董春光　李利　劉忠倫　于常州　肖祥

?

兒童分泌性中耳炎患者咽鼓管及鼻咽部表面活性物質(zhì)檢測*

董春光1李利1劉忠倫2于常州3肖祥1

【摘要】目的檢測并分析分泌性中耳炎(secretory otitis media, SOM)患兒咽鼓管和鼻咽部表面活性物質(zhì)。探討表面活性物質(zhì)與SOM發(fā)病機(jī)制的關(guān)系。方法收集28例分泌性中耳炎患兒(SOM組)和32例非分泌性中耳炎患兒(非SOM組)咽鼓管及鼻咽部灌洗液，Mason法檢測飽和磷脂酰膽堿、Pyrogallol法檢測總蛋白，對結(jié)果進(jìn)行分析。結(jié)果SOM組鼻咽部及咽鼓管中飽和磷脂酰膽堿含量為5.500 4±2.798 mg/L，總蛋白含量為3.542±0.764 5 mg/L，非SOM組飽和磷脂酰膽堿含量為13.081±1.409 3 mg/L，總蛋白含量為9.043 6±3.078 7 mg/L，SOM組表面活性物質(zhì)含量顯著低于非SOM組(均為P<0.01)。結(jié)論分泌性中耳炎患兒咽鼓管及鼻咽部表面活性物質(zhì)含量降低，表面活性物質(zhì)含量降低可能參與了分泌性中耳炎的發(fā)病機(jī)制。

【關(guān)鍵詞】分泌性中耳炎；表面活性物質(zhì)；飽和磷脂酰膽堿；總蛋白

網(wǎng)絡(luò)出版時(shí)間：2015-12-2815：13

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/42.1391.R.20151228.1513.034.html

分泌性中耳炎(secretory otitis media, SOM)是耳科常見病和多發(fā)病，是導(dǎo)致聽力損失的主要原因之一。目前SOM的病因尚不完全明確，咽鼓管功能障礙是導(dǎo)致分泌性中耳炎的重要原因之一；有研究表明咽鼓管內(nèi)存在一種類似于肺表面活性物質(zhì)的物質(zhì)，主要成分為磷脂酰膽堿和蛋白，能降低相對應(yīng)的黏膜表面張力，調(diào)節(jié)咽鼓管的開放，該物質(zhì)含量降低則不利于咽鼓管的開放[1~4]。本研究擬通過比較分泌性中耳炎與非分泌性中耳炎患兒咽鼓管及鼻咽部表面活性物質(zhì)的含量，探討表面活性物質(zhì)在分泌性中耳炎發(fā)病中的作用，報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1研究對象及分組以2011年10月至2013年10月診治的因扁桃體及腺樣體肥大需手術(shù)治療的患兒60例為研究對象，年齡4~10歲，平均7.09±1.42歲。分泌性中耳炎入選標(biāo)準(zhǔn)：聽力下降的患兒鼓室導(dǎo)抗圖為B型或C型，耳鏡檢測可見鼓膜渾濁或內(nèi)陷，或者見液平；伴有慢性鼻-鼻竇炎，或采樣前2周內(nèi)使用過鼻用糖皮質(zhì)激素、標(biāo)準(zhǔn)桃金娘油、鹽酸氨溴索等藥物者均不納入本研究。60例患兒中28例確診為分泌性中耳炎(SOM組)，男15例，女13例，年齡7.14±1.51歲，分泌性中耳炎病程2~15個(gè)月，平均7.03±3.57月，單耳11例，雙耳17例；32例患兒聲導(dǎo)抗呈A型曲線，鼓膜正常，設(shè)為非分泌性中耳炎組(非SOM組)，其中男18例，女14例，年齡7.14±1.50歲。所有患兒均在全麻下行雙側(cè)扁桃體加腺樣體切除術(shù)，分泌性中耳炎組中12例同期行鼓膜置管術(shù)。

1江蘇省連云港市第一人民醫(yī)院耳鼻咽喉科(連云港222002)；2江蘇省連云港市第一人民醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心；3徐州醫(yī)學(xué)院麻醉實(shí)驗(yàn)室

