齊慧　戴艷紅　后婕　周瓊瓊　魏先梅　楊燁　佘萬(wàn)東

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突發(fā)性聾患者糖皮質(zhì)激素治療前后外周血單個(gè)核細(xì)胞Nrf2表達(dá)分析*

齊慧1戴艷紅1后婕1周瓊瓊1魏先梅1楊燁1佘萬(wàn)東1

【摘要】目的探討突發(fā)性聾(sudden sensorineural hearing loss，SSNHL)患者體內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2(nuclear factor erythroid2 related factor,Nrf2)的變化及其與糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid, GC)抵抗的關(guān)系。 方法分離30例SSNHL患者治療前后外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)，提取總RNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real time PCR，QRT-PCR)方法檢測(cè)其PBMCs中Nrf2 mRNA的表達(dá)量。根據(jù)就診時(shí)間及用藥情況將這30例SSNHL患者分為初發(fā)組(7例)和難治組(23例)；難治組又根據(jù)聽(tīng)力恢復(fù)是否≥15 dB分為GC有效組(10例)及抵抗組(13例)；選擇10例聽(tīng)力正常的志愿者為對(duì)照組；比較各組SSNHL患者治療前后Nrf2 mRNA表達(dá)量及與GC抵抗的關(guān)系。結(jié)果①30例患者中，治療前難治組、初發(fā)組Nrf2 mRNA表達(dá)量分別為0.520±0.049、0.514±0.052，兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=0.052,P=0.911)，但均低于對(duì)照組(0.607±0.106)(F=6.483,P=0.004)；②治療前難治組中GC有效組、抵抗組患耳0.25~8 kHz平均聽(tīng)閾(pure tone average, PTA)分別為81.75±13.28和91.80±13.79 dB HL，治療后分別為54.67±15.65和89.87±13.98 dB HL。治療后GC有效組Nrf2 mRNA表達(dá)量(0.560±0.051)較治療前(0.510±0.028)有所上調(diào)(t=3.007, P=0.015)，而GC抵抗組Nrf2 mRNA表達(dá)量(0.519±0.054)較治療前(0.526±0.060)無(wú)明顯變化(t=0.485, P=0.636)。結(jié)論Nrf2表達(dá)上調(diào)或下降可能參與SSNHL的發(fā)生發(fā)展；難治性SSNHL患者GC抵抗的機(jī)制可能與Nrf2低表達(dá)相關(guān)，上調(diào)Nrf2可能改善難治性SSNHL患者對(duì)GC的敏感性和預(yù)后。

【關(guān)鍵詞】突發(fā)性聾； 糖皮質(zhì)激素；NF-E2相關(guān)因子2；外周血單個(gè)核細(xì)胞

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2015-12-3010：55

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/42.1391.R.20151230.1055.002.html

