張?jiān)蒲?仇衛(wèi)民,江春梅

(江蘇省連云港市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 222002)

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·個(gè)案與短篇·

1例肝癌患者磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法HIV假陽(yáng)性分析

張?jiān)蒲?仇衛(wèi)民,江春梅

(江蘇省連云港市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 222002)

磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法; 免疫印跡; 人類(lèi)免疫缺陷病毒

我國(guó)艾滋病感染患者人數(shù)逐年增加，因此早期診斷和發(fā)現(xiàn)人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)感染，對(duì)預(yù)防HIV的傳播、控制艾滋病的流行顯得尤其重要。目前國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)HIV抗體多采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行初篩。但是ELISA對(duì)一些臨床上低濃度標(biāo)本的檢測(cè)效果不好，容易出現(xiàn)漏診或者誤診等問(wèn)題，而磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法具有靈敏度和特異度高、檢測(cè)簡(jiǎn)便，結(jié)果的重復(fù)性好、線性范圍也寬、并且有著安全無(wú)毒、無(wú)放射性污染等優(yōu)點(diǎn)，在國(guó)內(nèi)近年來(lái)得以迅速開(kāi)展，給臨床診斷和流行病學(xué)篩查帶來(lái)了好處[1]。本文通過(guò)磁微粒化學(xué)發(fā)光檢測(cè)HIV抗體,發(fā)現(xiàn)1例肝癌患者初篩為陽(yáng)性，用其他方法檢測(cè)為陰性?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 患者男，47歲，既往慢性乙型肝炎30余年，有吸煙史，飲酒史。患者于2016年2月20日無(wú)明顯誘因出現(xiàn)腹脹、腹痛就診于江陰市中醫(yī)肝膽醫(yī)院，彩超提示：肝占位、門(mén)靜脈栓塞；肝硬化腹水；脾大。來(lái)本院進(jìn)一步診治，查尿常規(guī)示：膽紅素1+。肝功能檢查顯示：總膽紅素61 μmol/L，間接膽紅素26 μmol/L，天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶91 U/L，γ-谷安酰轉(zhuǎn)移酶251 U/L，堿性磷酸酶167 U/L。并作兩對(duì)半和丙肝、HIV的檢測(cè)。

1.2 試劑與儀器

1.2.1 篩查試劑 HIV化學(xué)發(fā)光法初篩試劑為國(guó)產(chǎn)某生物工程有限公司提供(批號(hào)150901)，ELISA初篩試劑A為英科新創(chuàng)(批號(hào)2015106621)，B為珠海麗珠試劑(批號(hào)2015081212)、C為北京萬(wàn)泰(批號(hào)I20150715)，D為上?？迫A(批號(hào)20150311)，E為雅培磁微?；瘜W(xué)發(fā)光Architect HIV Ag/Ab Combo(批號(hào)52332LI00)?？鞕z試劑為杭州艾康試劑(批號(hào)2016030076)。

1.2.2 確診試劑 免疫印跡試驗(yàn)：新加坡MP生物醫(yī)學(xué)亞太私人有限公司生產(chǎn)的HIV1+2型抗體診斷試劑盒(MP試劑)(批號(hào)4H09628)。以上幾種試劑均經(jīng)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理注冊(cè)批準(zhǔn)，批批檢合格，在有效期內(nèi)使用。

1.2.3 儀器 雅培磁微?；瘜W(xué)發(fā)光儀、國(guó)產(chǎn)磁微粒全自動(dòng)免疫分析儀、BID-iMARK酶標(biāo)儀、BID-750洗板機(jī)。

2 結(jié) 果

2.1 HIV抗體初篩檢測(cè) 使用國(guó)產(chǎn)磁微粒化學(xué)發(fā)光儀A對(duì)患者進(jìn)行兩對(duì)半和丙型肝炎(丙肝)、HIV和梅毒抗體檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果兩對(duì)半為小三陽(yáng)，丙肝、梅毒抗體陰性。HIV S/CO值為41.25。按照《全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范》(2009年版)的要求[2],對(duì)HIV初篩呈陽(yáng)性反應(yīng)的樣品，應(yīng)使用原有試劑和另外一種不同原理(或廠家)的試劑進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)。將同一份患者的血清用英科新創(chuàng)生產(chǎn)的ELISA HIV抗體試劑盒和杭州艾康快速篩查試劑進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)均為陰性。隨之將原血清置于同一廠家、同一型號(hào)磁微?；瘜W(xué)發(fā)光儀B進(jìn)行檢測(cè)，HIV抗體S/CO值為40.56，為HIV抗體待復(fù)檢。見(jiàn)表1。

