賈變桃鄒亞飛董豐收張禮生何偉志*（山西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，太谷 03080；中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所，北京 0093）

幾種殺菌劑對意大利蜜蜂的安全性評價

賈變桃1鄒亞飛2董豐收2張禮生2何偉志2*
（1山西農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，太谷 030801；2中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護研究所，北京 100193）

為評價幾種殺菌劑對意大利蜜蜂的急性毒性和安全性，測定了11種殺菌劑對蜜蜂的急性接觸毒性和15種殺菌劑對蜜蜂急性經(jīng)口毒性，結(jié)果表明：11種殺菌劑對蜜蜂的接觸毒性，氟硅唑為高毒，丙環(huán)唑和咪鮮胺為中毒，丙森鋅、苯醚1甲環(huán)唑、石硫合劑、甲基硫菌靈、烯酰嗎啉、氟菌唑、武夷菌素和三環(huán)唑為低毒；15種殺菌劑對蜜蜂的經(jīng)口毒性，丙環(huán)唑和抑霉唑為中毒，咪鮮胺、丙森鋅、苯醚甲環(huán)唑、石硫合劑、甲基硫菌靈、烯酰嗎啉、氟菌唑、三環(huán)唑、春雷霉素、代森錳鋅、腐霉利、嘧霉胺和烯唑醇為低毒。因此，應(yīng)禁止在蜜蜂活動區(qū)域使用高毒殺菌劑氟硅唑，慎重選擇中等毒性殺菌劑丙環(huán)唑、咪鮮胺和抑霉唑，盡量選擇對蜜蜂低毒殺菌劑，以保護蜜蜂的安全。

殺菌劑；意大利蜜蜂；安全性評價

蜜蜂作為一種傳粉昆蟲，對農(nóng)業(yè)增產(chǎn)增收具有重要作用，同時還可提供大量蜂蜜、蜂蠟、蜂膠等產(chǎn)品[1]。農(nóng)藥在防治病蟲草等有害生物的過程中，也會對非靶標(biāo)有益生物如蜜蜂產(chǎn)生不良影響。自2006年冬以來，歐美等國相繼出現(xiàn)蜂群大量減少的現(xiàn)象，科學(xué)家們稱之為蜂群崩潰失調(diào)?。╟olony collapse disorder，簡稱CCD）[2-3]。引起蜂群衰退的因素有很多，其中農(nóng)藥的大量使用被認(rèn)為是一個重要誘因[4]。據(jù)報道，許多殺蟲劑對蜜蜂表現(xiàn)為高毒[5,6]，而殺菌劑和除草劑的毒性相對較低，但個別殺菌劑對蜜蜂也有較高毒性[6]。為了解不同種類殺菌劑對蜜蜂的毒性及安全性，我們測定了幾種殺菌劑對蜜蜂的急性接觸毒性和經(jīng)口毒性，試驗方法依據(jù)國家《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則-蜜蜂急性毒性試驗》的要求進行，為保護蜜蜂和安全用藥提供重要參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 供試蜜蜂及來源

意大利成年工蜂（Apis melliifera L）；來源于：北京密云東菜園養(yǎng)蜂場。

1.1.2 供試藥劑

供試藥劑及生產(chǎn)廠家見表1。裝入10 mL小燒杯中，杯內(nèi)浸漬0.4 g脫脂棉，杯口向下倒置于試驗籠紗網(wǎng)上，通過網(wǎng)眼供蜜蜂攝食。試驗條件同上。48 h后觀察受試蜜蜂有無中毒癥狀及死亡數(shù)，記錄死亡蜂數(shù)，用DPS軟件計算LC50值及95%置信限。

1.2.3 農(nóng)藥對蜜蜂毒性分級標(biāo)準(zhǔn)