突發(fā)性聾 (sudden sensorineural hearing loss，SSNHL)極為常見(jiàn)，但具體發(fā)病機(jī)制仍然不明，目前認(rèn)為可能與病毒感染、血管因素、自身免疫和代謝紊亂等相關(guān)[1]。糖皮質(zhì)激素(glucocorticoid, GC)是目前較為公認(rèn)治療突發(fā)性聾有效的藥物[1~4]，但經(jīng)過(guò)積極治療后，仍有部分患者聽(tīng)力無(wú)明顯改善,提示部分患者可能存在GC抵抗[5,6]。組蛋白去乙酰基酶2(histone deacetylase 2, HDAC2)作為一種能夠從組蛋白N-乙?；?lài)氨酸上去除乙?；拿福赏ㄟ^(guò)調(diào)控組蛋白的乙?；?，影響染色體重塑，被認(rèn)為是炎癥性疾病GC抵抗的重要因素[7]。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)過(guò)鼓室灌注GC加全身抗氧化劑治療后，約半數(shù)突發(fā)性聾患者的外周單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)中HDAC2 表達(dá)增加，聽(tīng)力改善，而GC治療無(wú)效患者HDAC2蛋白活性是下降的，提示HDAC2下調(diào)可能是難治性SSNHL患者激素抵抗的重要原因[8,9]，但其下調(diào)的原因尚不明確。有研究表明轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2(nuclear factor erythroid2 related factor,Nrf2)的下調(diào)可使HDAC2蛋白活性降低，從而導(dǎo)致患者GC抵抗[10]。Nrf2作為一種抗氧化轉(zhuǎn)錄因子，在抵制各種壓力環(huán)境下導(dǎo)致的氧化應(yīng)激(oxidative Stress，OS)中發(fā)揮關(guān)鍵作用[11]。生理?xiàng)l件下，Nrf2在細(xì)胞質(zhì)中與Kelch樣ECH聯(lián)合蛋白1(kelch-like ECH-associated protein1, Keap1)結(jié)合，被泛素化。在氧化應(yīng)激刺激時(shí)，Nrf2與Keap1解離而發(fā)生活化[12]，活化的Nrf2進(jìn)入細(xì)胞核,與抗氧化反應(yīng)元件(ARE)結(jié)合，啟動(dòng)ARE下游的基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，以抵抗內(nèi)外界的有害刺激[13]。本研究在前期研究[8,9]的基礎(chǔ)上，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real time PCR，QRT-PCR)方法檢測(cè)SSNHL患者GC治療前后PBMCs中Nrf2 mRNA的表達(dá)量，探討其表達(dá)變化及其與GC抵抗的關(guān)系。

1資料與方法

1.1研究對(duì)象及分組研究對(duì)象為2014年7月至2015年5月于南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院確診并收治的SSNHL患者30例，其中男15例，女15例，年齡24～74歲，平均43.93±15.41歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)耳鼻咽喉頭頸外科學(xué)分會(huì)制定的突發(fā)性聾診斷標(biāo)準(zhǔn)[14]，0.5~4 kHz平均聽(tīng)閾(pure tone average, PTA)>60 dB HL，無(wú)感音神經(jīng)性聾家族史；均為單耳發(fā)病，排除了中耳、蝸后病變或有明確病因引起的感音神經(jīng)性聽(tīng)力損失；排除中途退出研究或失訪(fǎng)者。

根據(jù)有無(wú)接受10天以上的常規(guī)治療(包括全身使用GC、改善微循環(huán)、營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)等)分為初發(fā)組(7例)和難治組(23例)。所有患者發(fā)病至接受此次治療的時(shí)間間隔為2～57天，其中初發(fā)組患者平均為3.85±1.06天，難治組患者平均為23.17±16.43天；難治組又根據(jù)發(fā)病后三個(gè)月時(shí)受損頻率(0.25~8 kHz)PTA改善是否≥15 dB分為GC有效組和GC抵抗組[8,9]。選取聽(tīng)力正常、無(wú)耳部疾病的鼻中隔偏曲志愿者10例作為正常對(duì)照組，其中男6例，女4例，年齡19～36歲，平均26.20±5.38歲。本研究獲得南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2治療方法初發(fā)組患者全身靜脈滴注甲強(qiáng)龍(海正輝瑞公司)(80 mg/天×4天，然后40 mg/天×3天，20 mg/天×3天)，難治組患者經(jīng)鼓膜置管鼓室給予甲強(qiáng)龍(40 mg/ml，海正輝瑞公司)(20 mg/天×10天)[6]。所有患者均同時(shí)接受銀杏葉提取物注射液、單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉連續(xù)治療10天。10天后復(fù)查純音聽(tīng)閾，每月隨訪(fǎng)觀察鼓膜及聽(tīng)力改善情況。

