祝雨田 張副興 丁彩飛

【摘要】微小RNA（microRNA，簡寫為miRNA）是一類真核生物內(nèi)源性小分子單鏈RNA（核糖核酸），長約21～25個核苷酸的非編碼RNA，通過結(jié)合到mRNA的3非編碼區(qū)（3UTR），降解mRNA或者抑制其翻譯過程，從而抑制轉(zhuǎn)錄后基因表達。研究發(fā)現(xiàn)miRNA在婦科腫瘤、多囊卵巢綜合征、子宮內(nèi)膜異位癥等疾病均有表達且起到了重要作用，最新研究發(fā)現(xiàn)miRNA在卵巢早衰發(fā)生發(fā)展過程中起到了重要作用，本文對miRNA在卵巢早衰研究中的進展及應(yīng)用前景做如下報道。

【關(guān)鍵詞】卵巢早衰；微小RNA

【中圖分類號】R71175【文獻標志碼】A

卵巢早衰（premature ovarian failure，POF）指女性40歲前由于卵巢功能衰退而引發(fā)閉經(jīng)，激素特征為高促性腺激素水平，特別是FSH升高，F(xiàn)SH>40U/L，伴雌激素水平下降，與遺傳因素、病毒感染、自身免疫性疾病、代謝性疾病、醫(yī)源性損傷等有關(guān)[1]。其發(fā)病率約為1%（1/100），青少年患者在所有卵巢早衰患者中所占的比率約為25%，多為不可逆的病理過程，多致不孕[2]。30歲發(fā)生卵巢早衰的幾率約為1/1000，20歲發(fā)生卵巢早衰的幾率約為1/10，000，原發(fā)性卵巢早衰的發(fā)生率約為1/100，000[3-5]，據(jù)文獻報道，中國人的卵巢早衰發(fā)生率約為05%[3]，卵巢早衰給尚未生育的患者帶了極大的困擾。因此卵巢早衰的早期診斷較為重要。

卵巢早衰其病理機制較為復(fù)雜，涉及卵泡耗竭（原始卵泡數(shù)量不足、卵泡閉鎖加速）、卵泡功能異常（特發(fā)性卵泡功能異常，染色體與基因因素）等[6]。而微小RNA（miRNA）在卵巢早衰過程中起到了重要作用，為進一步了解卵巢早衰的機制提供了新的思路。

1miRNA在卵巢的生長發(fā)育衰老等過程中起到了重要的作用

自1993年Ambro和Ruvkun實驗室發(fā)現(xiàn)miRNA至今的短短20年內(nèi)，國內(nèi)外對miRNA做了深入的研究[7]。研究發(fā)現(xiàn)在女性生殖系統(tǒng)中的各個器官均有豐富的miRNA表達，先后發(fā)現(xiàn)了若干呈高水平表達的miRNA，其中miR-26a、miR-125b、let7c等在卵巢中的表達量最為豐富[8]。卵巢生長發(fā)育衰老的各個階段，均有相應(yīng)的miRNA的表達，所起的作用也不盡相同。

研究表明miRNA在卵泡生長和排卵過程中起重要作用。國外學(xué)者先后在新出生的小鼠卵巢中發(fā)現(xiàn)miR-26a、let7c、miR-709有大量的表達，表明miRNA可能與卵巢的生長發(fā)育有著密切的關(guān)系[9]；研究發(fā)現(xiàn)，miR-503在卵泡生長過程中呈低表達，而在排卵前呈高表達，表明miRNA可能與排卵有密切關(guān)系。

研究表明miRNA可調(diào)節(jié)卵巢細胞甾體激素的合成[10]。如miR-17-5p、let7b的缺乏可導(dǎo)致黃體功能不足，從而影響受孕[11]；而miR-18、miR-24、miR-32、miR-25、miR-132、miR-182的高表達可造成孕激素表達的提高[10]。