1.2咽鼓管及鼻咽部表面活性物質(zhì)檢測方法所有病例均在全麻下手術(shù)前取咽鼓管及鼻咽部灌洗液，全麻成功后頭后仰低位，鼻內(nèi)鏡下用特制彎頭沖洗管對準(zhǔn)咽鼓管咽口部位，用無菌生理鹽水10 ml分別沖洗雙側(cè)咽鼓管咽口及鼻咽部，回吸后收集灌洗液5~7 ml，置于-70 ℃冰箱保存待檢。分別采用Mason法和Pyrogallol法檢測灌洗液中飽和磷脂酰膽堿和總蛋白含量。

Mason法檢測飽和磷脂酰膽堿：取1 000 g灌洗液離心5分鐘處理樣品，以樣品與正乙烷溶液和0.5%碘正乙烷溶液反應(yīng)，用紫外分光光度計(jì)在292 nm處，測定反應(yīng)液的吸光度，飽和磷脂酰膽堿的含量與吸光度成正比。標(biāo)準(zhǔn)品飽和磷脂酰膽堿 (購買于sigma公司 )梯度配置標(biāo)準(zhǔn)品 0.01、0.02、0.04、0.05 mg/ml制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

Pyrogallol法檢測總蛋白：配0.1%考馬斯亮藍(lán)溶液;制作蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后按比例添加1 mg/ml BSA ，NaCl，G250考馬斯亮藍(lán)溶液 1 ml配置成不同濃度梯度蛋白標(biāo)準(zhǔn)品； 混勻后，室溫放置2 min。在生物分光光度計(jì)上比色分析。 樣品蛋白含量檢測參考標(biāo)準(zhǔn)品檢測方法即取足量的1.5 ml離心管，每管加入4 ℃儲(chǔ)存的考馬斯亮藍(lán)溶液1 ml。室溫放置30 min后即可用于測蛋白。再加95 μl 0.15 mol/L NaCl溶液和5 μl待測蛋白樣品，混勻后靜置2 min，倒入扣干的比色杯中即可檢測。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，兩組間比較用t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

兩組總蛋白及飽和磷脂酰膽堿檢測結(jié)果見表1，可見，分泌性中耳炎組總蛋白和飽和磷脂酰膽堿均顯著低于非分泌性中耳炎組(P<0.01)。

±s)

注：*與非SOM組比較,P<0.01

3討論

分泌性中耳炎是以中耳積液及聽力下降為特征的中耳非化膿性炎性疾病，多發(fā)生于上呼吸道感染后，以耳悶脹感、聽聲遙遠(yuǎn)和聽力減退為主要癥狀。目前認(rèn)為分泌性中耳炎的發(fā)生與咽鼓管功能障礙、免疫變態(tài)反應(yīng)及感染因素有關(guān)。兒童分泌性中耳炎發(fā)病率較高，易反復(fù)發(fā)作，部分患兒持續(xù)時(shí)間較長，同時(shí)由于兒童對癥狀描述不清致就診不及時(shí)，持續(xù)存在的SOM可造成兒童聽力損失，甚至影響語言發(fā)育。

早在 1963年就有學(xué)者提出咽鼓管黏膜層存在一種物質(zhì)，且研究發(fā)現(xiàn)咽鼓管表面活性物質(zhì)和肺表面活性物質(zhì)很相似，雖然其含量不同，但均以磷脂成分為主[5]。1989年Tsuruhara在豚鼠咽鼓管上皮檢測到表面活性物質(zhì)類似物，表面活性物質(zhì)主要由磷脂、多糖和蛋白組成，其可降低咽鼓管表面纖毛粘液毯的表面張力，防止管壁粘連，有助于分泌物排出；而表面活性物質(zhì)減少則不利于咽鼓管的開放和分泌物的排出。Rapport等(1975年)在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)用生理鹽水沖洗豚鼠中耳腔后其咽鼓管開放需要更大的壓力，從而提出咽鼓管的這些物質(zhì)對咽鼓管開放壓力的改變有重要作用。Fornadley等(1994年)建立沙鼠分泌性中耳炎模型，發(fā)現(xiàn)其咽鼓管開放壓增高，外源性表面活性物質(zhì)注入后，其咽鼓管開放壓明顯降低，提出分泌性中耳炎與表面活性物質(zhì)減少有關(guān)。Nemechech(1997年)和 Chandrekhar[4]通過精確控制劑量的方法進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)表面活性物質(zhì)可以有效降低實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的咽鼓管開放壓。Venkatayan[6,7]、肖玉麗[8]、黃平[9]、廖志蘇[10]等證實(shí)表面活性物質(zhì)對動(dòng)物的分泌性中耳炎有療效，從而為表面活性物質(zhì)的臨床應(yīng)用提供了初步依據(jù)。有學(xué)者分別在動(dòng)物和臨床中應(yīng)用氨溴索(促表面活性物質(zhì))治療分泌性中耳炎取得了明顯療效[11,12]。

