劉哲通

（四川省榮縣動物疫病預(yù)防控制中心，四川 榮縣 643100）

養(yǎng)禽業(yè)中禽大腸桿菌引起的疾病往往非常嚴重，臨床上多數(shù)采用抗菌藥物治療，而用抗菌藥物治療容易產(chǎn)生耐藥性，在治療過程中需要加大藥量或變換藥物品種，這樣既增加了治療成本，又使得藥物殘留的問題更加突出。因此，使用抗菌譜廣、殘留小、毒性低且對病原菌不易產(chǎn)生耐藥性的中藥來治療大腸桿菌病已是大勢所趨。本試驗經(jīng)過臨床用藥篩選出了三種中藥復(fù)方制劑，并應(yīng)用于鴨致病性大腸桿菌的體外抑菌試驗中，觀察其抑菌效果，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗藥物。加味三黃湯：黃連30g、黃芩30g、大黃 20 g、穿心蓮 30 g、苦參 20 g、夏枯草 20 g、龍膽20 g、連翹 20 g、二花 15 g、白頭翁 15 g、車前子 15 g、甘草15g；白頭苦參湯：白頭翁10g、苦參10 g、金銀花 10g、忍冬藤 5g、澤瀉 3g、車前草 3g、川黃連 2g、檳榔2g。郁金散：郁金6g、黃連10g、黃柏10g、枝子10g、赤芍 8g、大黃 5g、訶子（另包）10g、黃芩 10g。

以上三種方劑均購于榮縣泰康大藥房，經(jīng)鑒定符合藥典標(biāo)準(zhǔn)。

1.1.2 菌種。從確診了患大腸桿菌病的病死鴨組織中分離培養(yǎng)而得。

1.1.3 試劑。麥康凱瓊脂，中國藥品生物制品檢定所，批號：980301；營養(yǎng)瓊脂，上海市醫(yī)學(xué)化驗所試劑廠，批號：980905；氯化鈉，重慶東方試劑廠，批號：980320；牛肉浸膏，成都市牛奶供應(yīng)管理部，批號：7802144；蛋白胨，成都華西制品廠，批號：921203。

1.1.4 試驗器材。托盤天平，蒸汽消毒器，電熱鼓風(fēng)干燥箱，離心機，培養(yǎng)箱，無霜型冰箱，潔凈工作臺，游標(biāo)卡尺，電爐，布氏漏斗，牛津杯，試管。

1.2 試驗前準(zhǔn)備

1.2.1 藥物制備。將復(fù)方制劑置于電磁鍋中，加適量蒸餾水浸泡30min，后煎煮，沸后用文火煮30min，濾出煎液，共煎3次，合并濾液，濃縮至生藥含量為1g/mL；1000r/min離心10min，取上清液調(diào)pH值為7.5；高壓滅菌后置4℃冰箱中保存?zhèn)溆?，一周?nèi)用完。

1.2.2 肉湯培養(yǎng)基制法。牛肉膏3.0g、蛋白胨10.0g、氯化鈉5.0g、蒸餾水1 000 mL，調(diào)節(jié)pH值為7.5，煮沸10min，冷卻過濾，15磅壓力下滅菌15min備用。

1.2.3 肉湯瓊脂培養(yǎng)基制法。肉湯培養(yǎng)基100mL，瓊脂2.0g，在肉湯培養(yǎng)基高壓滅菌前，加入瓊脂煮沸，再高壓消毒。

1.2.4 菌液制備。將分離的鴨大腸桿菌菌種接種到肉湯培養(yǎng)基上，培養(yǎng)18～24h備用。

1.3 體外抑菌試驗方法

1.3.1 雙碟的制備。培養(yǎng)基底層：將滅菌肉湯瓊脂培養(yǎng)基溶化后取15mL倒入滅菌平皿內(nèi)。培養(yǎng)基菌層：將15mL菌液與100mL冷卻至45℃的肉湯瓊脂培養(yǎng)基混勻，然后分別在每一平皿內(nèi)加入10 mL，均勻攤在具有底層培養(yǎng)基的平皿內(nèi)。

1.3.2 待培養(yǎng)基凝固后，在每碟中均勻立放4個牛津杯，用陶瓦蓋覆蓋。

圖1 體外抑菌測定（管碟法）

1.3.3 用移液器分別取200μL中藥藥液于4個牛津杯中（如圖1所示），置 37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。然后用游標(biāo)卡尺測量抑菌環(huán)直徑，判斷抗菌藥物抑菌作用的強弱。為了使試驗結(jié)果一目了然，結(jié)果判定參照《中藥制用經(jīng)驗錄》[1]中收載的“中草藥的抑菌作用實驗”一文提供的方法，即將所測得的抑菌環(huán)直徑毫米數(shù)變成用“-、+、++、+++”號表示。抑菌環(huán)直徑在8.0 mm或以下，記“-”號，為不敏感；抑菌環(huán)直徑在8.0～13.0 mm，記“+”號，為低度敏感；抑菌環(huán)直徑在13.1～19.0mm，記“++”號，為中度敏感；抑菌環(huán)直徑在19.1～25.0mm，記“+++”號，為高度敏感。

2 試驗結(jié)果與分析

2.1 試驗結(jié)果 加味三黃湯的抑菌圈平均直徑為20.3mm，抑菌效果為高度敏感；白頭苦參湯的抑菌圈平均直徑為16.8 mm，抑菌效果為中度敏感；郁金散的抑菌圈平均直徑為14.5 mm，抑菌效果為中度敏感。詳細情況見表1。

表1 3種中藥復(fù)方制劑對鴨大腸桿菌的抑菌強度

2.2 分析 從表1可以看出，3種中藥復(fù)方制劑對鴨大腸桿菌均有明顯的抑制作用，其中以加味三黃湯的抑菌效果最佳。

3 結(jié)論

本試驗發(fā)現(xiàn)，加味三黃湯對鴨大腸桿菌的抑菌強度高，白頭苦參湯的抑菌強度中等，郁金散的抑菌強度也是中等，可見這3種中藥復(fù)方制劑都對鴨大腸桿菌有明顯的抑制作用。

[1]鄧來送.中藥制用經(jīng)驗錄[M].北京:中國中醫(yī)藥出版社，2012.