依據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全

表1 供試藥劑

1.2 試驗方法

1.2.1 蜜蜂急性接觸試驗方法

將貯蜂籠內(nèi)的蜜蜂引入500 mL三角瓶內(nèi)，用紗布封口，通入N2氣體將蜜蜂麻醉，麻醉后將蜜蜂置于濾紙上，將配置好的系列濃度藥液用EDP3電動移液器分別點滴于蜜蜂前胸背板處，點滴量為1 μL/蜂，待蜂身晾干后轉(zhuǎn)入試驗籠中，用脫脂棉浸泡適量蔗糖水供蜜蜂取食。試驗在溫度23～27℃，相對濕度50～70%，微光條件下進行。觀察48 h受試蜜蜂有無中毒癥狀及死亡現(xiàn)象，記錄死亡數(shù)，用DPS軟件計算LD50值及95%置信限。

1.2.2 蜜蜂急性（經(jīng)口）毒性試驗

根據(jù)預(yù)試驗結(jié)果，設(shè)置系列濃度，并設(shè)空白對照組，每處理10只蜜蜂，對照組及每一濃度組均設(shè)3個重復(fù)。將貯蜂籠內(nèi)的蜜蜂引入試驗籠中，每個籠中10只試驗用蜂。不同濃度藥液與50%蔗糖水以1:1混勻，評價試驗準(zhǔn)則》，按毒性測定結(jié)果，將農(nóng)藥對蜜蜂毒性等級劃分標(biāo)準(zhǔn)分為4個等級（見表2）。

表2 農(nóng)藥對蜜蜂的毒性等級劃分

2 結(jié)果與分析

2.1 供試殺菌劑對蜜蜂的接觸毒性

由表3可以看出，11種殺菌劑中，氟硅唑?qū)γ鄯涞慕佑|毒性最高，其LD50值為1.55μg/只，根據(jù)毒性分級標(biāo)準(zhǔn)為高毒；其次為丙環(huán)唑和咪鮮胺，LD50值分別為3.80和8.80 μg/只，為中等毒性；丙森鋅和苯醚甲環(huán)唑LD50值分別為25.64和27.36 μg/只，為低毒，其余殺菌劑石硫合劑、甲基硫菌靈、烯酰嗎啉、氟菌唑、武夷菌素和三環(huán)唑，它們的LD50值均大于100μg/只，為低毒。

2.2 供試殺菌劑對蜜蜂的經(jīng)口毒性

測定了15種殺菌劑對意大利蜜蜂的經(jīng)口毒性，結(jié)果表明：丙環(huán)唑和抑霉唑?qū)γ鄯涞慕?jīng)口毒性最高，LC50分別為64.16和91.44 mg/L，根據(jù)農(nóng)藥的蜜蜂的毒性劃分標(biāo)準(zhǔn)，毒性為中毒；其余13種殺菌劑的經(jīng)口LC50均大于200 mg/L，毒性為低毒（表4）。

表3 11種殺菌劑對蜜蜂急性接觸毒性（48 h）

表4 15種殺菌劑對蜜蜂急性經(jīng)口毒性(48 h)

3 結(jié)論與討論

接觸法是模擬田間施藥時藥液與蜜蜂接觸或蜜蜂采蜜時觸及受農(nóng)藥污染的植株的情況，攝入法則表示農(nóng)田噴藥后，蜜蜂覓食受污染花粉的情況，因此，其結(jié)果可以作為該農(nóng)藥對蜜蜂安全評價的依據(jù)[7]。

本研究測定的對蜜蜂中到高毒的殺菌劑中，氟硅唑和丙環(huán)唑為三唑類脫甲基抑制劑，咪鮮胺和抑霉唑為咪唑類脫甲基抑制劑，均屬于甾醇生物合成抑制劑。這一類殺菌劑主要抑制麥角甾醇生物合成，破壞真菌細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)和功能，干擾細(xì)胞正常的新陳代謝，導(dǎo)致菌體生長停滯，繁殖率下降，甚至細(xì)胞死亡[8]。祝小祥等[9]研究認(rèn)為一些三唑類殺菌劑對赤眼蜂具有急性毒性潛力，在防治植物病害時應(yīng)謹(jǐn)慎使用。遲艷艷等[10]報道氟硅唑、烯唑醇2種殺菌劑對家蠶2齡幼蟲為中等毒性，具有高風(fēng)險性；氟環(huán)唑、戊菌唑、丙環(huán)唑、己唑醇、苯醚甲環(huán)唑和戊唑醇6種殺菌劑對家蠶2齡幼蟲為低毒，具有中等風(fēng)險性。可見這一類殺菌劑對非靶標(biāo)有益昆蟲具有一定的毒性風(fēng)險，應(yīng)謹(jǐn)慎使用。