1.3QRT-PCR法檢測(cè)PBMCs中Nrf2 mRNA表達(dá)在取得受試者同意后，分別于治療前、治療后第10天采集患者組及對(duì)照組空腹外周血20 ml，放入含有EDTA抗凝的試劑管內(nèi)，采用密度梯度離心法分離PBMCs；按照Trizol法(Invitrogen公司)提取總RNA，使用前用紫外分光光度計(jì)測(cè)其濃度和純度。根據(jù)TAKARA公司試劑盒Prime Script RT Master Mix說(shuō)明書(shū)操作，以5 μl總RNA為模板，進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)條件為37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 sec,合成cDNA，-20 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

QRT-PCR檢測(cè)Nrf2 mRNA表達(dá)：GAPDH及Nrf2引物由TAKARA公司合成(表1)，按TAKARA SYBR Premix EX TaqII說(shuō)明書(shū)配備模板，上機(jī)(ABI StepOnePlusTMReal-Time PCR System)擴(kuò)增，以GAPDH作為內(nèi)參，對(duì)Nrf2 mRNA表達(dá)進(jìn)行相對(duì)定量。反應(yīng)條件：PCR循環(huán)參數(shù)設(shè)定為95 ℃預(yù)變性30秒，95 ℃變性5秒，60 ℃退火/延伸34秒，循環(huán)40次，擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，進(jìn)行融解曲線(xiàn)分析，判定是否有非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的存在。計(jì)算Nrf2及GAPDH基因的Ct值，兩者之差即為△Ct值，再進(jìn)行2-△Ct計(jì)算，即作為評(píng)價(jià)Nrf2 mRNA相對(duì)表達(dá)水平的指標(biāo)。

表1　RT-PCR引物序列

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法使用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù), 本組資料符合正態(tài)分布，治療前初發(fā)組、 難治組與對(duì)照組的組間差異采用單向方差分析，治療前初發(fā)組與難治組之間采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)，同一組治療前后結(jié)果比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1初發(fā)組、難治組SSNHL患者治療效果初發(fā)組和難治組治療后0.25～8 kHz平均PTA較治療前均有所提高(表2)，總有效率為50%，其中初發(fā)組有效率為71.43%(5/7)，難治組有效率為43.47%(10/23)。

表2初發(fā)、難治組SSNHL患者治療前后PTA

組別例數(shù)(例)治療前治療后T值P值初發(fā)組792.73±18.7666.15±28.563.178<0.001難治組2384.71±16.5072.21±23.154.0710.019合計(jì)3088.47±14.9871.66±24.263.798<0.001

2.2治療前SSNHL患者PBMC中Nrf2 mRNA表達(dá)量治療前初發(fā)組、難治組Nrf2 mRNA表達(dá)量(分別為0.514±0.052和0.520±0.049)均低于對(duì)照組(0.607±0.106)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=6.483，P=0.004)；初發(fā)組(0.514±0.052)與難治組Nrf2 mRNA表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(T=0.052，P=0.911)。

2.3難治性SSNHL患者中GC有效組、無(wú)效組治療前后PTA及Nrf2 mRNA表達(dá)量難治組中治療后GC有效10例(有效組)，GC無(wú)效13例(無(wú)效組)，治療后GC有效組患者PBMC中Nrf2 mRNA表達(dá)量有所上調(diào)(P<0.05)，而GC無(wú)效組患者Nrf2 mRNA表達(dá)量治療前后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，治療前GC有效組與GC無(wú)效組間Nrf2 mRNA表達(dá)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，治療后兩組間差異也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P>0.05)(表3)。

±s)

