賀 敏，羅梅梅，王紀華，馬智宏，劉 宇，王守現(xiàn)

（1.北京農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究中心，北京 100097；2.北京市農(nóng)林科學院植物保護環(huán)境保護研究所，北京 100097；3.湖南農(nóng)業(yè)大學資源與環(huán)境學院，湖南 長沙 410128）

3種殺菌劑在北京林地食用菌中的殘留與安全性評價

賀 敏1,2，羅梅梅3，王紀華1，馬智宏1，劉 宇2，王守現(xiàn)2

（1.北京農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究中心，北京 100097；2.北京市農(nóng)林科學院植物保護環(huán)境保護研究所，北京 100097；3.湖南農(nóng)業(yè)大學資源與環(huán)境學院，湖南 長沙 410128）

在北京市林地食用菌基地采集不同品種食用菌，監(jiān)測多菌靈、噻菌靈和咪鮮胺的殘留水平。樣品用乙腈提取，N-丙基乙二胺和弱 陽離子交換吸附劑凈化，超高效反相液相 色譜分離，三重四極桿質(zhì)譜檢測，基質(zhì)匹配標準溶液的外標法定量。在添加量為0.01～1.0 mg/kg時，方法的回收率為74%～100%，相對標準偏差為2%～13.0%，咪鮮胺、噻菌靈和多菌靈3 種農(nóng)藥的最小檢出量分別為0.003、0.003、0.001 5 ng，最低檢出濃度為0.01 mg/kg。林地食用菌樣品中噻菌靈的殘留量均小于0.01 mg/kg，多菌靈的殘留量為0.01～0.42 mg/kg，咪鮮胺的殘留量為0.01～0.51 mg/kg。我國規(guī)定多菌靈、噻菌靈、咪鮮胺在食用菌中的最大殘留限量分別為1.0、5.0、2.0 mg/kg，以此為依據(jù)，北京林地食用菌中的多菌靈、噻菌靈和咪鮮胺殘留是安全的。

超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；多菌靈；噻菌靈；咪鮮胺；食用菌

多菌靈、噻菌靈和咪鮮胺是食用菌病害防治中使用最為廣泛的低毒殺菌劑，關(guān)于多菌靈、噻菌靈和咪鮮胺在食用菌中的殘留分析方法，主要有氣相色譜法[1-3]、高效液相色譜法[4-12]和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[13-22]，樣品凈化主要采用液液分配法、柱層析法、混合型陽離子交換固相萃取柱法、分散凈化法，上述報道的方法無法同時檢測分析食用菌中多菌靈、噻菌靈和咪鮮胺。GB/T 23202—2008《食品中農(nóng)藥最大允許殘留限量》[23]采用石墨化炭黑-氨基混合固相萃取柱凈化，液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用同時測定食用菌中440 種農(nóng)藥，包括多菌靈、噻菌靈和咪鮮胺，但該方法采用石墨化炭黑-氨基混 合固相萃取柱凈化成本高、耗時長。本研究探討了利用乙腈提取，N-丙基乙二胺（primary secondary amine，PSA）和弱陽離子交換吸附劑填料（weak cation exchange packing，WCX）混合分散凈化、超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry，UPLC-MS-MS）分離檢測食用菌中多菌靈、噻菌靈和咪鮮胺殘留量的可能性，建立的多殘留分析方法達到NY/T 788—2004《農(nóng)藥殘留準則》[24]的要求。利用該方法對北京林地的食用菌樣品進行了農(nóng)藥殘留監(jiān)測，旨在為林地食用菌產(chǎn)品安全及農(nóng)藥污染控制提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

食用菌采自北京郊區(qū)縣林地食用菌基地。

多菌靈（CAS號10605-21-7，純度98.9%）、噻菌靈（CAS號148-79-8，純度99.0%）和咪鮮胺（CAS號67747-09-5，純度97.6%）標準品 百靈威科技有限公司；乙腈、乙酸（色譜純） 美國Fish公司；PSA和WCX 月旭材料科技有限公司；所有提取用有機溶劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設備

Acquity-Xevo TQD超高效液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜、Filter Unit 濾膜（0.22 ?m）、Acquity UPLC BEH C18色譜柱 美國Waters公司；QL-901漩渦混合器 海門市其林貝爾儀器制造有限公司；5415D離心機 德國Eppendorf公司；2094樣品均質(zhì)機 丹麥Foss有限公司；T25勻漿機 德國IKA公司；BUCHI-215型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮儀 瑞士布琪公司；1/10萬和1/100電子天平 瑞士梅特勒-托利多集團。

