小兒清咽顆粒中青黛的薄層色譜鑒別研究

張曉南毛云宏游燕周林

云南省藥物研究所，云南昆明650111

【摘要】目的：對小兒清咽顆粒中青黛薄層色譜檢驗存在的困難進行研究，以期為提升小兒清咽顆粒的法定標準提供依據(jù)。方法：按2010年版《中華人民共和國藥典》附錄中薄層色譜法和衛(wèi)生部藥品標準《中藥成方制劑》第六冊中小兒清咽沖劑的質(zhì)量標準，對小兒清咽顆粒中青黛進行薄層色譜研究。結果：采用回流或溫浴超聲的方法提取能明顯改善青黛提取效果，樣品在與靛藍、靛玉紅對照品的位置可見清晰的斑點，陰性實驗無干擾。結論：改進后的方法簡便準確、穩(wěn)定可靠，增強了小兒清咽顆粒中青黛薄層色譜鑒別的重復性和可鑒別性。

【關鍵詞】小兒清咽顆粒；青黛；薄層色譜

【中圖分類號】R284.1

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2015)22-0021-02

Abstract:Objective To solve the problem of Indigo Naturalis testing by TLC in the real job，to improve the assay for identification. Methods The research work was according to The People's Republic of China Pharmacopoeia 2010 edition and Pharmaceutical Standards of Traditional Chinese Medicine Drugs Preparation, to determine method. Results The spots in the chromatogram obtained with the test solution correspond in position and color to the spots in the reference solution, while there was no the same color spots in the control sample. Conclusion The assay method is feasible and rational, can be validated in the quality control.

Keywords:Xiao Er Qing Yan Granule;Indigo Naturalis;TLC

收稿日期：(2015.08.24)

Identification ofIndigoNaturalisin Xiao Er Qing Yan Granule by TLC

ZHANG XiaonanMAO YunhongYOU YanZHOU Lin

Yunnan Institute of Materia Medica，Kunming 650111，China

小兒清咽顆粒是由玄參、蒲公英、牛蒡子(炒)、薄荷、蟬蛻、板藍根、連翹、牡丹皮、青黛九味藥材經(jīng)煎煮、濃縮、加入蔗糖、糊精等輔料制成的復方顆粒。具有清熱解表、解毒利咽的功效，用于小兒外感風熱引起的發(fā)熱頭痛、咳嗽音啞、咽喉腫痛。其標準收載于衛(wèi)生部藥品標準《中藥成方制劑》第六冊(標準號為：WS3-B-1092-92)[1]。小兒清咽顆粒的療效好、見效快、毒副作用低且口感較好，容易被兒童接受。小兒清咽顆粒的法定質(zhì)量標準規(guī)定要進行青黛的薄層色譜檢驗，但按照現(xiàn)有法定標準的方法操作[1-2]，不論是按標準工藝將青黛包煎，提取浸膏制粒，還是在提取好的浸膏中直接散入青黛再制粒，薄層色譜檢驗的結果都是陰性。在市場上購買了多家廠商，多個批次的小兒清咽顆粒進行了實驗也都呈現(xiàn)同樣的陰性結果。有文獻指出，按法定方法難以檢出靛藍，并從藥材相互助溶的角度加以探討[3]。由此可見，法定標準中的青黛鑒別方法存在一定的缺陷，需要改進。

在檢測小兒清咽顆粒的另一味藥材牛蒡子時，其樣品液的提取工藝是回流提取，發(fā)現(xiàn)提取液可見微弱的藍色，分析原因可能來自于青黛的靛藍，以此推測青黛的提取效果受溫度的影響比較大。研究通過提高提取溫度，有可能解決青黛檢測困難的問題，現(xiàn)報道如下。

1儀器與材料

1.1儀器AG285型電子天平；XMTD-4000型水浴鍋；SK3200LH型超聲波清洗器；OBS-2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

1.2材料靛藍(批號：110716-201111，中國食品藥品檢定研究院)；靛玉紅(批號：110717-200204，中國食品藥品檢定研究院)；自制小兒清咽顆粒1批；陰性樣品顆粒(自制)；市售小兒清咽顆粒3批(編號1：批號2014018，重慶太極集團四川南充制藥有限公司；編號2：批號20140803，建省泉州羅裳山制藥廠；編號3：批號141008，四川同人泰藥業(yè)有限公司)。水為純化水，其余試劑均為分析純。

2方法與結果

2.1供試品溶液制備

2.1.1方法1取本品4g，加含2%水合氯醛的三氯甲烷20ml，室溫26℃，40kKHz超聲波提取30 min，濾過，濾液蒸至近干，殘渣加含2%水合氯醛三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液(標準規(guī)定方法)。

2.1.2方法2取取本品4g，加三氯甲烷20ml，40℃溫水浴，并40kKHz超聲波提取30 min，濾過，濾液蒸至近干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液。

2.1.3方法3取取本品4g，加三氯甲烷20ml，60℃溫水浴，并40kKHz超聲波提取30 min，濾過，濾液蒸至近干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液。

