李中輝魏躍鋼

中藥大青葉、黃柏、龍膽草對小鼠皮膚炎癥反應的影響

李中輝1?魏躍鋼2

目的: 明確大青葉、黃柏、龍膽草對小鼠變應性接觸性皮炎組織的影響。方法: 利用1% FITC(丙酮∶DBP 1∶1)誘發(fā)的小鼠變應性接觸性皮炎動物模型，將小鼠按給藥不同分為空白對照組、生理鹽水組、地塞米松組、大青葉組、黃柏組、龍膽草組，通過測量耳厚度差和觀察耳朵組織病理改變。結(jié)果: 大青葉組、黃柏組、龍膽草組、地塞米松組小鼠耳厚度差均明顯低于生理鹽水組，且它們的耳朵皮膚的炎癥反應抑制明顯。結(jié)論: 大青葉、黃柏、龍膽草在抑制急性接觸性皮炎的炎癥反應方面具有與糖皮質(zhì)激素相似的效果。

大青葉； 黃柏； 龍膽草； 變應性接觸性皮炎

皮炎濕疹類皮膚病是皮膚科常見的超敏反應性疾病，屬于IV型變態(tài)反應。中醫(yī)治療皮炎濕疹類皮膚病積累了豐富經(jīng)驗。筆者通過對近10年臨床文獻資料關于治療急性濕疹和接觸性皮炎常見中藥的研究，(排除他人研究過的)篩選出了常用的大青葉、黃柏、龍膽草3種中藥，并進行了其對小鼠接觸性皮炎的實驗研究，觀察治療急性皮炎濕疹類皮膚病的單味中藥對小鼠IV型變態(tài)反應的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物 蘇州大學附屬第一醫(yī)院實驗動物中心提供的雌性Balb/C小鼠35只，體重18～22 g，10～12周。

1.1.2 試劑 5－異硫氰酸熒光素(FITC)為上海紫一試劑廠生產(chǎn)。丙酮∶鄰苯二甲酸二丁酯(DBP)為1∶1。地塞米松片為天津藥業(yè)集團新鄭股份有限公司生產(chǎn)。中藥均購于蘇州市天靈藥業(yè)有限公司。

1.1.3 器材 煎藥機為天津三延精密機械有限公司生產(chǎn)。光學顯微鏡為鄭州朋來儀器有限公司生產(chǎn)。分析天平為海奕宇電子科技公司生產(chǎn)。千分尺(精確度0.01 mm)。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組 30只健康Balb/C小鼠隨機分為6組，每組5只。分為空白對照組，生理鹽水組，地塞米松組，大青葉組，黃柏組，龍膽草組。

1.2.2 藥物干預 空白對照組小鼠不激發(fā)，不致敏。其它各組于實驗前1 d背部剃毛，第l d和第2 d在背部脫毛部位用1%FITC(丙酮∶DBP 1∶1)連續(xù)致敏2次涂抹，第7 d在小鼠的左耳0.5%FITC(丙酮∶DBP 1∶1)激發(fā)。第3 d開始用灌飼器分別灌飼生理鹽水、地塞米松及中藥，每次灌飼體積為每10 g體重0.2 mL，連續(xù)用藥6天(第3、4、5、6、7、8天)，激發(fā)期灌藥時間為激發(fā)前2 h及激發(fā)后6 h。小鼠的藥物劑量按每公斤體重為《中華人民共和國藥典》的臨床用量規(guī)定的20倍進行換算:大青葉0.5 g/m L、黃柏0.4 g/ m L、龍膽草0.2 g/m L、地塞米松0.2 mg/m L。

1.2.3 觀察指標 ①右耳厚度差(S1):激發(fā)前及處死前測量鼠耳中部厚度，計算激發(fā)前及處死前右耳厚度差(mm)；②處死前左右耳厚度差(S2)；③在光學顯微鏡下觀察小鼠皮膚組織病理變化。

1.2.4 統(tǒng)計學方法 所測數(shù)據(jù)以 ˉx±s表示，采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件包行方差分析。為減少誤差，所有數(shù)據(jù)的測量、計數(shù)和計算均兩個人完成。