1.3 方法

1.3.1 樣品采集與制備

參照NY/T 762—2004 《蔬菜農(nóng)藥殘留檢測抽樣規(guī)范》[25]和NY/T 789—2004《農(nóng)藥殘留分析樣本采樣方法》[26]，在北京市通州區(qū)永樂店鎮(zhèn)、房山區(qū)蒲洼鎮(zhèn)、昌平區(qū)南邵鎮(zhèn)和平谷區(qū)馬昌營鎮(zhèn)林地食用菌基地隨機抽取食用菌作為檢測樣本。采集食用菌整個子實體可食用部位，每個樣品至少采集12 個。抽樣時，應除去泥土、黏附物及明顯腐爛和萎蔫部分。當林地食用菌樣品已收獲，在收獲的樣品中從中心到四周五點取樣，每批樣品采集1～2 kg作為一個樣本。食用菌運回實驗室后放入均質(zhì)機中搗碎，各分取500 g左右2 份，放入樣品袋中制成A、B待測樣，A份樣品馬上測定，B份樣品作為備份樣品以備其他需要。所有樣品均置于—20 ℃冰箱中貯存，待測定。

1.3.2 樣品提取

稱取食用菌10 g置于50 mL塑料離心管中，加入5 g氯化鈉、2 g無水MgSO4、25 mL 5%的乙酸-乙腈溶液搖勻，高速勻漿30 s后，放入離心機中4 000 r/min離心1 min，留上清液待凈化。

1.3.3 樣品凈化

吸取1.3.2節(jié)制取上清液1.5 mL，轉(zhuǎn)入裝有PSA 50 mg、MCX 50 mg、MgSO450 mg的2 mL離心管中，渦旋1 min后放入離心機中14 000 r/min離心1 min，取上清液過0.22 ?m濾膜，供UPLC-MS-MS分析。

1.3.4 液相色譜及質(zhì)譜檢測

1.3.4.1 液相色譜條件

Acquity UPLC BEH C18柱（100 mm×2.1 mm，1.7 ?m），柱溫40 ℃，樣品室溫度10 ℃，進樣量3 ?L。流動相A為超純水，流動相B為乙腈，流速0.3 ?L/min。流動相梯度洗脫程序：0～2.0 min，流動相A由80%線性變化至20%；2.0～4.0 min，流動相A由20%線性變化至50；4.0～5.0 min，流動相A由50%線性變化至80%。

1.3.4.2 質(zhì)譜條件

電噴霧離子源，正離子模式；毛細管電壓3.20 kV；離子源溫度150 ℃；去溶劑溫度350 ℃；去溶劑氣和錐孔氣均為高純液氮，去溶劑氣流速為550 L/h，錐孔氣流速為40 L/h；碰撞氣為高純氬氣；采用多反應離子監(jiān)測模式，用基質(zhì)匹配標準溶液的外標法定量。母離子、子離子、錐孔電壓、碰撞電壓、保留時間見表1，多反應選擇離子色譜圖見圖1。

表1 咪鮮胺、噻菌靈和多菌靈的監(jiān)控離子對、錐孔電壓、碰撞能量和保留時間Table1 Precursor ions, product ions, cone voltage, collision energy and retention time ime

圖1 咪鮮胺（a）、噻菌靈（b）和多菌靈（c）的多反應選擇離子色譜圖（0.01 mg/L） g/LFig.1 MRM chromatograms of prochloraz, thiabendazole and carbendazim at 0.01 mg/L

1.3.5 標準曲線和添加回收率實驗

采用食用菌樣品的空白基質(zhì)配制標準曲線。分別取200 ?L多菌靈、噻菌靈和咪鮮胺母液，用乙腈定容到20 mL，配成質(zhì)量濃度為10 mg/L的混合標準溶液。用系列稀釋法配制質(zhì)量濃度為0.001、0.002、0.005、0.01、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5 mg/L的標準溶液系列，取空白食用菌樣品，按照1.3.2節(jié)和1.3.3節(jié)的方法提取凈化，過膜后的上清液取1 mL，氮吹儀上吹干，用配制的標準溶液系列定容到1 mL，搖勻后轉(zhuǎn)移到自動進樣小瓶，進UPLC-MS-MS檢測。與此同時，取空白食用菌樣品，同時添加多菌靈、噻菌靈和咪鮮胺混合標準溶液，設定0.01、0.1、1.0 mg/kg三個添加水平，每個水平設5 個重復，按照以上方法進行實驗，另設空白對照。