2.1.4方法4取取本品4g，加三氯甲烷20ml，60℃溫水浴回流30 min，濾過，濾液蒸至近干，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液。

2.2對照品溶液的制備取靛藍、靛玉紅對照品，分別加三氯甲烷配制為每毫升含1.0mg的溶液，作為對照品溶液。

2.3陰性對照溶液的制備取陰性樣品顆粒4g，其余制法同供試品溶液制備方法3。

2.4展開劑及展開方式選擇法定標準規(guī)定的展開劑：甲苯-三氯甲烷-丙酮(5∶4∶1)，上行展開。

2.5檢視方法的選擇選擇法定標準規(guī)定的檢視方法：取出，晾干，置日光下檢視，斑點顏色清晰。

2.6薄層板的選擇硅膠G薄層板(青島海洋化工廠)；硅膠G薄層板(青島美高集團有限公司)；硅膠G薄層板(上海默克化工)，都可以取得較好的展開效果。實驗選擇斑點顯色最為清晰的上海默克化工技術有限公司生產(chǎn)的硅膠G薄層板。

2.7點樣方式與點樣量點樣方式為接觸點樣；點樣量為3、5、10、15μl。對照品溶液點樣量10μl及供試品溶液點樣量為10μl時能明顯檢出。

2.8溫度及相對濕度的影響按照試驗所得薄層色譜條件，考察在20℃、25℃、35℃，相對濕度為35%～70%時展開對薄層色譜結果的影響。結果在上述溫度、相對濕度范圍內(nèi)對該薄層色譜結果無明顯影響。

2.9預平衡的影響按照試驗所得薄層色譜條件，考察未飽和、飽和15min、飽和30min對薄層色譜斑點的影響。結果在上述條件下，薄層色譜斑點均清晰明顯，分離度好。為了簡化操作程序，采用未經(jīng)飽和展開。

2.10結果在上述條件下，標準品溶液和樣品溶液的點樣量都為10μl，點于硅膠G薄層板上，以甲苯-三氯甲烷-丙酮(5∶4∶1)為展開劑，上行展開，取出，晾干，置日光下檢視，自制的小兒清咽顆粒和市售的3批小兒清咽顆粒樣品，采用方法2、3、4制備的供試品溶液，所得薄層色譜都可呈現(xiàn)與靛藍及靛玉紅標準品相對應的清晰斑點，而方法1(標準方法制備)的供試品溶液色譜圖中未見明顯斑點。由此可知，提取溫度為40℃或60℃時，超聲提取和60℃回流提取樣品中的靛藍及靛玉紅都可以得到滿意的提取效果。由薄層色譜中靛藍及靛玉紅斑點的清晰程度來看，三種提取方法的提取效果沒有明顯差別，都較為理想。見圖1、2。

圖1　小兒清咽顆粒青黛不同提取方法的薄層色譜

圖2　不同批次小兒清咽顆粒青黛的薄層色譜

4討論

由結果可知，將提取溫度由室溫提高到40℃或60℃后，無論是超聲還是回流提取都能得到較為理想的結果，建議在將來法定標準提高時能將青黛鑒別檢驗的樣品溶液處理方法變更為回流或溫浴超聲。另外，靛玉紅在供試品色譜中也呈現(xiàn)出了明顯的斑點，在將來的法定質(zhì)量標準提高中，可考慮將靛玉紅也納入鑒別，以便青黛能得到更為全面的質(zhì)量控制。此外，筆者考察過水合氯醛對提取效果的影響，結果表明影響并不明顯，為操作簡便，可以選擇不加入。

法定方法建立時，必定也經(jīng)過系統(tǒng)的實驗，研究通過驗證發(fā)現(xiàn)，當室溫達到32℃時，超聲提取不需要溫浴所得提取液就可以在薄層色譜中顯現(xiàn)較為明顯的斑點。另外，小兒清咽顆粒的處方中還含有板藍根，板藍根中也含有靛藍和靛玉紅，但陰性樣品的薄層色譜中并未清晰顯現(xiàn)靛藍和靛玉紅的斑點，由此可知小兒清咽顆粒中的靛藍和靛玉紅主要來自于青黛，而來源于板藍根的靛藍和靛玉紅由于藥材中的含量就較低[4-5]，轉(zhuǎn)移到制劑中的量過少，故而不能被薄層色譜法檢出。

參考文獻

[1]國家藥典委員會.衛(wèi)生部藥品標準中藥成方制劑(第六冊)[M].1991:23.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[3]楊云芝，胥蘇勛.小兒清咽顆粒組方中對青黛成份影響的研究[J]. 現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2009,25(2):225-227.

[4]馬莉，孫琴，李友，等.HPLC法測定板藍根藥材及制劑中靛藍和靛玉紅含量[J]. 藥物分析雜志，2010，30(9):1642-1645.

[5]王永霞.不同采收期板藍根的質(zhì)量分析與考察研究[J].中國藥物經(jīng)濟學，2014，15(2)：23-24.