謝春芹，曹 正，凡軍民

（江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 句容 212400）

靈芝不同部位分離菌種的栽培性狀比較*

謝春芹，曹 正**，凡軍民

（江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 句容 212400）

為了探索靈芝最優(yōu)菌種的分離部位，對(duì)生產(chǎn)中的靈芝（Ganoderma lucidum）原基、子實(shí)體幼嫩邊緣組織、菌管、栽培基質(zhì)4個(gè)部位進(jìn)行分離、純化，并對(duì)所獲得菌株進(jìn)行栽培性狀比較。結(jié)果表明，從栽培基質(zhì)中分離純化的菌種，其菌絲生活力強(qiáng)，子實(shí)體產(chǎn)量高，生物轉(zhuǎn)化率分別比子實(shí)體幼嫩邊緣組織分離菌種高1．08%、菌管分離菌種高0．41%、原基分離菌種高0．2%，是具有推廣潛力的優(yōu)良菌株。

靈芝；分離；菌種；生產(chǎn)性能

靈芝（Ganoderma lucidum Karst） 外形呈傘狀，菌蓋腎形、半圓形或近圓形，為多孔菌科（Polyporaceae）真菌，具有補(bǔ)氣安神、止咳平喘的功效，用于治療眩暈不眠、心悸氣短、虛勞咳喘[1]。

食用菌菌種分離的方法有組織分離法、菇木（基質(zhì)）分離法和孢子分離法3種。其中，組織分離法是生產(chǎn)中最常采用的，操作簡(jiǎn)便，且能保持原有菌種的優(yōu)良品性[1-2]。本文通過(guò)靈芝組織分離法，對(duì)不同部位分離所得菌種的生產(chǎn)性能進(jìn)行比較，旨在為廣大靈芝生產(chǎn)者提供簡(jiǎn)便、有效的菌種保存、復(fù)壯的方法。

1 材料與方法

1.1 材料及來(lái)源

供試靈芝栽培菌袋由江蘇食用菌研究所提供，品種為赤芝1號(hào)。

1.2 方法

1．2．1 分離菌袋的選擇

從常規(guī)袋栽的靈芝中選取典型性狀、無(wú)病蟲害、菌絲純白、無(wú)雜色、長(zhǎng)勢(shì)好的菌袋作為分離材料[3]，4個(gè)部位的菌種均從同一菌袋中分離獲得。

1．2．2 菌種分離方法及培養(yǎng)條件

本次試驗(yàn)從靈芝4個(gè)部位分離菌種，其方法如表1。培養(yǎng)條件均為（20±1）℃；黑暗；空氣相對(duì)濕度（RH）為60%～70%。

1.2.3 栽培出菇的方法

表1 靈芝菌種不同部位的分離方法Tab.1 Method of strains separate from different parts of Ganoderma lucidum

按常規(guī)菌種生產(chǎn)程序和方法[4-5]，制作再生母種、原種，并進(jìn)行栽培出菇試驗(yàn)，通過(guò)出菇驗(yàn)證該方法分離的菌種即為赤芝1號(hào)。在相同條件下將4種方法分離培養(yǎng)的赤芝1號(hào)菌種進(jìn)行栽培與出菇性狀比較，其步驟如下：

（1）栽培配方

棉籽殼53%、木屑25%、玉米芯30%、石膏粉1%、石灰1%，料水比為1∶1.2[6]。

（2）拌料

按常規(guī)方法采用機(jī)器拌料，培養(yǎng)料含水量調(diào)到65%左右為宜。

（3）調(diào)節(jié)pH值

赤芝1號(hào)菌絲生長(zhǎng)較適合的pH值為6.8～7.4，在裝袋時(shí)，應(yīng)將混合培養(yǎng)料的pH值調(diào)節(jié)至較適合菌株生長(zhǎng)范圍內(nèi)。