1.3.6 定量方法

采用外標法與標準曲線結(jié)合應用的的定量方法，即用農(nóng)藥標準品（加入一定量的基質(zhì)）配制成一系列質(zhì)量濃度的標準溶液，然后測出各自的色譜峰面積，再以農(nóng)藥量為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。在相同檢測條件下，注入待測樣本溶液后，得到峰面積，然后在標準曲線上查出相應的農(nóng)藥量，根據(jù)待測樣本溶液定容體積，樣本溶液進樣體積和稱樣質(zhì)量等因素，計算出待測樣本中農(nóng)藥殘留量，可以下式表示：

式中：R為樣本中農(nóng)藥殘留量/（mg/kg）；Q為從標準曲線上查得的相應農(nóng)藥量/ng；V終為樣本溶液最終定容體積/mL；V樣為樣本溶液進樣體積/?L；m為稱樣量/g；P為樣品稀釋倍數(shù)（濃縮前量取的提取溶液體積與實際加入的提取溶劑體積的比值）。

1.3.7 安全性評價

以我國最新頒布的NY/T 749—2012 《綠色食品：食用菌》[27]和GB 2763—2012《食品中農(nóng)藥最大允許殘留限量標準》[28]為依據(jù)，評價食用菌中殘留的多菌靈、噻菌靈和咪鮮胺的安全性。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法的線性相關(guān)性

以農(nóng)藥的質(zhì)量濃度為橫坐標，定量離子的峰面積為縱坐標制作標準曲線，結(jié)果表明在相對應的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，呈現(xiàn)出較好的線性，結(jié)果見表2。

表2 咪鮮胺、噻菌靈和多菌靈的回歸方程、相關(guān)系數(shù)和最小檢出量Table2 Regressioon equations, correlation effiicients ad LODs of 3 funiies

2.2 方法的準確度、靈敏度和精密度

香菇、平菇、雙孢菇、灰樹菇、雞腿菇、木耳、黃傘和榆黃蘑的添加方法數(shù)據(jù)見表3。結(jié)果表明：方法的回收率在74%～100%之間，相對標準偏差（relative standard deviation，RSD）為2%～13%，咪鮮胺、噻菌靈和多菌靈在食用菌中的最低檢測濃度均為0.01 mg/kg。

SDn=5）=5 Table 3 Average recovery and relative standard deviations (RSDs) of表3 咪鮮胺、噻菌靈和多菌靈的添加回收率和RSD（Table3 Average recovery and relative standard deviations (RSDs) of 3 fungicides in edible fungi (n n = 5)= 5)

2.3 3 種殺菌劑的殘留量

2012—2013年期間，在北京市通州區(qū)永樂鎮(zhèn)、房山區(qū)蒲洼鎮(zhèn)、平谷區(qū)馬昌營鎮(zhèn)、昌平區(qū)南邵鎮(zhèn)等林地食用菌基地采集香菇、平菇、雙孢菇、灰樹菇、雞腿菇、木耳、黃傘和榆黃蘑樣品，對樣品中的多菌靈、噻菌靈和咪鮮胺殘留進行了測定，檢測結(jié)果見表4。食用菌樣品中，多菌靈的殘留量為0.01～0.42 mg/kg；噻菌靈的檢出率為0，殘留量均小于0.01 mg/kg；咪鮮胺的殘留量為0.01～0.51 mg/kg。

表4 食用菌中咪鮮胺、噻菌靈和多菌靈的殘留量Table4 Residual contents of 3 fungicides in edible fungi

3 結(jié) 論

本實驗報道了北京林地食用菌中多菌靈、噻菌靈和咪鮮胺的殘留監(jiān)測結(jié)果，為林地食用菌的質(zhì)量安全提供技術(shù)支持和數(shù)據(jù)保障。采集的食用菌樣品用乙腈提取，分散吸附劑凈化，UPLC-MS-MS檢測，方法的平均回收率在74%～100%之間，滿足農(nóng)藥殘留分析的要求。NY/T 749—2012規(guī)定多菌靈、咪鮮胺在食用菌（鮮）中的最大殘留限量分別為1.0、2.0 mg/kg，GB 2763—2012規(guī)定噻菌靈在香菇（鮮）中的最大殘留限量為5.0 mg/kg。采集的香菇、平菇、雙孢菇、灰樹菇、雞腿菇、木耳、黃傘和榆黃蘑樣品中，噻菌靈的殘留量均低于0.01 mg/kg，多菌靈的殘留量均不高于0.42 mg/kg，咪鮮胺的殘留量均不高于0.51 mg/kg，根據(jù)監(jiān)測結(jié)果，北京林地食用菌中這3 種殺菌劑的殘留水平符合綠色食用菌標準。

