李良芳，劉婉薇，鄭　躍，陳　浩

Effect observation on application of special cleaning agent

of MatrixTM biological membrane in endoscopic cleaning

Li Liangfang,Liu Wanwei,Zheng Yue,et al

(People’s Hospital of Guangdong Province,Guangdong 510120 China)

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MatrixTM生物膜專用清洗劑用于內(nèi)鏡清洗的效果觀察

李良芳，劉婉薇，鄭躍，陳浩

Effect observation on application of special cleaning agent

of MatrixTM biological membrane in endoscopic cleaning

Li Liangfang,Liu Wanwei,Zheng Yue,et al

(People’s Hospital of Guangdong Province,Guangdong 510120 China)

摘要：[目的]評價MatrixTM生物膜專用清洗劑在內(nèi)鏡消毒中的應(yīng)用效果。[方法]選取使用后的內(nèi)鏡60條次，采用ATP生物熒光技術(shù)檢測MatrixTM生物膜專用清洗劑和ENZYCARE2多酶清洗劑清洗后內(nèi)鏡活檢孔ATP含量；并建立人工模擬內(nèi)鏡管腔生物膜模型，采用細(xì)菌培養(yǎng)法和蛋白定量法評價兩種內(nèi)鏡清洗劑去生物膜清除率。[結(jié)果]兩種內(nèi)鏡清洗劑清洗后，內(nèi)鏡相對光單位(RLU值)均顯著減少，其中應(yīng)用MatrixTM生物膜專用清洗劑清洗效果更佳，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；生物膜清除實(shí)驗(yàn)經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)法和蛋白定量法檢測結(jié)果顯示，MatrixTM組對生物膜清除率分別為99.9%和94.8%，而ENZYCARE2組分別為52.4%和42.6%，兩組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。[結(jié)論]與常規(guī)的多酶清洗劑相比，MatrixTM生物膜特效清洗劑能有效祛除內(nèi)鏡腔內(nèi)生物膜，明顯提高內(nèi)鏡清洗、消毒質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：MatrixTM生物膜專用清洗劑；多酶清洗劑；生物膜；清洗效果

醫(yī)療器械清洗和消毒不徹底造成的院內(nèi)感染已成為當(dāng)前一個重要的臨床問題。消化道內(nèi)鏡作為一種侵入性診療設(shè)備，易沾染血液等污染物，同時由于其結(jié)構(gòu)復(fù)雜、材質(zhì)特殊，清洗消毒尤為困難[1]。內(nèi)鏡相關(guān)感染已有較多報道[2-3]，其中存在于內(nèi)鏡管腔的生物膜是造成這一現(xiàn)象的重要原因[4-5]。國際上近年來已出現(xiàn)非含酶的生物膜專用清洗劑對內(nèi)鏡生物膜清除效果較好的相關(guān)報道[6-8]。本研究通過臨床內(nèi)鏡標(biāo)本和人工模擬內(nèi)鏡管腔生物膜模型相結(jié)合的方式，通過多種方法對MatrixTM生物膜專用清洗劑和常規(guī)多酶清洗劑對內(nèi)鏡生物膜清除效果進(jìn)行對比研究?，F(xiàn)將結(jié)果報告如下。

1材料和方法

1.1材料ATP熒光檢測儀BT-112D(北京創(chuàng)新世紀(jì)生化科技發(fā)展公司)，清潔劑(明泰科MatrixTM生物膜專用清洗劑和STERIS公司生產(chǎn)的ENZYCARE2全效多酶清洗劑)，LB肉湯培養(yǎng)基及瓊脂，BCA蛋白試劑盒(Promega公司)，0.3%結(jié)晶紫，酶標(biāo)儀(Bio-Red公司)，循環(huán)式灌流器，超聲波振動器(Olympus公司)。

1.2分組

1.2.1臨床內(nèi)鏡檢測分組MatrixTM組：使用生物膜專用清洗劑MatrixTM完成清洗步驟ENZYCARE2組：使用ENZYCARE2多酶清洗劑完成清洗步驟。

1.2.2人工模擬內(nèi)鏡生物膜模型分組對照組：內(nèi)鏡管腔生物膜模擬物2 cm×20段，處理方式為0.1 mol/L的PBS浸泡15 min；MatrixTM組:內(nèi)鏡管腔生物膜模擬物2 cm×20段，處理方式為MatrixTM生物膜專用清洗劑按照1∶20比例配制后浸泡15 min；ENZYCARE2組:內(nèi)鏡管腔生物膜模擬物2 cm×20段，處理方式為全效多酶清洗劑按照1∶270比例配制后浸泡15 min。

