李 毅

(漢江水利水電(集團(tuán))有限責(zé)任公司漢江醫(yī)院，武漢 442799)

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·臨床研究·

急性胰腺炎miR-216a的臨床表達(dá)及其在胰腺炎診斷中的臨床意義

李 毅

(漢江水利水電(集團(tuán))有限責(zé)任公司漢江醫(yī)院，武漢 442799)

目的 探討急性胰腺炎miR-216a的表達(dá)與其在胰腺炎診斷中的臨床意義。方法 選取2014年5月至2015年10月該院收治的急性胰腺炎患者30例作為A組，30例伴有血淀粉酶升高的非急性胰腺炎患者作為B組，選取同期到該院體檢的健康者30例作為C組，RNA抽提各組研究對象的血漿標(biāo)本，并采用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)對所有標(biāo)本的miR-216a進(jìn)行檢測分析。結(jié)果 A組患者的外周血細(xì)胞miR-216a 表達(dá)明顯高于C組(P<0.05)。而B組患的miR-216a和C組相比則差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 急性胰腺炎患者的外周血細(xì)胞miR-216a表達(dá)水平升高，可以作為急性胰腺炎臨床診斷的一項(xiàng)重要生物標(biāo)志物，在急性胰腺炎患者的臨床治療中具有較高的臨床價值。

急性胰腺炎; miR-216a; 臨床診斷

急性胰腺炎(AP)主要是因?yàn)榛颊唧w內(nèi)的胰酶被多種病因于胰腺內(nèi)激活，進(jìn)而導(dǎo)致患者的胰腺局部出炎性反應(yīng)，常伴隨或者不伴隨其他器官功能變化疾病，該疾病病發(fā)后如果得不到及時有效的治療，很可能會發(fā)展為重癥胰腺炎，給患者的生命帶來威脅[1-2]。當(dāng)前，臨床上診斷AP主要有腹膜炎的具體體征、麻痹性腸梗阻的實(shí)際表現(xiàn)、血性腹水情況、腹水淀粉酶上升情況及影像學(xué)檢測等，但是這些診斷效果并不顯著[3-4]。近年來，經(jīng)過臨床醫(yī)學(xué)深入研究AP發(fā)病機(jī)制后，發(fā)現(xiàn)胰腺炎患者胰腺組織中的蛋白表達(dá)會發(fā)生變化，而且在蛋白表達(dá)調(diào)節(jié)時，miRNA又起著至關(guān)重要的作用，并且認(rèn)為miR-216持續(xù)升高是胰腺高特異性miRNA之一[5-6]。本文主要就AP miR-216a的表達(dá)與其在胰腺炎診斷中的臨床意義進(jìn)行分析，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2014年5月至2015年10月本院收治的AP患者30例作為A 組，男17例，女13例，平均年齡(36.20±8.53)歲；30例伴有血淀粉酶升高的非AP患者作為B組，男20例，女10例，平均年齡(38.10±6.61)歲；選取同期到本院健康體檢者30例作為C組，其中男15例，女15例，平均年齡(37.30±6.28)歲。3組研究對象在年齡、性別等一般資料方面，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 儀器與試劑 抽提試劑選用血清RNA，實(shí)時使用的熒光定量PCR試劑盒由TaKaRa公司制造；U6與miR-216a 特異性檢測的引物由上海英俊公司提供；7500的實(shí)時熒光定量PCR 儀由ABI公司制造，DU800 型分光光度計(jì)由Beckman公司生產(chǎn)。

1.3 方法 (1)采用實(shí)時定量熒光PCR檢測所有人員的外周血細(xì)胞miR-216a的表達(dá)，采集其抗凝外周靜脈血2 mL，進(jìn)行12 000 r/min離心，離心時間10 min，把細(xì)胞組織成分內(nèi)的血漿分離。每個血漿標(biāo)本提取200 μL，然后加入到5 pmol/L的cel-miR-39 5 μL中，再加20 μL的醋酸5 mol/L和750 μL的抽提TRI Regent RNA，依據(jù)TRI Regent的標(biāo)準(zhǔn)步驟開始，待抽取的RNA以40 μL無核酸酶水溶解之后，將其置放在-80 ℃的環(huán)境中。2 μL抽提得到的RNA運(yùn)用TaqMan miRNA Reverse Transcription Kit以反轉(zhuǎn)方式進(jìn)行記錄，使用miR-216a和U6自身的特異性開始引物反轉(zhuǎn)錄，U6則可以作為內(nèi)參基因。(2)提取反轉(zhuǎn)產(chǎn)物2 μL，并當(dāng)作模板，使用TaqMan Universal Master MixⅡ試劑盒，檢測實(shí)時定量熒光PCR的實(shí)際水平，反應(yīng)條件為：95 ℃ 1 min、95 ℃ 10 s及58 ℃30 s，總共有45次循環(huán)。對不同類型的標(biāo)本，使用2-△△Ct值對比分析，當(dāng)△Ct等于作為目的Ct值再減掉內(nèi)參基因的Ct值，△△Ct則等于標(biāo)本△Ct再減掉正?！鰿t。2-△△Ct的數(shù)值是胰腺炎血漿內(nèi)miRNA正常血漿倍數(shù)的主要反映。(3)測量出脂肪酶和淀粉酶，血淀粉酶濃度應(yīng)用自動分析儀進(jìn)行檢測，脂肪酶的濃度則采用羅氏公司生產(chǎn)的Cobas-mira檢測。