[1] 袁宏球, 尹桂豪, 程伶俐, 等. NY/T 1456—2007 水果中咪鮮胺殘留量的測定: 氣相色譜法[S]. 北京: 中國標準出版社, 20 07.

[2] 侯志廣, 趙曉峰, 張浩, 等. 氣相色譜法測定稻米中丙環(huán)唑和咪鮮胺的殘留量[J]. 農(nóng)藥, 2013, 52(4): 273-274; 280.

[3] 翟淑華, 張愛娟, 劉偉, 等. 葡 萄與土壤中咪鮮胺及其代謝物的殘留分析[J]. 農(nóng)藥, 2012, 51(10): 748-749; 757.

[4] 饒欽雄, 宣巖芳, 白冰, 等. 超高效液相色譜法測定食用菌中咪鮮胺殘留量[J]. 上海農(nóng)業(yè)學報, 2011, 27(4): 87-89.

[5] 李勝清, 陳浩. 固相萃取-高效液相色譜法測定蘑菇中咪鮮胺的殘留量[J]. 分析科學學報, 2008, 2 4(6): 735-737.

[6] 陳練洪, 王登飛, 游俊, 等. 固相萃取-高效液相色譜法同時測定食用菌中多菌靈和噻菌靈殘留量[J]. 理化檢驗: 化學分冊, 2009, 45(8): 982-984.

[7] 張浩, 張祥輝, 逯忠斌, 等. 高效液相色譜法同時測定食用菌中的多菌靈和噻菌靈殘留量[J]. 農(nóng)藥, 2008, 47(7): 517-518.

[8] 陳瑩, 叢佩華, 聶繼云, 等. 分散固相萃取-高效液相色譜法測定水果中多菌靈和噻菌靈[J]. 果樹學報, 2008, 25(5): 769-773.

[9] 劉曉松, 童張法, 鄭玲, 等. SPE-HPL C法同時測定多種濃縮果汁中的噻菌靈和多菌靈[J]. 武漢大學學報: 理學版, 2009, 55(5): 511-516.

[10] 趙連海, 于淑新, 孫元社, 等. QuEChERS-高效液相色譜法測定果蔬中多菌靈殘留[J]. 農(nóng)業(yè)工程, 2012, 2(7): 42-44; 65.

[11] 王登飛, 陳練洪, 游俊, 等. 固相萃取-HPLC法同時測定果蔬中多菌靈和噻菌靈殘留量[J]. 農(nóng)藥, 2008, 47(6): 443-444; 447.

[12] 何強, 趙潔, 孔祥虹, 等. HPLC法同時測定蘋果及濃縮蘋果汁中吡蟲清等4 種農(nóng)藥的殘留量[J]. 分析試驗室, 2008, 27(6): 64-67.

[13] 牟仁祥, 陳銘學, 曹趙云, 等. NY/T 1680—20 09 蔬菜水果中多菌靈等4 種苯并咪唑類農(nóng)藥殘留量的測定: 高效液相色譜法[S]. 北京:中國標準出版社, 2009.

[14] 連文浩, 蘇建峰, 江濱煒. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定干香菇中多菌靈和噻菌靈殘留量研究[J]. 食品科學, 2009, 30(12): 202-204.

[15] 姚艷玲, 倪煒華, 顧益. LC-MS快速檢測橙汁中苯并咪唑類農(nóng)藥[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志, 2013, 23(1): 33-35.

[16] 劉曉松, 鄭玲, 黃文雯, 等. 濃縮果汁中甲基硫菌靈、2-氨基苯并咪唑、多菌靈、噻菌靈及5-羥基噻菌靈殘留量的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定[J]. 分析測試學報, 2013, 32(1): 84-88.

[17] 張卉, 胡梅, 王駿, 等. 液相色譜-質(zhì)譜測定蔬菜、水果中四種保鮮劑的殘留量[J]. 食品科學, 2009, 30(2): 180-184.