1.3清洗及檢測方法

1.3.1臨床內(nèi)鏡清洗及檢測方法

1.3.1.1清洗方法嚴(yán)格按照2004年衛(wèi)生部《內(nèi)鏡清洗消毒技術(shù)操作規(guī)范》的要求，按初洗、酶洗、漂洗程序清洗使用后的內(nèi)鏡。內(nèi)鏡使用后，立即用濕紗布擦拭鏡身，反復(fù)送氣送水10 s。取下內(nèi)鏡裝好防水蓋，送至清洗消毒間。

1.3.1.2采樣與ATP生物熒光檢測連續(xù)6 d分別使用MatrixTM生物膜專用清洗劑(第1天、第3天、第5天清洗)和ENZYCARE2全效多酶清洗劑(第2天、第4天、第6天清洗)清洗內(nèi)鏡，清洗前后采樣，采樣時記錄內(nèi)鏡編號，兩組均為30條次。用無菌注射器抽取15 mL無菌生理鹽水從內(nèi)鏡活檢孔注入，在出口處采集后快速擠入裂解液和熒光素酶，應(yīng)用ATP熒光檢測儀測定相對光單位值(relative light unit，RLU)。

1.3.2人工模擬內(nèi)鏡生物膜模型的建立和檢測方法

1.3.2.1人工模擬內(nèi)鏡生物膜模型的建立將少量大腸埃希菌菌株接種到營養(yǎng)瓊脂斜面，于37 ℃培養(yǎng)24 h，用無菌營養(yǎng)肉湯洗菌，并用其配制成106cfu/mL的菌懸液，取菌懸液2 mL加入到裝有200 mL營養(yǎng)肉湯的三角燒瓶中，使其菌液濃度調(diào)整為100 cfu/mL備用。用帶有通氣孔(過濾層0.22 mm)的塞子將燒瓶塞住，將另一根軟管通過通氣孔置于營養(yǎng)肉湯液面上，通過蠕動泵和聚四氟乙烯管相連接組成管道系統(tǒng)。在37 ℃的條件下用蠕動泵以10 mL/min的流量循環(huán)流動，每天4 h，連續(xù)培養(yǎng)5 d后用無菌生理鹽水以10 mL/min的流速沖洗管腔。培養(yǎng)后的聚四氟乙烯管每10 cm截取1 cm的小段，作為生物膜樣本備用。

1.3.2.2生物膜清除效果評價將樣本置于含有10 mL PBS的無菌試管中，以40 kHz的頻次超聲振蕩10 min，使生物膜從管壁材料上剝離。分別進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)法、蛋白質(zhì)定量法測定。①細(xì)菌培養(yǎng)法：吸取洗脫后的100 μL PBS，按一定的比例稀釋后接種于營養(yǎng)瓊脂平板，置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h，觀察菌落生長情況并行菌落計數(shù)。②蛋白質(zhì)定量法：吸取洗脫后的100 μL PBS與2 mL BCA反應(yīng)液混合，60 ℃加熱30 min，冷卻后測量562 nm吸光值。

2結(jié)果

2.1應(yīng)用不同清洗劑清洗內(nèi)鏡效果比較兩組內(nèi)鏡在使用清潔劑清洗后的RLU均值顯著低于清洗前，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。清洗前兩組RLU值差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。而清潔后兩組RLU值差異亦有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，其中MatrixTM組清洗效果優(yōu)于ENZYCARE 2組，詳見表1。

表1　不同清洗劑對臨床內(nèi)鏡清洗效果比較±s)

2.2不同清洗劑對內(nèi)鏡管腔生物膜的清洗效果對比通過應(yīng)用細(xì)菌計數(shù)法、蛋白質(zhì)定量法，MatrixTM組在人工模擬內(nèi)鏡生物膜模型中對生物膜清除率分別為99.9%和94.8%，而ENZYCARE2組分別為52.4%和42.6%，兩組清除率差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2　不同清洗劑對模擬內(nèi)鏡生物膜的清除效果比較±s)

3討論

3.1內(nèi)鏡生物膜清除的重要性內(nèi)鏡作為一種侵入性、微創(chuàng)性的診治工具已廣泛應(yīng)用于臨床，據(jù)統(tǒng)計，內(nèi)鏡檢查引起的感染率約為0.8%[9]，經(jīng)內(nèi)鏡檢查傳播幽門螺桿菌、人類免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒的報道已見諸多報道[2-3]。而上述感染均與內(nèi)鏡管腔細(xì)菌生物膜的存在有著密切的關(guān)系。因此，消化內(nèi)鏡的清洗質(zhì)量必須以能徹底去除細(xì)菌生物膜為目的。