本試驗結(jié)果表明，11種殺菌劑對蜜蜂的接觸毒性，氟硅唑為高毒，丙環(huán)唑和咪鮮胺為中毒，其余藥劑為低毒；15種殺菌劑對蜜蜂的經(jīng)口毒性，丙環(huán)唑和抑霉唑為中毒，其余藥劑為低毒。因此，應(yīng)嚴(yán)格禁止高毒殺菌劑氟硅唑在蜜蜂活動區(qū)域使用，慎重選擇中等毒性殺菌劑丙環(huán)唑、咪鮮胺和抑霉唑，盡量選擇對蜜蜂低毒殺菌劑，以保護蜜蜂的安全。

[1]王成菊,邱立紅,鄭明奇,等.阿維菌素及其混配制劑對蜜蜂的安全性評價[J].農(nóng)業(yè)環(huán)境科學(xué)學(xué)報，2006,25(1):229-231.

[2]Chauzat MP,Faucon J P,Martel A C,et al.A Survey of pesticide residues in pollen loads collected byhoneybees in France[J].Journal ofEconomic Entomology,2006,99(2):253-262.

[3]Underwood R M,Vanengelsdorp D.Colony collapse disorder:have we seen this before?[J].Bee Culture,2007,135(7):13-15.

[4]鄭志陽,梁勤.蜂群崩潰失調(diào)病(CCD)的病因分析[J].中國蜂業(yè), 2009,60(6):6-8.

[5]蒼濤，蒼濤，王彥華，等.蜜源植物常用農(nóng)藥對蜜蜂急性毒性及風(fēng)險評價[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報,2012,24(5):853-859.

[6]趙帥，袁善奎，才冰，等.300個農(nóng)藥制劑對蜜蜂的急性經(jīng)口毒性[J].農(nóng)藥，2011,50(4)：278-280.

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[8]徐漢虹.植物化學(xué)保護學(xué)（第四版）[M].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2007：149.

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Acute toxicity and safety evaluation of several fungicides to Apis mellifera L.

Jia Biantao1Zou Yafei2Dong Fengshou2Zhang Lisheng2He Weizhi2
(1 College of Agriculture,Shanxi Agricultural University,Taigu Shanxi,030801; 2 The Institute of Plant Protection（IPP）,Chinese Academy of Agricultural Sciences（CAAS）,Beijing,100193)

∶Acute toxicities and safety evaluation of several fungicides to honeybee(Apis mellifera L.)were studied by contact method and oral method.The results showed that among 11 fungicides tested,flusilazole exhibited high contact toxicity,propiconazole and prochloraz exhibited moderate contact toxicities,and propineb and difenoconazole, lime sulphur,thiophanate-methyl,dimethomorph,triflumizole,wuyimycin and tricyclazole exhibited low toxicities. Among 15 fungicides tested,propiconazole and imazalil showed moderate oral toxicities,prochloraz,propineb, difenoconazole,lime sulphur,thiophanate-methyl,dimethomorph,triflumizole,tricyclazole,kasugamycin,mancozeb, procymidone,pyrimethanil and diniconazole exhibited low oral toxicities.Therefore,in order to protect honeybee,we should prohibit flusilazole,carefully use propiconazole,prochloraz and imazalil and try to choose fungicides of low toxicities to honeybee in activity area of honeybee.

∶Fungicides;Apis mellifera;Safety evaluation

S893.3

A

農(nóng)業(yè)部2015年度財政項目“蜜蜂授粉和綠色防控增產(chǎn)技術(shù)示范”（B3798）

賈變桃（1971-），女，副教授E-mail：jiabtao@foxmail.com

*通訊作者：何偉志（1970-），男，副研究員E-mail：he3255@sina.com.