周啟保， 刁曉艷*， 張　穎， 張旺德， 趙孝梅， 官志忠

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)附院 心血管內(nèi)科， 貴州 貴陽　550004； 2.貴州醫(yī)科大學(xué) 分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 貴州 貴陽　550004)

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·專題研究·

貴州省漢族原發(fā)性高血壓CYP17A1基因的多態(tài)性*

周啟保1**， 刁曉艷1***， 張穎1， 張旺德2， 趙孝梅2， 官志忠2

(1.貴州醫(yī)科大學(xué)附院 心血管內(nèi)科， 貴州 貴陽550004； 2.貴州醫(yī)科大學(xué) 分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 貴州 貴陽550004)

[摘要]目的： 探討貴州省漢族原發(fā)性高血壓(EH)人群CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)多態(tài)性。方法： 選取貴州漢族人群的EH患者198例(EH組)和健康體檢者199例(對(duì)照組)，應(yīng)用TaqMan探針方法觀察兩組被檢者CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)的基因型及等位基因頻率分布。結(jié)果： 在EH組和對(duì)照組均檢測(cè)出CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)3種基因型，兩組間基因型分布及等位基因頻率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論： CYP17A1基因rs11191548多態(tài)性與貴州省漢族人群EH可能相關(guān)。

[關(guān)鍵詞]高血壓； CYP17A1； 基因多態(tài)性； 等位基因； 基因型； 漢族； 貴州

原發(fā)性高血壓(essential hypertension，EH)是一種高發(fā)病率的疾病，是導(dǎo)致心腦血管疾病的主要危險(xiǎn)因素[1]。EH的發(fā)病與遺傳因素和環(huán)境因素的共同作用有關(guān)[2]。已知的相關(guān)基因不下200 種,CYP17A1基因?yàn)楹蜻x基因之一。CYP17A1基因編碼細(xì)胞色素p450c17alpha蛋白，在類固醇生成途徑的調(diào)控中起重要作用。目前研究發(fā)現(xiàn)CYP17A1在不同地區(qū)、不同民族中存在差異[3-8],本研究探討CYP17A1基因的rs11191548位點(diǎn)基因多態(tài)性與貴州省漢族人群EH是否相關(guān)。

1對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

選擇2014年03月～2015年03月心內(nèi)科門診及住院的高血壓患者198例作為EH組，EH診斷按2010年中國(guó)高血壓防治指南標(biāo)準(zhǔn)；排除繼發(fā)性高血壓、瓣膜疾病、心肌病及肝、腎衰竭，孕婦、哺乳期婦女以及精神疾病史或?yàn)E用藥物患者，其中男89例，女109例，平均(54.95±11.06)歲。選擇無高血壓家族史，無各類心血管、腦血管、腎、內(nèi)分泌等方面疾病的健康體檢者199例為對(duì)照組，其中男性87例，女性112例，平均(58.94±11.58)歲。兩組被檢者在性別分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，年齡分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組均為貴州籍漢族人，且互相均無血緣關(guān)系。

1.2方法

1.2.1血壓測(cè)定采用校正的水銀柱式血壓計(jì)(刻度以2 mmHg為單位)，于上午10∶00～12∶00 測(cè)定，測(cè)血壓前30 min 內(nèi)禁止吸煙和飲咖啡，避免勞累、緊張和興奮，靜坐5 min，裸露右側(cè)上臂，肱動(dòng)脈置于和心臟同一水平線位置，每次重復(fù)測(cè)量3 次，測(cè)量相隔5 min/次，取3 次測(cè)量的平均值，由專人使用相同血壓計(jì)測(cè)量。

1.2.2基因分型按經(jīng)典常規(guī)法(酚-氯仿法)抽提白細(xì)胞DNA，溶于TE；紫外吸收法定量后標(biāo)化為30 g/L，-40 ℃?zhèn)溆谩?yīng)用TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)對(duì)CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)進(jìn)行基因分型。PCR反應(yīng)為10 μL體系：DNA(濃度為30 g/L)1.5 μL，通用TaqManPCR Master Mix 5 μL，雙蒸水3.25 μL，20×基因分型探針及引物0.25 μL。其中TaqManPCR Master Mix、基因分型探針及引物均購(gòu)自美國(guó)ABI公司，探針分別用FAM、VIC染料標(biāo)記。反應(yīng)條件為：60 ℃ 30 s，95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，共55個(gè)循環(huán)，60 ℃ 30 s，采用美國(guó)ABI公司生產(chǎn)的Step one Plus PCR儀，讀取FAM/VIC熒光判斷基因分析結(jié)果。FAM熒光探針識(shí)別T等位基因，VIC熒光探針識(shí)別C等位基因。每塊96孔板設(shè)3孔陰性對(duì)照，并隨機(jī)抽取5%樣本復(fù)測(cè)，一致性為100%。

1.3觀察指標(biāo)

對(duì)CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)基因型分布進(jìn)行H-W平衡檢驗(yàn)。比較EH組和對(duì)照組CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)基因型和等位基因頻率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2結(jié)果

2.1CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)基因型分布的H-W平衡檢驗(yàn)

注：A、B、C分別為純合子CC基因型、雜合子CT基因型、純合子TT基因型圖1　CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)基因型實(shí)時(shí)熒光定量擴(kuò)增曲線Fig.1　Real-time fluorescence quantitative PCR amplification curves of rs11191548 locus genotype in CYP17A1 gene

