蔣霞 　黃銀妹 　王小潔 　蘭麗華 　李梅

【摘 要】 目的：建立祛風(fēng)安腦口服液定性、定量分析方法。 方法：采用TLC對(duì)麻黃、黃芩、防風(fēng)、川芎進(jìn)行定性鑒別；采用HPLC測(cè)定阿魏酸含量，色譜條件：以Inertsil ODS-3（250mm×4.6nm，5μm）為色譜柱，甲醇-1%冰醋酸（30∶70）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為321nm，柱溫為25℃。結(jié)果：薄層色譜斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無(wú)干擾；阿魏酸在1.824～10.940μg線性關(guān)系良好（r=0.9998），平均回收率為100.51%，RSD=1.94%。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)便易行、結(jié)果準(zhǔn)確，可作為該產(chǎn)品質(zhì)量控制的方法。

【關(guān)鍵詞】 祛風(fēng)安腦口服液；阿魏酸；HPLC ；TLC

【中圖分類(lèi)號(hào)】R286 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2016）06-0019-04

祛風(fēng)安腦口服液是我院中藥制劑，處方源于《備急千金要方》所載的續(xù)命湯，由麻黃、紅參、黃芩、肉桂、甘草、川芎、苦杏仁、熟附子、防風(fēng)、干姜、石膏、赤芍、當(dāng)歸這十三味藥材加工制成，具有疏通經(jīng)絡(luò)、調(diào)和營(yíng)衛(wèi)、解表祛邪的功效，臨床用于中風(fēng)、身體不能自持、口不能言或拘急不得轉(zhuǎn)側(cè)等癥。為保證制劑質(zhì)量穩(wěn)定可控，研究采用薄層色譜法（TLC）對(duì)該制劑主要成分麻黃、防風(fēng)、川芎、黃芩進(jìn)行薄層色譜鑒別，并參考相關(guān)文獻(xiàn)[1-2]，采用高效液相色譜法（HPLC）測(cè)定制劑中阿魏酸的含量，為制定祛風(fēng)安腦口服液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 SIL-10AF高效液相（含SPD-15C紫外檢測(cè)器，島津國(guó)際貿(mào)易上海有限公司）；XS205DU十萬(wàn)分之一天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；R-1001N旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司）；

1.2 材料 硅膠板（青島海洋化工分廠）；點(diǎn)樣毛細(xì)管（泰州市北平貿(mào)易有限公司）；黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)110715-200212，中國(guó)藥品生物制品鑒定所）；阿魏酸對(duì)照品（批號(hào)110773-201313，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；甲醇為色譜純，水為超純水，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 祛風(fēng)安腦口服液的制備 除肉桂、紅參外，其他藥材加10倍量水，加熱煎煮兩次，每次1.5h，合并2次煎液，濾過(guò)。濾液濃縮，加入乙醇至乙醇濃度為65%，靜置24h，濾過(guò)，回收乙醇至無(wú)醇味。取紅參，加10倍水，加熱煎煮2次，每次1.5h，濾過(guò)，合并2次煎液，濃縮，與上述制得的濃縮液合并，再加入肉桂粉，煮10min，過(guò)濾，加入苯甲酸3g，加蒸餾水至900ml，靜置24h，濾過(guò)，濾液調(diào)至總量為1000ml，灌裝，即得。

2.2 TLC定性鑒定

2.2.1 麻黃TLC 取樣品20ml，加氨水調(diào)pH至1～2，用乙醚萃取2次，合并乙醚層，揮干乙醚，加鹽酸乙醇（1∶20）10ml，搖勻，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，即為供試品溶液。另取鹽酸麻黃堿對(duì)照品，加甲醇制成濃度為1mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述溶液各5ml，分別點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以正丁醇-冰醋酸-水=8∶2∶1為展開(kāi)劑[3]，展開(kāi)，晾干，噴以茚三酮試液，105℃烘5min。供試品在與對(duì)照品的相應(yīng)色譜位置上，均顯相同紫紅色斑點(diǎn)，Rf=0.62。

2.2.2 川芎TLC 取制劑樣品10ml，加乙醚20ml萃取，超聲10min，過(guò)濾，揮干乙醚，加乙酸乙酯1ml，即為供試品溶液。另取相同制備工藝制成的缺川芎的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照品溶液。取川芎對(duì)照藥材1g，加乙醚20ml，超聲10min，濾過(guò)，揮干，加乙酸乙酯1ml，制成對(duì)照液。吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G板，以氯仿-甲醇=8∶1為展開(kāi)劑[4]，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾，Rf=0.857。

2.2.3 防風(fēng)TLC 取制劑樣品15ml，用乙酸乙酯萃取2次，每次20ml，合并乙酸乙酯層，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取相同制備工藝制成的缺防風(fēng)的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照液，取防風(fēng)對(duì)照藥材1g，加甲醇10ml，回流30min，濾過(guò)，濾液蒸干，加水20ml使溶解，用乙酸乙酯萃取2次，每次15ml，合并乙酸乙酯層，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解作為對(duì)照藥材溶液。吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇=4∶1為展開(kāi)劑[5]，展開(kāi)，取出，晾干。置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。陰性對(duì)照無(wú)干擾，Rf=0.758。