表1 HIV初篩試驗(yàn)結(jié)果及判定

注：-表示無(wú)數(shù)據(jù)。

2.2 HIV抗體驗(yàn)證檢測(cè) 標(biāo)本用同一批次磁微?；瘜W(xué)發(fā)光試劑盒復(fù)測(cè)，結(jié)果為陽(yáng)性，與初測(cè)結(jié)果表現(xiàn)一致，均為陽(yáng)性。英科新創(chuàng)、北京萬(wàn)泰、珠海麗珠、上?？迫A酶免和雅培抗原抗體檢測(cè)(磁微粒化學(xué)發(fā)光法)復(fù)測(cè)，檢測(cè)結(jié)果均為陰性。免疫印跡試驗(yàn)確認(rèn)結(jié)果為陰性。

2.3 自身抗體檢測(cè) 3月10日將患者血清做類(lèi)風(fēng)濕因子(RF)檢測(cè)，結(jié)果為陰性，自身抗體中抗可溶性肝抗原抗體陰性、抗核抗體(IgG型) 陰性、抗平滑肌抗體(Ig型) 陰性、抗線粒體抗體(IgAGM型) 陰性、抗胃壁細(xì)胞抗體(IgG型) 陰性、抗肝腎微粒體抗體(IgG型) 陰性、抗心肌抗體(IgG型) 陰性、抗線粒體抗體IgG型(M2亞型) 陰性、抗著絲點(diǎn)抗體(IgG型)也為陰性。

3 討 論

HIV抗體檢測(cè)包括初篩試驗(yàn)和確認(rèn)試驗(yàn)，即先用高敏感性的方法進(jìn)行初篩，呈陽(yáng)性反應(yīng)后，再經(jīng)過(guò)高特異性的確認(rèn)試驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)。常用的篩查試驗(yàn)包括ELISA(3、4代)、明膠顆粒凝集試驗(yàn)(PA)、快速檢測(cè)RT(金標(biāo)、硒標(biāo))以及全自動(dòng)免疫分析儀等，其中以ELISA最常用。確認(rèn)實(shí)驗(yàn)包括免疫印跡試驗(yàn)、放射免疫沉淀試驗(yàn),PCR法檢查HIV DNA以及免疫熒光試驗(yàn)等，而國(guó)內(nèi)以免疫印跡試驗(yàn)最常見(jiàn)[3]。

本病例檢測(cè)HIV抗體的初篩實(shí)驗(yàn)為磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法。它是化學(xué)發(fā)光免疫分析法與磁性微粒載體技術(shù)相結(jié)合的一種檢測(cè)方法，采用雙抗原夾心法原理進(jìn)行檢測(cè)。以HIV抗原包被磁微粒，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記HIV抗原制備酶結(jié)合物，通過(guò)免疫反應(yīng)形成抗原-抗體-酶標(biāo)記抗原復(fù)合物，該復(fù)合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子，發(fā)光強(qiáng)度與HIV抗體的含量成正比。由于懸浮性磁微粒作為載體具有較高的比表面積，能夠更為充分地與樣品反應(yīng)，加之外加磁場(chǎng)的靈活應(yīng)用，較之酶標(biāo)板載體具有更高的靈敏度、更快的檢測(cè)速度和更好的重復(fù)性等優(yōu)點(diǎn)[4]。即便如此，化學(xué)發(fā)光法出現(xiàn)假陽(yáng)性的病例也時(shí)有報(bào)道[5]。但報(bào)道的多數(shù)病例為幾種篩查試驗(yàn)結(jié)果為陽(yáng)性，確診試驗(yàn)結(jié)果為陰性。而本病例為磁微?；瘜W(xué)發(fā)光結(jié)果為陽(yáng)性，且S/CO值較高，呈強(qiáng)反應(yīng)性。而ELISA、膠體金實(shí)驗(yàn)結(jié)果為強(qiáng)陰性。因?yàn)檫@幾種方法所做出的結(jié)果有較大的分歧，故又采用其他幾家廠家的篩查試劑和雅培磁微?；瘜W(xué)發(fā)光進(jìn)行平行試驗(yàn)，結(jié)果也均為陰性。后采用免疫印跡試驗(yàn)作確認(rèn)實(shí)驗(yàn)。最終結(jié)果為陰性。