本研究以飽和磷脂酰膽堿和總蛋白含量作為表面活性物質(zhì)的檢測指標(biāo)，結(jié)果顯示分泌性中耳炎組患兒咽鼓管及鼻咽部灌洗液中表面活性物質(zhì)含量較非分泌性中耳炎組患兒明顯減少，從而導(dǎo)致前者咽鼓管的開放壓升高，不利于中耳通氣和引流，說明表面活性物質(zhì)參與了分泌性中耳炎的發(fā)病，推測表面活性物質(zhì)減少可能是導(dǎo)致分泌性中耳炎患兒病情反復(fù)或者遷延不愈的重要原因之一。應(yīng)用表面活性物質(zhì)或者促表面活性物質(zhì)的藥物可作為分泌性中耳炎的治療手段之一。

參考文獻(xiàn)4

1Zhu ZH, Shan YJ, Han Y, et al. Pathological study of otitis media with effusion after treatment with intranasal pulmonary surfactant[J]. Laryngoscope,2013,123:3148.

2Jang CH, Cho YB, Oh SE, et al. Effect of nebulized bovine surfactant for experimental otitis media with effusion[J]. Clin Exp Otorhinolaryngol,2010,3:13.

3Ma Z, Dai C, Yang S, et al.Protective effect of pulmonary surfactant on cilia of Eustachian tube in otitis media with effusion[J]. Int J Pediatr Otorhinolaryngol,2007,71:1889.

4Chandrasekhar SS, Connelly PE, Venkatayan N, et al. Intranasal metered dose aerosolized surfactant reduces passive opening pressure of the eustachian tube: comparison study in two animal models[J]. Otology and Neurotology,2002,23:3.

5李希平,戴海江,牟文清.分泌性中耳炎的治療現(xiàn)狀與思考[J]．中國耳鼻咽喉頭頸外科,2007,14：467.

6Venkatayan N, Connelly PE,Mautone AJ,et al.Dosage regimens of intranasal aerosolized surfactant on otitis media with effusion in an animal model[J]. Otolaryngol Head Neck Surg,2001,124:388.

7Venkatayan N, Troublefield YL, Connelly PE, et al. Intranasal surfactant aerosol therapy for otitis media with effusion[J]. Laryngoscope,2000, 110:1857.

8肖玉麗,魯建光,侯昭暉,等. 表面活性物質(zhì)在分泌性中耳炎動(dòng)物模型的應(yīng)用研究[J]. 中華耳鼻咽喉科雜志,2004,39:371.

9黃平,馬兆鑫,陳旭輝,等. 肺表面活性物質(zhì)對豚鼠分泌性中耳炎的治療作用[J]. 臨床耳鼻咽喉科雜志,2005, 19:605.

10廖志蘇,杜瀚,吳秀玲,等.肺表面活性物質(zhì)治療豚鼠分泌性中耳炎的療效觀察[J]. 中國耳鼻咽喉顱底外科雜志,2006,12：426.

11王錦云,羅鴻,吳國會(huì),等.鹽酸氨溴素治療分泌性中耳炎療效觀察[J].聽力學(xué)及言語疾病雜志,2004,12:59.

12侯玉凡,李澤民,郭穎，等.氨溴索治療豚鼠分泌性中耳炎實(shí)驗(yàn)觀察[J].中國耳鼻咽喉頭頸外科,2010,17:18.

(2015-03-06收稿)

(本文編輯周濤)

·研究報(bào)告·

基金項(xiàng)目*連云港市第一人民醫(yī)院青年英才豪森(QN110103)資助

【中圖分類號(hào)】R764.21

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1006-7299(2016)01-0093-02

DOI：：10.3969/j.issn.1006-7299.2016.01.024