研究表明miRNA可調(diào)節(jié)卵巢細胞增生和凋亡[12]。如miR-26a在子宮、子宮頸、輸卵管、卵巢等組織均呈高水平表達，可發(fā)揮抑制增生和腫瘤生長的作用[13]；排卵后，LH誘導(dǎo)顆粒細胞向黃體細胞轉(zhuǎn)化，產(chǎn)生有功能的黃體的過程中，必須抑制細胞凋亡的產(chǎn)生。研究發(fā)現(xiàn)，將miR-21的表達量降低至其基礎(chǔ)表達量的1/27時，顆粒細胞發(fā)生凋亡，不能轉(zhuǎn)化為有功能的黃體，說明miRNA可調(diào)節(jié)顆粒細胞的凋亡[14]。

miRNA還起到了其他重要作用，如對卵巢黃體功能的調(diào)節(jié)等。同時諸多因子如生殖激素對miRNA的表達也起到了調(diào)節(jié)作用。miRNA、靶基因、轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)三者在卵巢早衰中一同起到了重要調(diào)節(jié)作用。

2miRNA在卵巢早衰發(fā)生發(fā)展過程中的相關(guān)研究進展

研究表明卵巢早衰患者miRNA表達譜與正常人比較，存在差異。Yan等[15]研究發(fā)現(xiàn)卵巢早衰患者血清miRNA表達譜與正常婦女miRNA表達譜存在差異，其中有10種microRNA顯著升高（miR-202， miR-146a， miR-125b-2*， miR-139-3p， miR-654-5p， miR-27a， miR-765， miR-23a， miR-342-3p及miR-126），2種microRNA顯著降低（let-7c及miR-144）。隨著研究的進一步深入，必將篩選出越來越多的與卵巢早衰相關(guān)的miRNA。

miRNA表達的缺失可造成卵巢早衰的形成。miR-290-295是哺乳動物特有的miRNA片段，在鼠早期胚胎和胚胎生殖干細胞中有特殊表達，Medeiros等[16]研究證實miR-290-295在胚胎發(fā)育中起重要作用。在miR-290-295缺失的存活胚胎中，雌鼠的生育能力受到損害。這種生育能力損害起源于轉(zhuǎn)移的原始生殖細胞的缺陷（雌雄突變鼠中出現(xiàn)概率相同）。雌性miR-290-295-/-鼠不育無法恢復(fù)，其原因歸結(jié)于卵巢早衰（雄性鼠生育能力可以恢復(fù)，因為其生殖細胞較長的增殖生命周期）。

隨著對脆性X綜合癥基因FMR1（Fragile X mental retardation）基因了解的不斷加深，miRNA可能與卵巢早衰相關(guān)。脆性X綜合癥是遺傳性智力低下的最常見的原因，其癥狀由大量CGG三磷酸腺苷重復(fù)序列引起。小樣本流行病學(xué)研究表明55～200次的CGG重復(fù)序列可能是卵巢早衰的原因之一[17， 18]。脆性X綜合征蛋白FMRP（Fragile X mental retardation protein）是一種RNA相關(guān)蛋白，F(xiàn)RMP可通過與miRNA相互作用調(diào)節(jié)mRNA轉(zhuǎn)錄[19]，在蛋白質(zhì)合成水平調(diào)節(jié)很多基因的表達[20]。但目前沒有實驗證據(jù)表明FMR1突變干擾miRNA的作用，三者關(guān)系有待進一步研究。

研究人員對miRNA在卵巢中的作用機制進行了相關(guān)研究。miRNAs在POF患者血清中的異常表達，可能通過不同的信號通路起到了調(diào)節(jié)顆粒細胞的增生和凋亡作用。Yan等[15]研究發(fā)現(xiàn)人卵巢顆粒細胞在轉(zhuǎn)染pre-miR-23a后，XIAP蛋白、Caspase-3蛋白的表達量下降，而裂解Caspase-3蛋白表達增加，同時伴凋亡增加，說明miR-23a在POF患者血清中顯著升高，其可能通過減少XIAP蛋白的表達起到了調(diào)節(jié)凋亡的作用。

miR-181a在POF患者血清中也顯著升高，而miR-181a與活化素受體ⅡA（Activin Receptor ⅡA）之間存在相互作用，主要表現(xiàn)為miR-181a通過下調(diào)acvr2α的表達從而抑制活化素誘導(dǎo)的顆粒細胞增生，使我們對轉(zhuǎn)錄后水平卵泡發(fā)育的機制有了進一步的認識，而此機制可能涉及卵巢早衰的病理過程[21]。隨著研究的逐步深入，必將從miRNA角度進一步闡明該病的發(fā)病機制。

