孫鈺潔 顏明

(江蘇省農(nóng)產(chǎn)品質量檢驗測試中心，江蘇 南京 210036)

我國是農(nóng)業(yè)大國，農(nóng)業(yè)又是其它所有行業(yè)的基礎。農(nóng)作物的產(chǎn)量和安全生產(chǎn)是農(nóng)業(yè)發(fā)展的重中之重。農(nóng)作物生長過程中容易遭受各種病蟲害侵襲，不可避免的需要使用農(nóng)藥。農(nóng)藥質量和農(nóng)作物生長密切相關。農(nóng)藥企業(yè)對農(nóng)藥生產(chǎn)中的質量控制是保障農(nóng)藥質量的重要環(huán)節(jié)。丙環(huán)唑作為一種內吸性的三唑類殺菌劑，對環(huán)境具有保護和治療作用。丙環(huán)唑具有殺菌譜廣泛、活性高等優(yōu)點[1]，已成為目前最廣泛使用的農(nóng)作物殺菌劑之一。咪鮮胺是一種廣譜殺菌劑，可以與大多數(shù)殺菌劑、殺蟲劑、除草劑混用，提高農(nóng)作物病蟲害防治效果[2]。長期使用單劑型農(nóng)藥，會使農(nóng)作物產(chǎn)生抗體，降低病蟲害防控效果。復配農(nóng)藥的使用可以避免這種情況的發(fā)生，還可以提高農(nóng)作物病蟲害防控效果。丙環(huán)唑和咪鮮胺復配制劑，可以提高單劑的殺菌效果。目前同時檢測丙環(huán)唑和咪鮮胺的方法比較少，已報道的有高效液相色譜法[3]，氣相色譜分析法[4]。氣相色譜法中需要內標定量，相對于高效液相色譜法操作較繁瑣。在已報道的高效液相色譜法中，采用了甲醇、乙腈和磷酸水溶液作流動相，且流速較大，所用有機溶劑較多，且對色譜柱使用壽命有一定影響，但乙腈價格昂貴[5]。本文開發(fā)了一種高效液相色譜方法，用甲醇和水作流動相，體積比為48∶52，流速1.0mL·min-1，進樣體積5μL，整個分析過程30min內完成。

1 實驗部分

1.1 試劑和溶液

甲醇：默克色譜純；水：屈臣氏超純水；丙環(huán)唑標準品：含量99.2%，淺黃色粘稠液體，上海市農(nóng)藥研究所提供；咪鮮胺標準品：含量99.1%，白色固體粉末，上海市農(nóng)藥研究所提供；36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑，江蘇省揚州市蘇靈農(nóng)藥化工有限公司提供。

1.2 儀器

Agilent1100高效液相色譜儀；二極管陣列檢測器；色譜工作站；色譜柱：Eclipse XDB-C8不銹鋼柱(150mm×4.6mm，5μm)；萬分之一天平；超聲波清洗器；微孔膜過濾器：孔徑0.45μm。

1.3 色譜操作條件

流動相：等度洗脫，甲醇和水體積比為58∶42；流動相流速為1.0mL·min-1。

柱溫：30℃；檢測波長：225nm；進樣體積：5μL；保留時間：丙環(huán)唑A約為20.77min，丙環(huán)唑B約為22.52min，咪鮮胺約為24.80min，見圖1。

圖1 36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑的高效液相色譜圖

1.4 測定步驟

1.4.1 標樣溶液的配制

用萬分之一天平準確分別稱取丙環(huán)唑標準品0.02g(精確至0.0001g)和咪鮮胺標準品0.05g(精確至0.0001g)，置于同一50mL容量瓶。稱完后容量瓶中加入30mL甲醇，放置于超聲清洗器中，超聲3min溶解完全。后靜置冷卻至室溫，再用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取1mL到進樣小瓶備用。

1.4.2 試樣溶液的配制

用萬分之一天平準確稱取36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑0.5g(精確至0.0001g)到50mL容量瓶。稱完后容量瓶中加入30mL甲醇，放置于超聲波清洗器中，超聲5min至溶解完全。后靜置冷卻至室溫，再用甲醇稀釋至刻度，搖勻，以0.45μm濾膜過濾，取1mL到進樣小瓶備用。

1.4.3 測定

在以上條件下，待儀器平穩(wěn)后，按照標樣、試樣、試樣、標樣的順序進樣，高效液相色譜分析數(shù)據(jù)。

1.4.4 計算

將重復測得的兩針樣品及樣品前后兩針標樣的峰面積分別進行平均計算，按如下公式計算丙環(huán)唑和咪鮮胺的質量分數(shù)(X)，由于丙環(huán)唑是2個峰，因此丙環(huán)唑的定量是用2個峰面積相加的和來計算。

式中，A1為標樣中丙環(huán)唑(咪鮮胺)峰面積平均值；A2為樣品中丙環(huán)唑(咪鮮胺)峰面積平均值；m1為丙環(huán)唑(或咪鮮胺)標樣的質量，g；m2為樣品的質量，g；P為標樣中丙環(huán)唑(咪鮮胺)質量分數(shù)，%。