EH組和對(duì)照組人群CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)均檢測(cè)出有CC、CT、TT三種基因型。見圖1。經(jīng)χ2檢驗(yàn)兩組的基因型頻率均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡(P>0.05)。

2.2基因型和等位基因頻率分布

經(jīng)χ2檢驗(yàn)兩組間基因型分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.812，P<0.05)，兩組間等位基因頻率分布差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=10.849，P<0.05)，而兩組被檢者中不同性別人群比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1　EH組和對(duì)照組CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)的多態(tài)性

3討論

10q24.3區(qū)域的CYP17A1基因內(nèi)的rs11191548位點(diǎn)編碼細(xì)胞色素P450c17alpha蛋白，介導(dǎo)類固醇17alpha-羥化酶和17,20 裂解酶活性，參與膽固醇前體向雄激素或孕激素以及鹽皮質(zhì)激素或糖皮質(zhì)激素的轉(zhuǎn)化。CYP17A1基因的突變可損害腎上腺和性腺中類固醇激素的合成,導(dǎo)致17alpha-羥化酶/17,20 裂解酶缺陷癥。17alpha-羥化酶缺乏可使孕酮不能轉(zhuǎn)化為17alpha-羥孕酮，以致皮質(zhì)醇合成不足，促腎上腺皮質(zhì)激素分泌增加，促使雙側(cè)腎上腺增生，同時(shí)孕酮、11-去氧皮質(zhì)酮、皮質(zhì)酮分泌增加。去氧皮質(zhì)酮對(duì)鹽代謝的影響則表現(xiàn)為水鈉潴留，血容量增加出現(xiàn)高血壓、低血鉀等表現(xiàn)[9]。

目前對(duì)CYP17A1基因rs11191548多態(tài)性與EH關(guān)系的研究結(jié)果尚不統(tǒng)一。有研究認(rèn)為不僅在歐美人群，而且在部分非歐美遺傳背景的人群中CYP17A1基因的rs11191548多態(tài)性與收縮壓(SBP)相關(guān)[3]。對(duì)朝鮮人的研究發(fā)現(xiàn)，攜帶CYP17A1基因C最小等位基因能顯著降低SBP、舒張壓(DBP)及高血壓的患病風(fēng)險(xiǎn)[4]?，F(xiàn)國(guó)內(nèi)對(duì)該基因的研究結(jié)論也不統(tǒng)一，有研究認(rèn)為該基因rs11191548位點(diǎn)多態(tài)性與畬族人群高血壓無顯著相關(guān)[6]。而另一研究認(rèn)為該基因rs11191548位點(diǎn)與漢族人群高血壓的關(guān)系密切[8]。

但目前國(guó)內(nèi)對(duì)CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)的研究仍很局限，在不同地區(qū)、不同民族中缺乏統(tǒng)一認(rèn)識(shí)。因此本研究在貴州省漢族EH人群中對(duì)CYP17A1基因附近rs11191548位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性進(jìn)行研究。結(jié)果顯示，EH組和對(duì)照組CYP17A1基因rs11191548位點(diǎn)基因型構(gòu)成比和等位基因頻率之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。與Hong[4]研究結(jié)果一致，提示貴州省漢族EH的發(fā)病可能與該基因多態(tài)性有關(guān)。

總之，本研究證實(shí)CYP17A1基因rs11191548多態(tài)性可能與EH相關(guān)。當(dāng)然還需要大樣本量的研究進(jìn)一步證實(shí)上述結(jié)果，并從基因方面進(jìn)一步闡述CYP17A1基因與EH相關(guān)性。

4參考文獻(xiàn)

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(2015-10-23收稿，2015-12-10修回)

中文編輯： 周凌； 英文編輯： 趙毅

Interrelation betweenCYP17A1 Gene Polymorphisms and Essential Hypertension in Han Nationality of Guizhou Province

ZHOU Qibao1, DIAO Xiaoyan1, ZHANG Ying1, ZHANG Wangde2, ZHAO Xiaomei2， GUAN Zhizhong2

(1.DepartmentofInternalMedicine-Cardiovascular,AffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China； 2.TheKeyLaboratoryofMolecularBiology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To investigate the relationship between rs11191548 loci polymorphisms in CYP17A1 gene with essential hypertension in Han inhabitants of Guizhou province. Methods: TaqMan probe method was utilized to analyze the genotype of rs11191548 polymorphism in CYP17A1 gene, which was performed on 198 selected EH inhabitants as EH group and 199 normal inhabitants as control group. Results: Three genotypes of rs11191548 loci in CYP17A1 gene was detected in both groups. The genotype distribution and allele frequency distribution in two group has statistical difference (P<0.05). Conclusions: The rs11191548 loci gene polymorphism of CYP17A1 may be associated with EH in Han inhabitants of Guizhou province.

[Key words]hypertension; CYP17A1; gene polymorphism; alleles; genotype; Han nationality; Guizhou

[中圖分類號(hào)]R342; R544.11

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1000-2707(2016)01-0005-03

*[基金項(xiàng)目]國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2013BAI05B03)；貴州省“2011協(xié)同創(chuàng)新中心”[黔教合協(xié)同創(chuàng)新中心(2014)06號(hào)]

**貴州醫(yī)科大學(xué)2013級(jí)碩士研究生

***通信作者 E-mail:dxylly@sina.com網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2016-01-07

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160107.2018.034.html