通過(guò)一系列的實(shí)驗(yàn)，筆者認(rèn)為問(wèn)題出在磁微?；瘜W(xué)發(fā)光上?，F(xiàn)分析如下：通常導(dǎo)致血清免疫學(xué)檢測(cè)假陽(yáng)性的原因可分為外源性和內(nèi)源性，外源性因素包括標(biāo)本的溶血、黃疸、標(biāo)本離心時(shí)間短，血清分離不好有纖維蛋白存在、儀器偶然誤差、標(biāo)本污染、工作人員操作誤差等[6]。內(nèi)源性因素主要是一些內(nèi)源性干擾物質(zhì)的影響，常見(jiàn)的干擾物包括RF、補(bǔ)體、嗜異性抗體、各種自身抗體、因使用鼠抗體治療或診斷誘導(dǎo)的抗鼠Ig抗體、交叉反應(yīng)物質(zhì)等[7]。此標(biāo)本血清分離清晰，不存在溶血，黃疸輕度，在實(shí)驗(yàn)中多次檢測(cè)，結(jié)果穩(wěn)定，因而可以排除外源性因素。該患者標(biāo)本為甲胎蛋白高值標(biāo)本，且乙肝表面抗原和乙肝核心抗體為強(qiáng)陽(yáng)性，臨床診斷該患者為肝硬化或肝癌患者。有文獻(xiàn)研究顯示，某些疾病如惡性腫瘤、自身免疫性疾病、妊娠、心血管疾病、肝炎等，這些疾病患者體內(nèi)含有某些治療性抗體、類(lèi)脂嗜異性抗體、自身抗體、類(lèi)風(fēng)濕因子、甲胎蛋白等，這些物質(zhì)會(huì)與試劑中的抗原成分產(chǎn)生非特異結(jié)合反應(yīng)[8-9]；或一些特殊人群如孕婦、嬰幼兒、老年人以及腫瘤癌癥患者等，他們體內(nèi)會(huì)產(chǎn)生嗜異性抗體導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果異常[10-11]。但此患者自身抗體 、類(lèi)風(fēng)濕因子均為陰性。在入院之前從沒(méi)有用過(guò)鼠單克隆抗體制劑治療過(guò)，因而產(chǎn)生人抗鼠抗體的可能性很小，基本上排除了人抗鼠抗體對(duì)試劑中鼠源性抗體的干擾。最大可能性是患者體內(nèi)有一些類(lèi)脂嗜異性抗體與HIV試劑包被用抗原及標(biāo)記用抗原制備過(guò)程中純度(雜蛋白)及片段選取的特異性有同源性(如選取片段的同源性，在保證可檢出各基因型及亞型的前提下，選擇同源性較好的片段)，由于抗體和異質(zhì)抗原間的交叉反應(yīng)可能發(fā)生多種非特異性吸附作用，導(dǎo)致假陽(yáng)性出現(xiàn)[12]。因臨床上像這種肝病的患者較多，但從未有過(guò)此情況，因而是個(gè)體差異，而非是肝病本身造成的。當(dāng)然國(guó)產(chǎn)的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光HIV試劑在提純包被過(guò)程中也有待于提高質(zhì)量，這樣才能減少假陽(yáng)性結(jié)果的出現(xiàn)。

盡管磁微?；瘜W(xué)發(fā)光檢測(cè)有著諸多的優(yōu)點(diǎn)，但高敏感度同時(shí)必然造成假陽(yáng)性結(jié)果的增高。 因而在工作中對(duì)于一些出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，一定要按照全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范要求操作。這樣才能避免發(fā)出假陽(yáng)性報(bào)告而造成醫(yī)療糾紛。

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10.3969/j.issn.1673-4130.2016.23.064

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1673-4130(2016)23-3381-02

2016-04-11

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