Rah H等[22]研究了miRNA本身多態(tài)性是否影響罹患卵巢早衰的風(fēng)險，通過對136例POF患者和234例正?；颊呋驑颖局?種miRNA單核苷酸多態(tài)性的基因分型，發(fā)現(xiàn)miR-146和miR-196a2基因間交互作用可能參與卵巢早衰的發(fā)生發(fā)展。

3展望

研究發(fā)現(xiàn)miRNA在腫瘤、心血管疾病、自身免疫性疾病、神經(jīng)變性等疾病患者組織中有著廣泛的表達，而血漿（血清）、唾液、尿液中的中miRNA可以作為標記物，避免了穿刺等創(chuàng)傷性診斷過程，在疾病的診斷中有極大的價值，同時可應(yīng)用于治療療效及疾病預(yù)后的判別，疾病相關(guān)miRNA在今后醫(yī)學(xué)的發(fā)展過程中有極大的可能成為潛在的治療靶點[23]。

隨著研究的進一步深入，必將篩選出越來越多的與卵巢早衰相關(guān)的特異性miRNA。miRNA在卵巢早衰中具有一定的應(yīng)用價值。

探究其發(fā)病機制：可以通過研究建立miRNA的表達譜的改變、蛋白質(zhì)合成的異常這兩者的相關(guān)性，從而闡明該病的發(fā)病機制，以此可推測各類病因?qū)υ摬∷a(chǎn)生的影響，進而有助于該病的治療。

早期診斷：一項研究表明50%的卵巢早衰患者在確診前已經(jīng)在至少3位臨床醫(yī)生處就診過，且25%患者作出卵巢早衰的診斷至少經(jīng)歷5年，可見卵巢早衰的早期診斷較為困難[24]。目前該病的診斷尚沒有統(tǒng)一的國際標準，導(dǎo)致臨床對該病的診斷較為混淆[25]。目前陰道超聲檢查在女性生殖器官檢查中被廣泛應(yīng)用，但陰道超聲準確性仍然不足，有一定局限性。腹腔鏡下卵巢活檢對POF的診斷有一定意義。但卵巢組織活檢在臨床工作中較難實施，而且卵泡結(jié)構(gòu)的缺失也不能絕對預(yù)測卵巢功能的喪失。臨床上使用較多的診斷方法是檢測POF患者的血清激素值，包括卵泡刺激素、雌二醇、抑制素B及抗苗勒管因子等。但臨床上患者往往是在出現(xiàn)明顯癥狀后才就診，錯過了該病的早期治療時機，而其他的診斷方法都有一定的局限性。自身抗體檢測包括抗甲狀腺抗體、抗卵巢抗體、抗腎上腺素抗體等。目前對免疫抗體的診斷意義尚存在爭論。而通過測定卵巢早衰特異性miRNA可以對該病做出早期診斷，可提前預(yù)防或治療，從而延緩該病的發(fā)病進程。

治療療效的檢測：當(dāng)前臨床上普遍以患者自覺潮熱、出汗、失眠、心悸等低雌激素的癥狀減輕，生殖器萎縮改善及性生活逐漸恢復(fù)正常，月經(jīng)來潮或妊娠分娩作為療效的判定標準。這其中不乏主觀因素。而通過患者檢測miRNA的表達譜，相對可以更為客觀地（或定量地）評價治療的療效。

判斷該病的預(yù)后：卵巢早衰患者miRNA表達譜與正常人差異的大小可用于參考POF的發(fā)病嚴重程度以及該病的預(yù)后好壞。

對于POF的諸多并發(fā)癥，如心血管疾病、骨質(zhì)疏松、糖尿病、植物神經(jīng)紊亂等的預(yù)防，探究miRNA的表達譜也具有重大的參考意義。

目前對miRNA的研究主要集中在對miRNA表達的篩查，而對其調(diào)節(jié)作用及作用特點研究較少。特征性miRNA、靶基因、轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的不斷發(fā)現(xiàn)，越來越說明其作用的廣泛性、重要性。一旦卵巢早衰相關(guān)miRNA及其作用靶點被發(fā)現(xiàn)，這些小分子潛在的臨床應(yīng)用就擺在了科學(xué)研究的前沿，這些研究必將帶來治療策略的改變和很好的治療效果[26]。

根據(jù)目前對miRNA的認識，可以預(yù)見，未來miRNA必將廣泛應(yīng)用于臨床，但仍然還有很長的路要走。

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