（4）裝袋

采用裝袋機(jī)裝袋，每袋濕料重0.85 kg左右，每種分離方法的菌種裝60袋，記錄每袋濕料的準(zhǔn)確重量，并貼好標(biāo)簽。

（5）滅菌

料裝好后，用高壓蒸汽滅菌，壓力1.4 kg·cm-2～1.5 kg·cm-2（溫度為126℃左右），維持1.5 h。

（6）接種

將滅菌后的料袋放在超凈工作臺(tái)內(nèi)，當(dāng)溫度降至30℃以下時(shí)進(jìn)行接種，用接種鑷子將栽培培養(yǎng)料中央的洞穴擴(kuò)大，取2勺原種迅速放入栽培培養(yǎng)料料面和穴內(nèi)。

（7）菌絲培養(yǎng)

將接種好的栽培袋移至培養(yǎng)室內(nèi)，培養(yǎng)室的溫度為20℃～22℃，空氣相對(duì)溫度為60%～70%，保持黑暗，第1周通風(fēng)2次/日，8 min·次-1～10 min·次-1；2周后通風(fēng)3次·d-1，10 min·次-1～15 min·次-1；經(jīng)25 d～30 d培養(yǎng)菌絲即可長(zhǎng)滿栽培袋。

（8）出菇管理

將長(zhǎng)滿菌絲的栽培袋，拔掉塞子，用消毒過(guò)的鑷子去掉料面的老菌皮，移至出菇室內(nèi)，出菇室溫度為28℃～32℃，空氣相對(duì)溫度為85～95%，給予一定的散射光，通風(fēng)3次·d-1～4次·d-1，20 min·次-1～30 min·次-1。

2 結(jié)果與分析

2.1 相同PDA培養(yǎng)基上4種分離部位的菌絲生長(zhǎng)情況

將菌管、基質(zhì)、子實(shí)體邊緣幼嫩組織、子實(shí)體原基分離純化菌種的菌絲，接種到PDA平板培養(yǎng)基上，在相同條件下，比較4種分離部位的菌絲生長(zhǎng)情況。通過(guò)定期測(cè)量、觀察和統(tǒng)計(jì)，獲得菌種菌絲萌發(fā)的時(shí)間、日生長(zhǎng)速度、菌絲長(zhǎng)勢(shì)和菌絲生長(zhǎng)中的污染情況，見表2。

表2 4種分離部位菌絲在PDA培養(yǎng)基上的生長(zhǎng)情況Tab.2 Hyphae growth condition of four separate parts of Ganoderma lucidum in PDA medium

由表2可見，從基質(zhì)中分離菌種的菌絲生長(zhǎng)快且健壯，抗性強(qiáng)；而從原基分離所獲得的菌絲生長(zhǎng)則最慢，但抗性較強(qiáng)。

2.2 固體培養(yǎng)料內(nèi)4種分離部位菌絲的生長(zhǎng)情況

將4種分離部位菌種接種于相同的固體培養(yǎng)料中，在同等條件下培養(yǎng)，定期測(cè)量菌絲的生長(zhǎng)速度。其菌絲生長(zhǎng)情況見表3。

表3 4種分離部位菌種在固體培養(yǎng)料上菌絲生長(zhǎng)情況Tab.3 Hyphae growth condition of four separate parts of Ganoderma lucidum on solid substrates

由表3可見，從基質(zhì)中分離菌種的菌絲生長(zhǎng)快且健壯，抗性強(qiáng)；從其他3個(gè)部位分離的菌絲在固體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)較慢，其中，從子實(shí)體幼嫩邊緣分離的菌絲抗性較弱，易感染雜菌。

2.3 相同栽培條件下4種分離部位菌種的子實(shí)體生長(zhǎng)情況

在相同的培養(yǎng)條件下，比較不同分離部位菌種的生長(zhǎng)情況，結(jié)果見表4。

表4 相同栽培條件下4種分離部位菌種子實(shí)體生長(zhǎng)情況Tab.4 Fruit body growth condition of four separate parts of Ganoderma lucidum under the same cultivation condition