注：*與同組治療前Nrf2 mRNA比較，P<0.05，**與同組治療前PTA比較，P<0.01

3討論

有報(bào)道指出SSNHL患者體內(nèi)活性氧(reactive oxygen species,ROS)升高[15]，而抗氧化治療可有效提高SSNHL患者GC治療的效果[16]，提示氧化應(yīng)激可能參與了SSNHL的發(fā)生發(fā)展，而Nrf2作為一種抗氧化轉(zhuǎn)錄因子，在機(jī)體內(nèi)主要通過(guò)抵制氧化應(yīng)激，抵抗內(nèi)外界的有害刺激[13]。本研究結(jié)果顯示治療前初發(fā)組、難治組突聾患者PBMC中Nrf2 mRNA的表達(dá)量均低于正常對(duì)照組，提示Nrf2可能參與SSNHL的發(fā)生發(fā)展。正常情況下，Nrf2表達(dá)可以抵消機(jī)體升高的氧化應(yīng)激[13，17]，所以當(dāng)Nrf2下調(diào)時(shí)，體內(nèi)氧化-抗氧化平衡被打破，升高的氧化應(yīng)激使耳蝸內(nèi)ROS增多，誘發(fā)耳蝸毛細(xì)胞和螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡或死亡,導(dǎo)致耳聾的發(fā)生[18~20]。而升高的ROS，使得細(xì)胞內(nèi)低氧誘導(dǎo)因子1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF1α)升高[21]，HIF1α通過(guò)加強(qiáng)信號(hào)通路轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)而增加炎癥因子的表達(dá)，導(dǎo)致疾病的發(fā)生發(fā)展[17,22]。本研究中，治療前難治組SSNHL患者與初發(fā)組患者之間PBMC中Nrf2 mRNA表達(dá)量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能原因是難治性SSNHL患者在第一次接受常規(guī)治療后，體內(nèi)抗氧化能力尚未提高，聽(tīng)力無(wú)明顯改善，故Nrf2 mRNA的表達(dá)量與初診患者相比無(wú)明顯提高。

前期研究提示HDAC2蛋白活性下調(diào)可能是SSNHL患者發(fā)生GC抵抗的原因之一[8,9]，但其下調(diào)的原因不明。有報(bào)道指出氧化應(yīng)激能明顯降低HDAC酶的活性，打破組蛋白乙酰化/去乙?；胶?，阻斷GC的抗炎效應(yīng)[12]；也有證據(jù)顯示Nrf2減少能夠降低HDAC2蛋白的表達(dá)和活性[11，23]，從而導(dǎo)致患者GC不敏感；Nrf2可以通過(guò)調(diào)控HDAC2去亞硝基化，導(dǎo)致炎癥基因轉(zhuǎn)錄抑制，從而提高GC敏感性[10]。Adenuga等[24]在Nrf2與HDAC2相關(guān)性研究中發(fā)現(xiàn)，Nrf2基因敲除(Nrf2-/-)小鼠肺內(nèi)的HDAC2水平明顯下降，HDAC2基因的轉(zhuǎn)錄受Nrf2活性的調(diào)節(jié)，Nrf2缺失可導(dǎo)致HDAC2的水平降低，降低HDAC2去乙?；幕钚浴１狙芯堪l(fā)現(xiàn)，GC有效組患者治療后Nrf2 mRNA的表達(dá)量較治療前有所上調(diào)(P<0.05)，而GC無(wú)效組治療前后Nrf2 mRNA的表達(dá)量無(wú)明顯變化，與前期研究中顯示的難治性SSNHL患者HDAC2蛋白活性的變化一致，提示Nrf2可能參與GC抵抗；因而考慮Nrf2 mRNA表達(dá)下調(diào)可能參與HDAC2蛋白的活性下降，與其他研究報(bào)道的Nrf2與HDAC2相關(guān)性相符[10,4,24,25]。GC有效組患者聽(tīng)力均有提高，Nrf2 mRNA表達(dá)量也有所上調(diào)，提示Nrf2上調(diào)可能有助于改善SSNHL患者的預(yù)后。在后期實(shí)驗(yàn)中需要增加樣本量，增加觀察指標(biāo)，以便進(jìn)一步的深入研究證實(shí)。

參考文獻(xiàn)4

1Stachler RJ, Chandrasekhar SS, Archer SM, et al. Clinical practice guideline: sudden hearing loss[J]. Otolaryngol Head Neck Surg,2012,146:S1.

