李 娟，黃仁樹

（四川省什邡市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 什邡618400）

目前獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室診斷主要分病毒學(xué)診斷、血清學(xué)診斷、細(xì)菌學(xué)診斷三類。細(xì)菌學(xué)與病毒學(xué)診斷在基層實(shí)驗(yàn)室開展得不多，應(yīng)用最普遍的是血清學(xué)診斷。

1 血樣采集、保存和運(yùn)送

1.1 血液采集 血清學(xué)診斷的樣品主要是血清。家禽采用翅下靜脈采血，小豬采用臥式采血，中豬和大豬采用立式采血，奶牛采用尾靜脈采血是造成應(yīng)激最小、最方便的采血方法。血清學(xué)診斷中應(yīng)注意在畜禽抗體高峰期進(jìn)行血樣采集。

血樣采集應(yīng)嚴(yán)格按照無(wú)菌要求操作，針頭、容器、采血部位均應(yīng)消毒。采血人員應(yīng)熟練掌握采血技術(shù)，并選用合適的注射器及針頭進(jìn)行采血。采血前應(yīng)做好保定工作，并選準(zhǔn)進(jìn)針部位，豬的前腔靜脈越往頭部越淺、越細(xì)，越靠胸部越粗、越深。采血過(guò)程中應(yīng)掌握好進(jìn)針角度和深度，對(duì)家禽進(jìn)行采血時(shí)針尖應(yīng)順著血管向前推進(jìn)，若推偏則會(huì)引起血腫。

1.2 血清制取 血清制取方法：自然析出法，采血后將注射器活塞向后拉1～2cm，留出血清析出的空隙，并將血液呈30°左右夾角靜置，讓血清自然析出，通常溫度高血清析出快，夏季一般靜置1h血清即可析出；離心法，即將注射器內(nèi)的血液沿容器壁徐徐注入（不能用力推，也不能震蕩，否則易發(fā)生溶血），待容器內(nèi)的血液凝固后，用離心機(jī)離心，離心的血液上層即是血清。采用離心法需凝血后再離心，否則離心出的是血漿。

1.3 血樣保存和運(yùn)送 血清制備后應(yīng)置于4℃條件下冷藏，并在24h內(nèi)送檢，如24h內(nèi)不能送檢，則應(yīng)將血清置于-20℃條件凍存，注意不可反復(fù)凍融。

血樣運(yùn)輸過(guò)程中，避免容器破損，樣品裝入冷藏箱前應(yīng)鋪設(shè)襯墊。

需注意的是所有盛裝送檢樣品的容器應(yīng)貼上防脫標(biāo)簽，同時(shí)應(yīng)填寫采樣單，標(biāo)明采樣時(shí)間、采樣地點(diǎn)、編號(hào)和樣品名稱、畜禽品種、免疫情況等。

2 血清學(xué)診斷

2.1 試劑和器具 進(jìn)行血清學(xué)診斷的試劑應(yīng)有批文批號(hào)，使用時(shí)應(yīng)注意試劑的有效期，診斷試劑的有效期通常比較短，有的有效期只有3個(gè)月，化學(xué)試劑主要選擇分析純。

另外，移液器量程的準(zhǔn)確性直接影響著實(shí)驗(yàn)結(jié)果，選用適當(dāng)容量區(qū)間的移液器誤差會(huì)更小，如ELISA實(shí)驗(yàn)中，樣品的稀釋倍數(shù)都較大，樣品加樣量很小，故移液器應(yīng)選用與之較為接近的量程。在血清學(xué)檢測(cè)中經(jīng)常會(huì)用到96孔血凝板，通常豬瘟的間接血凝試驗(yàn)選用110°V型板，而禽流感和新城疫的血凝試驗(yàn)選用90°V型板，因?yàn)樵谕葧r(shí)間內(nèi)不同型號(hào)板的血沉降效果不同。