2 結(jié) 果

2.1 3組研究對象的外周血淀粉酶與酯酶的變化比較 A組血漿中的酯酶水平為(43.62±1.26)U/L、B組為(40.13±1.96)U/L、C組為(10.62±1.52)U/L，A組血漿中的淀粉酶為(31.26±2.95)U/L、B組為(27.65±2.95)U/L、C組為(9.65±1.37)U/L；A組淀粉酶和酯酶水平明顯高于B組與C組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，而B組與C組的外周血淀粉酶與酯酶水平則無明顯變化，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2.2 3組研究對象的外周血miR-216a變化 A組患者的外周血miR-216a值為5.054明顯高于B組的2.761與C組的2.648，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3 運(yùn)用ROC曲線對miR-216a 在胰腺炎診斷的價值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析 ROC曲線證實(shí)miR-216a 能夠作為該疾病診斷的一個重要指標(biāo)，區(qū)分出胰腺炎患者與健康者，當(dāng)中效果最為明顯的截?cái)嘀担梢杂蒑edCalc軟件自行生成，miR-216a最終的曲線下面積確認(rèn)為0.892，最佳的截?cái)嘀祫t可確認(rèn)為1.832 5，敏感性為85.25%，特異性為87.08%。

3 討 論

AP在臨床上非常多見，是一種危急重癥，患者發(fā)病之后，很快便會出現(xiàn)休克、代謝性酸中毒及多器官功能衰竭等多種臨床，病死率極高。目前，這種疾病的主要發(fā)病原因還未得到明確。臨床上對AP患者進(jìn)行診斷，多數(shù)是觀察AP患者的臨床癥狀或者對其血液進(jìn)行檢測，再對其腹膜炎體征進(jìn)行比較，觀察其是否有顯著的麻痹性腸梗阻現(xiàn)象；血性腹水、腹水淀粉酶是否呈現(xiàn)上升狀態(tài)及B超和CT檢查胰腺是否腫脹[7-8]。近年來，經(jīng)過相關(guān)人員的深入研究，miR-216a表達(dá)成為了AP診斷中的另一個診斷指標(biāo)。

miRNA屬于內(nèi)源性質(zhì)的非編碼調(diào)控單鏈分子RNA，長度多在18～25個核苷酸。miRNA表達(dá)異常是導(dǎo)致人類疾病的一個重要因素，主要是因?yàn)閙iRNA在不同的組織中，其特異性miRNA的表達(dá)譜也會存在一定的差異，這就表示miRNA 能夠作為人體疾病診斷的一個重要指標(biāo)。AP患者發(fā)病時，其胰腺組織蛋白表達(dá)譜會出現(xiàn)較大的變化，而miRNA 正是基因表達(dá)調(diào)控中最常用的一種方法，在人體基因表達(dá)調(diào)控中有著至關(guān)重要的作用。相關(guān)研究顯示，miR-216a在人體胰腺組織內(nèi)，屬于一個高特異性表達(dá)的miRNA物質(zhì)[9]。研究顯示，AP患者血漿中的脂肪酶和淀粉酶水平均會有不同程度的增加，而血漿miR-216a在胰腺炎血漿內(nèi)的表達(dá)量也會持續(xù)上升。證明了miR-216a可以作為AP患者臨床診斷的一項(xiàng)重要生物標(biāo)志物。王一飛等[10]對miR-216a 在AP血漿中特異性高表達(dá)情況進(jìn)行了研究，該項(xiàng)研究選取了18例血漿淀粉酶增高的急性闌尾炎患者血液進(jìn)行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)脂肪酶與淀粉酶明顯高于健康者，而miR-216a則無明顯著差異。

相關(guān)研究結(jié)果顯示，經(jīng)過血漿miR-216a 的檢測，并將其作為AP患者的臨床診斷工具，其敏感性與特異性都比較高[11]。雖然可以將其作為臨床診斷的重要標(biāo)志，但是想要讓生物標(biāo)記物也真正意義上應(yīng)用到臨床診斷中，還需要實(shí)現(xiàn)以下幾個方面的目標(biāo)：擴(kuò)大標(biāo)本數(shù)量，深入研究miR-216a 有關(guān)的表達(dá)特性；通過前瞻性的實(shí)驗(yàn)研究和發(fā)現(xiàn)更多的血漿miRNA標(biāo)志物等，均是提高AP診斷水平的重要內(nèi)容[12-13]。

本研究結(jié)果顯示，A組患者的miR-216a表達(dá)明顯高于B組與C組(P<0.05)，但是B組與C組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。由此可見，AP患者的外周血細(xì)胞miR-216a水平升高，可以作為AP臨床診斷的一項(xiàng)重要生物標(biāo)志物，在AP的臨床診斷中具有較高的應(yīng)用價值。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.23.046

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