判斷動(dòng)物消化功能及胃腸道器官是否受到損傷。試驗(yàn)結(jié)果證明青黛對(duì)胃腸道功能有一定影響，多次給藥試驗(yàn)也發(fā)現(xiàn)2.4和1.2 g．kg-1劑量對(duì)大鼠體重及攝食量均有影響，促進(jìn)排便。

臨床使用青黛存在兩種情況，一種為短期使用，主要治療一些細(xì)菌或病毒感染類疾病，而治療銀屑病等皮膚病時(shí)，需要病人長(zhǎng)期服用。前期在單次給藥毒性試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)1 g．kg-1青黛（相當(dāng)于臨床劑量20倍），可促進(jìn)小鼠的腸推進(jìn)及排便功能，其余數(shù)據(jù)也表明在1 g．kg-1劑量以下，也可能存在胃腸道毒性反應(yīng)。結(jié)合兩次結(jié)果，初步證實(shí)青黛有一定胃腸道毒性，主要表現(xiàn)為影響體重、攝食和排便，較輕微，并未發(fā)現(xiàn)病理性損傷，同時(shí)停藥后即可恢復(fù)，提示臨床使用中需重點(diǎn)監(jiān)測(cè)的指標(biāo)，胃腸虛弱或有胃腸道病變的人群應(yīng)避免使用。

綜上，大鼠按2.4、1.2、0.6 g生藥/kg（約相當(dāng)于臨床劑量的48倍、24倍、12倍），灌胃給予青黛，每天1次，連續(xù)90天，然后停藥恢復(fù)30天，結(jié)果發(fā)現(xiàn)主要毒性反應(yīng)為給藥期間給藥組動(dòng)物體重增長(zhǎng)緩慢以及大便量增多，攝食量下降，但停藥后基本恢復(fù)正常。結(jié)果表明青黛可能存在一定的胃腸毒性，但具體機(jī)理未知，還需進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。

[參考文獻(xiàn)]

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（責(zé)任編輯：陳思敏）

·臨床中藥·

Study on gastrointestinal toxicity in rats after administration of indigo naturalis for 90 days

ZHU Zhang-pei, SHI Yaping, MIN Zhi-qiang
(Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, Sichuan)

[Abstract]Objective: To investigate the gastrointestinal toxicity ofindigo naturalis in rat.Method: The rats were intragastric administered of indigo naturalis 2.4, 1.2, 0.6 g．kg(-1)(equivalent to clinical dose 48 times,24 times, 12 times) for 90 days, 1 time a day.The gastrointestinal toxicity was observed at 30 days after drug withdrawal.Result: The main toxicity manifested as slowed weight growth, increased stool and decrease food intake which returned to normal after drug withdrawal.Conclusion: Indigo naturalis may have certain gastrointestinal toxicity, but the mechanism remains unknown which need further experimental verification.

[Key words]Indigo naturalis; gastrointestinal toxicity,; multiple administration

[收稿日期]2015-03-10

[通訊作者]閔志強(qiáng)（1979-），男，講師，主要從事中藥藥性理論與臨床應(yīng)用研究Tel:13880641950 Email:minzq@qq.com

[作者簡(jiǎn)介]朱璋佩（1994-），女，在讀本科生，主要從事中藥藥性理論與臨床應(yīng)用研究Tel:18982260169 Email:2521334588@qq.com

[基金項(xiàng)目]成都中醫(yī)藥大學(xué)?；痦?xiàng)目(編號(hào)ZRMS201333)

[中圖分類號(hào)]R 285.5

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1674-926X(2016)01-014-03