2中國(guó)突發(fā)性聾多中心臨床研究協(xié)作組.中國(guó)突發(fā)性聾分型治療的多中心研究[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2013, 48:355.

3Wei BP, Stathopoulos D, O'Leary S. Steroids for idiopathic sudden sensorineural hearing loss[J]. Cochrane Database Syst Rev,2013,7.doi:10.1002/14651858.

4Schreiber BE , Agrup C , Haskard DO, et al. Sudden sensorineural hearing loss[J]. Lancet,2010,375:1203.

5Nakagawa T, Sakamoto T, Hiraumi H, et al. Topical insulin-like growth factor 1 treatment using gelatin hydrogels for glucocorticoidresistant sudden sensorineural hearing loss: a prospective clinical trial[J]. BMC Med,2010,8:76.

6She W, Dai Y, Du X, et al. Hearing evaluation of intratympanic methylprednisolone perfusion for refractory sudden sensorineural hearing loss[J].Otolaryngol Head Neck Surg,2010,142:266.

7Barnes PJ , Adack IM. Glucocorticoid resistance in inflammatory diseases[J]. Lancet,2009, 373:1905.

8Hou J, She W, Du X, et al. Histone deacetylase 2 in sudden sensorineural hearing loss patients in response to intratympanic methylprednisolone perfusion[J]. Otolaryngol Head Neck Surg,2015,doi:10.177/0194599815606911.

9后婕, 戴艷紅, 謝利生,等.難治性突發(fā)性聾患者外周血單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)HDAC2表達(dá)與其預(yù)后的相關(guān)性分析[J]. 聽(tīng)力學(xué)及言語(yǔ)疾病雜志,2014,22:559.

10Malhotra D, Thimmulappa RK, Mercado N, et al. Denitrosylation of HDAC2 by targeting Nrf2 restores glucocorticosteroid sensitivity in macrophages from COPD patients[J]. J Clin Invest,2011, 121:4289..

11Strom J, Xu B, Tian X, et al. Nrf2 protects mitochondrial decay by oxidative stress[J]. FASEB J,2015, doi:10.1096/fi.14-268904.

12Biswal S, Thimmulappa RK, Harvey CJ. Experimental therapeutics of Nrf2 as a target for prevention of bacterial exacerbations in COPD[J]. Proc Am Thorac Soc,2012, 9:47.

13Kim SJ, Park C, Han AL, et al. Ebselen attenuates cisplatin-induced ROS generation through Nrf2 activation in auditory cells[J]. Hear Res,2009, 251:70.

14中華醫(yī)學(xué)會(huì)耳鼻咽喉頭頸外科學(xué)分會(huì),中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志編輯委員. 突發(fā)性聾的診斷和治療指南[J].中華耳鼻咽喉頭頸外科雜志, 2015, 50: 443.

15Capaccio P, Pignataro L, Gaini LM, et al. Unbalanced oxidative status in idiopathic sudden sensorineural hearing loss[J]. Eur Arch Otorhinolaryngol,2012,269:449..

16Yang CH, Ko MT, Peng JP, et al. Zinc in the treatment of idiopathic sudden sensorineural hearing loss[J]. Laryngoscope,2011,121:617.

17Wiegman CH, Li F, Clarke CJ, et al. A comprehensive analysis of oxidative stress in the ozone-induced lung inflammation mouse model[J]. Clin Sci (Lond), 2014 ,126:425.

18王璐, 丁大連, 孫虹,等. 對(duì)內(nèi)耳氧化抗氧化失衡的反思[J].臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志,2013, 22:965.

19Chang J, Jung HH, Yang JY, et al. Protective effect of metformin against cisplatin-induced ototoxicity in an auditory cell line[J]. J Assoc Res Otolaryngol,2014,15:149.

20Du Z, Yang Y, Hu Y, et al. A long-term high-fat diet increases oxidative stress, mitochondrial damage and apoptosis in the inner ear of D-galactose-induced aging rats[J]. Hear Res,2012, 287:15.