2.2.4 黃芩TLC 取制劑樣品10ml，用乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯層，水浴蒸干，加甲醇溶解，作為供試液。另取相同制備工藝制成的缺黃芩的陰性樣品，同法制成陰性對(duì)照品溶液。另取黃芩苷對(duì)照品，加甲醇制成濃度為1mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。吸取上述溶液各5μl，分別點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇-甲酸-水=7∶2∶0.5∶0.5為展開(kāi)劑[6]，展開(kāi)，取出，晾干。噴三氯化鐵的乙醇溶液，晾干，供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)的位置上，顯相同墨綠色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾，Rf=0.756。

2.3 HPLC含量測(cè)定

2.3.1 色譜條件 色譜柱：InertsilODS-3（250mm×4.6nm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-1%冰醋酸（30∶70）；檢測(cè)波長(zhǎng)：321nm；柱溫：25℃；流速：1ml/min；進(jìn)樣量：10μl。在上述色譜條件下，按阿魏酸峰計(jì)算，理論塔板數(shù)在4000以上[5]；祛風(fēng)安腦口服液中阿魏酸的色譜峰與其他成分的色譜峰分離良好，且陰性樣品溶液無(wú)干擾。見(jiàn)圖1。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取阿魏酸4.56mg定容于25ml棕色容量瓶中，加甲醇配成182.40μg/ml對(duì)照品儲(chǔ)備液，精密量取1ml對(duì)照品儲(chǔ)備液，定容于10ml的棕色容量瓶中，制成含70%甲醇，濃度為18.24μg/ml的對(duì)照品溶液，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備 精密稱取祛風(fēng)安腦口服液10ml，用乙醚10ml萃取，萃取3次，揮干乙醚，用甲醇定容于100ml的容量瓶，制成供試品液，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 陰性對(duì)照品溶液的制備 按處方量制成缺當(dāng)歸及川芎的陰性樣品，同供試品溶液的制備制成陰性對(duì)照液。

2.3.5 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液（18.24μg/ml）1、2、3、4、5、6ml置于10ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。按上述色譜條件，測(cè)定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y），以進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程Y=58526X+11512，r=0.9998。結(jié)果表明：阿魏酸在1.824～10.940μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3.6 精密度試驗(yàn) 吸取對(duì)照品溶液10μl，在所選色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定阿魏酸峰面積值，RSD=1.11%。結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密量取同一批樣品5份，按供試品溶液制備方法項(xiàng)下方法操作，共配制5份供試液，各進(jìn)樣10μl，結(jié)果測(cè)定出的含量RSD為1.67%，表明實(shí)驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10h進(jìn)樣，測(cè)定阿魏酸色譜峰面積，比較10h內(nèi)測(cè)得制劑含量RSD值。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，RSD為2.00%，表明本供試品溶液在室溫下放置10h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.9 加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法，取已知含量同一樣品，分別加標(biāo)0.8倍、1.0倍、1.2倍，每個(gè)水平重復(fù)3次。按上述的色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3.10 樣品測(cè)定 精密量取5批祛風(fēng)安腦口服液，并按“2.3.3”項(xiàng)下制成供試品溶液，分別取10μl，注入高效液相色譜儀，在上述的色譜條件下記錄峰面積，計(jì)算阿魏酸的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。3 討論

祛風(fēng)安腦口服液為中藥復(fù)方制劑，當(dāng)歸和川芎中的共有成分阿魏酸為有效成分之一，故實(shí)驗(yàn)選擇阿魏酸的含量作為祛風(fēng)安腦口服液質(zhì)量控制的參考依據(jù)。

由于本品為中藥復(fù)方制劑，成分復(fù)雜，故采用水提后，65%乙醇醇沉，除去水提液中的淀粉、樹(shù)膠、多糖、粘液質(zhì)色素等，而乙醇的上清液含有鞣質(zhì)、生物堿、苷類(lèi)等[7]。測(cè)定阿魏酸含量時(shí)，先用乙醚萃取3次，以減少其他成分干擾。報(bào)道阿魏酸對(duì)光和熱不穩(wěn)定[8]，因此稀釋后應(yīng)置于棕色瓶中，于冰箱中保存。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通過(guò)薄層色譜的定性鑒別，各檢出成分不受處方中其他成分的干擾，方法簡(jiǎn)便、快速、專(zhuān)屬性強(qiáng)、重復(fù)性好。通過(guò)阿魏酸的含量測(cè)定，可知祛風(fēng)安腦口服液中阿魏酸在1.824～10.940g/ml范圍內(nèi)線性良好，方法的精密度實(shí)驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)均在合理的范圍內(nèi)，且本供試品溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定，可見(jiàn)運(yùn)用本方法測(cè)定祛風(fēng)安腦口服液中阿魏酸的含量可行。

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（收稿日期：2016.01.04）