3.2內(nèi)鏡生物膜的形成和危害生物膜是細(xì)菌由其分泌的含水聚合性基質(zhì)(主要是胞外多糖)黏附在物體或生物組織表面形成的結(jié)構(gòu)性細(xì)菌群落。由于內(nèi)鏡結(jié)構(gòu)復(fù)雜、材料特殊，加之活檢鉗注射針等器械的頻繁使用，容易造成內(nèi)鏡腔內(nèi)形成許多細(xì)小的劃痕和裂紋，病人的血液、體液、黏液等分泌物的污染如不能徹底地清洗干凈，容易在內(nèi)鏡腔內(nèi)尤其是劃痕和裂紋處形成柱樣或蘑菇樣的結(jié)構(gòu)即生物膜，而且在反復(fù)的“使用-處理-再使用”循環(huán)過程中逐漸累積。Hadi等[10]發(fā)現(xiàn)，即便嚴(yán)格按照感染控制原則清洗消毒內(nèi)鏡，仍然有2%內(nèi)鏡手術(shù)導(dǎo)致病人細(xì)菌感染，其最終原因就是內(nèi)鏡管腔內(nèi)壁形成生物膜。多個掃描電鏡試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)臨床使用中的內(nèi)鏡管腔生物膜生長現(xiàn)象十分普遍[11-12]。生物膜一旦在管腔器械中形成，則難以去除，并在反復(fù)使用和處理的循環(huán)過程中逐漸累積，當(dāng)生物膜累積到一定厚度，常規(guī)的消毒劑很難穿透生物膜的胞外脂多糖基質(zhì)殺死被黏液層包裹的細(xì)菌，造成清洗和消毒的失敗。

3.3生物膜清洗劑的作用機(jī)制和內(nèi)鏡消毒效果比較生物膜特效清洗劑能通過滲透分解并瓦解生物膜菌落來達(dá)到去除生物膜的效果。生物膜清洗劑的祛除分子一端為親生物膜端，另一端為親水端，親生物膜端與生物膜緊密結(jié)合，親水端與水分子緊密結(jié)合，在水流動時帶動分子運(yùn)動進(jìn)而將生物膜剝離。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，MatrixTM生物膜特效清洗劑能夠有效地去除內(nèi)鏡管腔中的生物膜內(nèi)殘留活菌，其生物膜清除能力要比常規(guī)多酶清洗劑效率要高。通過抽取臨床內(nèi)鏡標(biāo)本和人工模擬內(nèi)鏡生物膜模型相結(jié)合的方式，應(yīng)用多種檢測方法更為嚴(yán)謹(jǐn)客觀地評價生物膜清洗劑與常規(guī)多酶清洗劑內(nèi)鏡管腔對生物膜的清洗效果，與既往研究相比，更有助于為臨床內(nèi)鏡清洗消毒提供更為客觀的參考。

3.4內(nèi)鏡清洗消毒的注意事項(xiàng)本研究結(jié)果表明MatrixTM生物膜特效清洗劑是清潔內(nèi)鏡的理想選擇。此外，在常規(guī)的內(nèi)鏡消毒中，為保證內(nèi)鏡消毒效果，還應(yīng)做到：①內(nèi)鏡使用后迅速進(jìn)行預(yù)清洗，縮短細(xì)菌與內(nèi)鏡接觸的時間，減少生物膜形成的機(jī)會；②清洗劑現(xiàn)用現(xiàn)配，用后更換；③加強(qiáng)工作人員專業(yè)知識培訓(xùn)，熟練掌握操作流程，提高工作責(zé)任心，保證清洗過程中每個環(huán)節(jié)足夠的清洗時間和清洗質(zhì)量。

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(本文編輯李亞琴)

收稿日期：(2014-11-23；修回日期：2015-12-15)

通訊作者

作者簡介李良芳，主管護(hù)師，本科，單位：510120，廣東省人民醫(yī)院；劉婉薇、鄭躍、陳浩()單位：510120，廣東省人民醫(yī)院。

基金項(xiàng)目國家自然科學(xué) ，編號：81300279。

中圖分類號：R473.1

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

doi:10.3969/j.issn.1009-6493.2016.01.026

文章編號：1009-6493(2016)01A-0082-03