2.2 實(shí)驗(yàn)室儀器校正 在血清學(xué)診斷中，常用的儀器有電子天平、水浴鍋、酶標(biāo)儀、純水器、滅菌鍋、移液器和恒溫箱。

電子天平在第一次使用、長(zhǎng)時(shí)間未使用、移動(dòng)位置及氣溫變化時(shí)都要進(jìn)行校準(zhǔn)，才能保證試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。對(duì)水浴鍋應(yīng)經(jīng)常檢查水浴箱溫度計(jì)所示的溫度和實(shí)測(cè)溫度是否一致，一般允許有±1℃的誤差。對(duì)酶標(biāo)儀應(yīng)經(jīng)常維護(hù)光學(xué)部分，防止濾光片霉變，并定期檢測(cè)校正。純水器應(yīng)注意器濾芯、反滲透膜和純化柱子是否超出使用壽命，如果失效應(yīng)立即更換，否則會(huì)影響純水的質(zhì)量。滅菌鍋的安全閥、溫度表、壓力表要定期校驗(yàn)，以確保設(shè)備正常。移液器可用分析天平輔助校正取液量。恒溫箱的電動(dòng)軸承每半年應(yīng)加油一次，并經(jīng)常檢查恒溫箱所示的溫度和實(shí)測(cè)溫度是否一致。

2.3 實(shí)驗(yàn)室操作 實(shí)驗(yàn)室操作的規(guī)范性直接影響著實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

在血清學(xué)診斷中，一是所用的器皿應(yīng)洗凈，配好的溶液都需進(jìn)行滅菌處理，并注明溶液名稱和配制日期，配好的溶液應(yīng)置于低溫條件下保存或冷凍保存。二是所用的電子儀器在用前10min應(yīng)打開預(yù)熱，以達(dá)最佳工作狀態(tài)。三是使用移液器時(shí)，為獲得較高的精度，吸頭應(yīng)預(yù)先吸取一次樣品溶液，然后再正式移液，吸液時(shí)應(yīng)保證槍頭無(wú)氣泡，每次實(shí)驗(yàn)后應(yīng)將移液器刻度調(diào)至最大，讓彈簧復(fù)原，以延長(zhǎng)移液槍的使用壽命。四是所用溶液和試劑應(yīng)取多少用多少，未用完的溶液或試劑不能倒回瓶中。五是控制好實(shí)驗(yàn)室溫度，通常實(shí)驗(yàn)室溫度控制在20～25℃，特定的實(shí)驗(yàn)要控制到相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)室溫度。

2.4 生物安全措施 基層獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室一般不從事高致病性病原微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，但進(jìn)行人畜共患病等檢測(cè)（如布魯氏菌病血清學(xué)檢測(cè)）仍對(duì)實(shí)驗(yàn)室工作人員有潛在威脅。實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)提高防護(hù)意識(shí)，了解生物安全措施對(duì)自身和環(huán)境安全的重要性。

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期或不定期地用紫外燈或消毒劑消毒。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)對(duì)實(shí)驗(yàn)室、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面進(jìn)行消毒，廢棄物應(yīng)消毒后做統(tǒng)一處理。個(gè)人應(yīng)戴好手套、口罩，穿好鞋套和實(shí)驗(yàn)服，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后應(yīng)洗凈雙手。

3 實(shí)驗(yàn)室記錄

采樣記錄一式兩份，一份隨樣品送實(shí)驗(yàn)室，一份采樣單位備案。

通常采樣記錄應(yīng)包括：畜主姓名、畜主電話、畜禽場(chǎng)地址，動(dòng)物種類、數(shù)量、日齡和免疫情況。采樣記錄單一定要填寫詳實(shí)，它對(duì)分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果有重要作用。

血清學(xué)診斷實(shí)驗(yàn)也應(yīng)做好原始記錄，記錄包括：檢測(cè)時(shí)間、樣品名稱、檢測(cè)項(xiàng)目、實(shí)驗(yàn)方法、實(shí)驗(yàn)設(shè)備、環(huán)境溫度和濕度、檢查結(jié)果、檢查人員等。