2 結果分析

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測波長的確定

將丙環(huán)唑和咪鮮胺標樣溶液，經(jīng)過Agilent1100高效液相色譜儀的DAD檢測器進行紫外光譜掃描，得到丙環(huán)唑和咪鮮胺的紫外吸收光譜圖，掃描結果見圖2、圖3。由圖2、圖3可見，丙環(huán)唑和咪鮮胺在225nm波長下均有較好吸收，且干擾較少，故本試驗選擇225nm為檢測波長。

圖2 丙環(huán)唑紫外吸收光譜圖

圖3 咪鮮胺紫外吸收光譜圖

2.1.2 流動相的選擇

為了實現(xiàn)丙環(huán)唑和咪鮮胺的有效分離，根據(jù)丙環(huán)唑和咪鮮胺兩化合物的特點，對甲醇和水按不同比例，在色譜柱上進行選擇比較。當甲醇和水的體積比為60∶40、流動相流速為1.0mL·min-1時，丙環(huán)唑和咪鮮胺標準品可以有效分離，且基線平穩(wěn)，峰型對稱，見圖4。但在此條件下分離36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑時，丙環(huán)唑A和樣品中雜質不能完全分離，見圖5。調整流動相比例，甲醇和水體積比為58∶42、流動相流速為1.0mL·min-1時，丙環(huán)唑和咪鮮胺可以和樣品中雜質完全分離，獲得滿意結果，標準品見圖6，樣品分離圖見圖1。由此分析結果可見，在色譜條件的選擇，可根據(jù)實際樣品的分析情況，調整流動相比例，節(jié)約分析時間，減少分析成本。

圖4 甲醇∶水=60∶40(V/V)條件下丙環(huán)唑和咪鮮胺標準品高效液相色譜圖

圖5 甲醇∶水=60∶40(V/V)條件下36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑的高效液相色譜圖

圖6 甲醇∶水=58∶42(V/V)條件下丙環(huán)唑和咪鮮胺標準品高效液相色譜圖

2.2 方法線性關系的測定

用萬分之一天平稱取丙環(huán)唑標樣0.01g、0.02g、0.03g、0.06g、0.08g(精確至0.0001g)，咪鮮胺標樣0.02g、0.04g、0.06g、0.08g、0.10g(精確至0.0001g)，分別至50mL容量瓶中，加入一定量的甲醇超聲溶解，再冷卻至室溫，定容到刻度搖勻。得到丙環(huán)唑和咪鮮胺的一系列標準溶液。按上述操作條件進行測定。丙環(huán)唑在0.00022～0.00159g·mL-1、咪鮮胺在0.00040～0.00201g·mL-1有良好線性關系，分別以丙環(huán)唑和咪鮮胺的濃度為橫坐標，相應的峰面積為縱坐標做圖，得到丙環(huán)唑線性方程為y=7621173.8080x+1830.1918，R2為0.9994，見圖7；咪鮮胺線性方程為y=23183046.58x-501.221，R2為0.9992，見圖8。結果表明，該方法條件下，檢測丙環(huán)唑和咪鮮胺的線性關系結果滿意。

圖7 丙環(huán)唑標準溶液線性圖

圖8 咪鮮胺標準溶液線性圖

2.3 方法精密度測定

用萬分之一天平分別稱取同一批次36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑6個樣品，用1.4.2過程處理樣品，按2.1色譜操作條件下進行分析獲得結果，丙環(huán)唑和咪鮮胺的標準偏差分別為0.048、0.141，變異系數(shù)分別為0.47%、0.55%，見表1。數(shù)據(jù)表明，該方法條件下的精密度和重現(xiàn)性都很好。

表1 方法的精密度實驗

2.4 方法準確度測定

用萬分之一天平分別稱取已知含量的36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑(丙環(huán)唑含量10.10%、咪鮮胺含量25.66%)樣品5份，并在稱取的5份樣品中分別添加一定數(shù)量標準品。在上述操作條件下進行測定，測得丙環(huán)唑的加標回收率為98.52%～100.83%，平均加標回收率為99.56%；咪鮮胺的加標回收率為98.01%～101.20%，平均加標回收率為99.41%，見表2。數(shù)據(jù)表明，該方法條件下的回收率和準確度都很高。

表2 方法的準確度實驗

3 結論

本方法的試驗數(shù)據(jù)表明，在該操作條件下同時測定36%丙環(huán)唑·咪鮮胺懸浮劑的丙環(huán)唑和咪鮮胺，精密度高、準確度高，分離效果都很好，并且經(jīng)濟環(huán)保。該方法是產(chǎn)品日常檢驗較為理想的分析方法。本方法可以用于農(nóng)藥企業(yè)對于該類農(nóng)藥生產(chǎn)過程中的質量控制，為農(nóng)藥質量安全提供技術保障。