21Hielscher A, Gerecht S. Hypoxia and free radicals: Role in tumor progression and the use of engineering-based platforms to address these relationships[J]. Free Radical Biology and Medicine,2015,79:281.

22Riva C, Donadieu E, Magnan J, et al. Age-related hearing loss in CD/1 mice is associated to ROS formation and HIF target proteins up-regulation in the cochlea[J]. Exp Gerontol,2007, 2:327.

23Ito K, Hanazawa T, Tomita K, et al. Oxidative stress reduces histone deacetylase2 activity and enhances IL-8 gene expression: role of tyrosine nitration[J]. Biochem Biophys Res Commun,2004,315:240.

24Adenuga D, Caito S, Yao H, et al. Nrf2 deficiency influences susceptibility to steroid resistance via HDAC2 reduction[J].Biochem Biophys Res Commun,2010,403:452.

25Mercado N, Thimmulappa R, Thomas CM, et al. Decreased histone deacetylase 2 impairs Nrf2 activation by oxidative stress[J]. Biochem Biophys Res Commun,2011, 406:292.

(2015-09-14收稿)

(本文編輯李翠娥)

·臨床研究·

Study of the Expression of Nrf2 in Peripheral Blood Mononuclear Cells From Sudden

Deafness Patients Treated with Methylprednisolone

Qi Hui, Dai Yanhong, Hou Jie, Zhou Qiongqiong, Wei Xianmei, Yang Ye, She Wandong

(Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, the Affiliated Drum Tower

Hospital, Medical School of Nanjing University,Nanjing,210008,China)

【Abstract】ObjectiveTo evaluate the expression of Nrf2 and the relationship in patients with sudden deafness.MethodsPBMCs were collected from 10 hearing normal volunteers (control group) and 30 sudden sensorineural hearing loss patients before and after treatment with methylprednisolone for 10 days. We divided the SSNHL patients into 2 groups (Initial treatment group and difficult-to-treat group)according to their visit time and treatment way. We also divided the difficult-to-treat SSNHL patients into 2 groups(GC sensitive group and GC insensitive group)according to their hearing recovery. Quantitative Real Time PCR was used to detect the expression level of Nrf2 mRNA in PBMCs. The data were analyzed with SPSS 18.0 software.ResultsBefore accept treatment, the expression level of Nrf2 mRNA in PBMCs from Initial treatment group and difficult-to-treat group were below

*國(guó)家自然科學(xué)基金(81271074)，江蘇省臨床醫(yī)學(xué)科技專(zhuān)項(xiàng)(BL2014002),江蘇省第十批“六大人才高峰項(xiàng)目”(WSN-009)，南京市國(guó)際聯(lián)合研究項(xiàng)目(2012sd311038)聯(lián)合資助

1南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院耳鼻咽喉科(南京210008)

control group whereas there was no obvious difference between the two groups. The Nrf2 mRNA expression in GC sensitive group increased whereas The Nrf2 mRNA expression in GC insensitive group had no obvious change after 10 days treatment with methylprednisolone.ConclusionNrf2 may take part in the generation and development in SSNHL. Difficult-to-treat SSNHL with corticosteroid in-sensitivity may have relationship with the lower Nrf2 expression. We speculate that increasing the expression of Nrf2 may improve the effect of glucocorticoids and has a positive effect for hearing improvement.

【Key words】SSNHL;Glucocorticoid resistance;Nrf2;PBMCs

通訊作者：佘萬(wàn)東(Email:shewandong@163.com)

作者簡(jiǎn)介：齊慧，女，安徽人，研究生，主要研究方向?yàn)槁?tīng)力學(xué)基礎(chǔ)與臨床。

【中圖分類(lèi)號(hào)】R764.43+3

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1006-7299(2016)01-0001-04

DOI：10.3969/j.issn.1006-7299.2016.01.001