[18] 徐永, 壽林飛, 虞淼, 等. 超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用法測定水果中多效唑、氯吡脲和咪鮮胺的殘留[J]. 農(nóng)藥學學報, 2012, 14(1): 61-66.

[19] 程莉, 董豐收, 劉新剛, 等. QuEChERS-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜方法快速測定小麥中的咪鮮胺殘留[J]. 農(nóng)藥學學報, 2009, 11(3): 357-361.

[20] 劉慧群, 劉新剛, 董豐收, 等. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定蔬菜、水果和土壤中多菌靈的殘留研究[J]. 農(nóng)藥科學與管理, 2009, 30(4): 20-24.

[21] 趙領軍, 岳暉, 郭棟梁, 等. UPLC-MS/MS法測定蘋果中苯并咪唑類農(nóng)藥殘留[J]. 食品科學, 2009, 30(12): 209-212.

[22] 孔志強, 董豐收, 劉新剛, 等. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定柑橘及柑橘精油中4 種農(nóng)藥殘留[J]. 分析化學, 2012, 40(3): 474-477.

[23] 龐國芳, 范春林, 鄭軍紅, 等. GB/T 23202—2008 食用菌中440 種農(nóng)藥及相關(guān)化學品殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S]. 北京: 中國標準出版社, 2008.

[24] 劉光學, 喬雄梧, 陶傳江, 等. NY/T 788—2004 農(nóng)藥殘留試驗準則[S].北京: 中國標準出版社, 2004.

[25] 劉肅, 劉瀟威, 錢洪, 等. NY/T 762—2004 蔬菜農(nóng)藥殘留檢測抽樣規(guī)范[S]. 北京: 中國標準出版社, 2004.

[26] 何藝兵, 劉豐茂, 潘燦平, 等. NY/T 789—2004 農(nóng)藥殘留分析樣本采樣方法[S]. 北京: 中國標準出版社, 2004.

[27] 黎其萬, 汪慶平, 劉宏程, 等. NY/T 749—2012 綠色食品: 食用菌[S].北京: 中國標準出版社, 2012.

[28] 國家農(nóng)藥殘留標準審評委員會. GB 2763—2012 食品中農(nóng)藥最大允許殘留限量[S]. 北京: 中國標準出版社, 2012.

Residue and Safety Evaluation of Three Fungicides in Edible Fungi in Plantation Woodlands of Beijing

HE Min1,2, LUO Meimei3, WANG Jihua1, MA Zhihong1, LIU Yu2, WANG Shouxian2
(1. Beijing Research Center for Agricultural Standards and Testing, Beijing 100097, China; 2. Institute of Plant Protection and Environment Protection, Beijing Academy of Agriculture and Foresty Sciences, Beijing 100097, China; 3. College of Resources and Environmental, Hunan Agricultural University, Changsha 410128, China)

The objective of this study was to collect and analyze residue data of carbendazim, thiabendazole and prochloraz in edible fungi in Beijing plantation woodlands. Samples were extracted with acetonitrile, cleaned up by mixed PSA and MCX dispersive solid-phase extraction, separated by ultra performance liquid chromatography, detected using a triple quadrupole mass spectrometer under the multi-reaction monitoring model, and quantitatively analyzed with external standard method using matrix-match standard solution. Average recoveries in samples ranged from 74% to 100% at three spiked levels from 0.01 to 1.0 mg/kg, with relative standard deviations varying from 2% to 13.0%. Thiabendazole residues in the tested samples were below 0.01 mg/kg, carbendazim residues ranged from 0.01 to 0.42 mg/kg and prochloraz residues ranged from 0.01 to 0.51 mg/kg, which were all less than their maximum residue limits in edible fungus (5.0, 1.0 and 2.0 mg/kg, respectively). Based on these results, the three pesticides residues were safe for the edible fungi in Beijing plantation woodlands.

ultra performance liquid chromatography-triple q uadrupole mass spectrometry (UPLC-MS-MS); carbendazim; thiabendazole; prochloraz; edible fungus

TS201.3

A

1002-6630（2015）04-0213-04

10.7506/spkx1002-6630-201504042

2014-03-19

北京市農(nóng)林科學院青年科研基金項目（QNJJ201210）；國家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系北京市食用菌產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團隊項目

賀敏（1980—），女，高級工程師，博士研究生，研究方向為環(huán)境監(jiān)測與治理。E-mail：hemin800420@163.com