由表4可見，栽培基質(zhì)中分離的菌種，在菌絲生長(zhǎng)、出菇性狀上均優(yōu)于其它3種分離部位所獲的菌種。從栽培基質(zhì)中分離到的菌種與子實(shí)體幼嫩邊緣分離的菌種相比，除了前者的菌絲生長(zhǎng)速度比后者更快以外，二者的生物轉(zhuǎn)化率也存在差異，前者的生物轉(zhuǎn)化率比后者高1.08%。

3 結(jié)論

3.1 從基質(zhì)中分離菌種的菌絲生長(zhǎng)較快

同一菌袋不同分離部位的菌種，在相同培養(yǎng)條件下，由基質(zhì)中分離獲得菌種的菌絲無(wú)論在PDA培養(yǎng)基上，還是栽培在固體培養(yǎng)基中，其生長(zhǎng)速度均快于其他分離部位的菌種。

3.2 從基質(zhì)中分離的菌種生活力強(qiáng)、產(chǎn)量高

通過(guò)栽培出菇試驗(yàn)可見，基質(zhì)中分離的菌種無(wú)論是抗污染性，還是子實(shí)體產(chǎn)量均明顯優(yōu)于常用的其他3個(gè)分離部位的菌種?；|(zhì)菌種栽培的子實(shí)體菌蓋最大，但菌蓋比較薄，在栽培過(guò)程中，適當(dāng)降低室溫（25℃～28℃），即可使菌蓋加厚。

栽培出菇實(shí)驗(yàn)證實(shí)，基質(zhì)中分離得到菌種的生物轉(zhuǎn)化率最高，說(shuō)明在相同培養(yǎng)條件下，基質(zhì)中分離的菌種菌絲分解與利用培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)的能力較強(qiáng)。

[1]耿向永，鮑隆友，陳芝蘭，等.西藏野生靈芝菌種組織分離技術(shù)研究[J].中國(guó)食用菌，2009，28（4）：25-27.

[2]廉婷.食用菌菌種分離與保藏方法[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2012（7）：154-155.

[3]劉國(guó)民，李娟玲，周經(jīng)陽(yáng).野生喜熱靈芝菌種分離技術(shù)研究[J].熱帶生物學(xué)報(bào)，2011，2（3）：119-122.

[4]王慶武，蘭玉菲，羅霞，等.泰山赤芝代料栽培配方篩選試驗(yàn)[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，45（11）：60-62.

[5]黃卓忠，韋仕巖，王燦琴，等.靈芝仿生態(tài)優(yōu)質(zhì)高效栽培技術(shù)[J].食用菌，2013（1）：44-45.

[6]陳友，胡佳娟，陳忠蔭，等.海南野生靈芝培養(yǎng)基配方優(yōu)化[J].瓊州學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，20（2）：33-35.

Comparison on the Yield of Isolated Strains from Different Parts of Ganoderma lucidum

XIE Chun-qin,CHAO Zheng,FAN Jun-ming
(Jiangsu Polytechnic College of Agriculture and Forestry,Jurong 212400,China)

To investigate the isolated parts with the best strains of Ganoderma lucidum,four parts of G.lucidum in production including the primordium,the young edge tissue of the fruiting body,the mushroom tube and the culture medium were isolated and purified in laboratory respectively,and the cultivation properties of the strains were compared．According to the results,the mycelium of the strain isolated and purified from the culture medium was with strong viability,high yield of the fruiting body, and its biotransformation rate was higher with 1．08%,0．41%,0．2%than purified strain of the young edge tissue of the fruiting body,mushroom tubeand primordium respectively．

Ganoderma lucidum;isolation;strain;yield

S646.9

A

1003-8310（2016）01-0028-03

10．13629/j．cnki．53-1054．2016．01．007

江蘇省農(nóng)業(yè)三新工程項(xiàng)目（SXGC[2014]75）。

謝春芹（1976-），女，碩士，副教授，主要從事食（藥）用菌教學(xué)與研究。E-mail:xiechunqin＠163．com

**通信作者：曹正（1967-），男，碩士，副教授，主要從事畜禽飼料的加工開發(fā)教學(xué)與研究。E-mail:963243057＠qq．com

2015-09-19