2 結(jié)果

2.1 各組對小鼠耳厚度的影響 與生理鹽水組相比，大青葉組、黃柏組、龍膽草組、地塞米松組各組小鼠的左耳厚度差(S1)、同一小鼠左右耳厚度差(S2)明顯降低(P＜0.01)，且黃柏組亦有明顯差異(P＜0.05)，見表1。

表1 各組小鼠左耳厚度差(S1)、左右耳厚度差(S2)

2.2 各組對小鼠耳部皮膚的病理改變

2.2.1 各組對小鼠表皮的影響 ①表皮顆粒層和棘層計數(shù):以細胞的層數(shù)計數(shù)。②表皮細胞間是否水腫的標準:以參照空白組的表皮細胞排列致密為陰性(－)；表皮細胞間能見成線狀的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)為陽性(＋)；表皮細胞間的線狀的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)清楚、明亮為中陽性(＋＋)；表皮細胞間線狀的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)增粗、分離為強陽性(＋＋＋)。細胞內(nèi)是否水腫的標準是以空白組的表皮細胞內(nèi)胞核深染、清楚，胞漿均勻為(－)；表皮細胞內(nèi)能看到模糊的空泡為陽性(＋)；表皮細胞內(nèi)能見光亮的空泡，空泡的體積小于整個細胞體積的1/2且核有偏移為中(＋＋)；表皮細胞內(nèi)光亮空泡的體積大于整個細胞體積的1/2且核偏于一側(cè)細胞壁為強陽性(＋＋＋)。③結(jié)果:與生理鹽水組相比，大青葉組、黃柏組、龍膽草組、地塞米松組可使表皮棘層均變薄，細胞間及細胞內(nèi)水腫明顯減輕，見表2。

表2 各組小鼠表皮的組織病理表現(xiàn)

2.2.2 各組對小鼠真皮的影響 ①真皮是否水腫的標準:以空白組的真皮細胞排列緊密、有序為陰性(－)；真皮內(nèi)能看到海綿形成的模糊的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，細胞胞漿略淡，真皮寬度是空白組的1～1.5倍陽性(＋)；真皮內(nèi)的海綿形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)明顯，細胞胞漿淡，真皮寬度是空白組的1.5～2倍中陽性(＋＋)；真皮內(nèi)的海綿形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)間隙明亮、增粗，細胞胞漿很淡，真皮寬度是空白組的2倍以上強陽性(＋＋＋)。②毛細血管是否擴張的標準:以空白組看不到毛細血管或毛細血管較細，其內(nèi)1～2個紅細胞為陰性(－)；毛細血管直徑是空白組毛細血管的1.5倍以內(nèi)，其內(nèi)2～4個紅細胞為陽性(＋)；毛細血管直徑是空白組毛細血管的1.5～2倍，其內(nèi)4～6個紅細胞為中陽性(＋＋)；毛細血管直徑是空白組毛細血管的2倍以上，其內(nèi)紅細胞6個以上為強陽性。③根據(jù)判斷標準可以看出:大青葉組、黃柏組、龍膽草組、地塞米松組的真皮水腫明顯降低；大青葉組、龍膽草組、地塞米松組真皮內(nèi)毛細血管擴張均降低，黃柏不能降低毛細血管擴張，見表3。

表3 各組小鼠組織病理真皮的表現(xiàn)

3 討論

皮炎濕疹是皮膚科的常見炎癥性疾病。許多醫(yī)師通過動物實驗對皮炎濕疹進行研究。黃礴等1研究了單味藥白鮮皮、生地黃、荊芥、當歸、金銀花和白芷6味中藥對小鼠變應性接觸性皮炎的研究，白鮮皮、金銀花、當歸對小鼠ACD具有抑制作用，而荊芥、生地黃、白芷對小鼠ACD不具有抑制作用。林熙然等2把常見的30味中藥按養(yǎng)血涼血清熱利濕、清熱祛風利濕、涼血清熱祛風利濕和祛風利濕分成4類組成復方對小鼠實驗性皮炎的作用。

急性皮炎濕疹由于人體稟賦不耐，濕、熱、風等邪性客于肌膚，與氣血相搏而發(fā)病。其臨床表現(xiàn):皮損色紅，腫脹，其上為紅斑、丘疹甚至糜爛滲出。根據(jù)中醫(yī)辨證:色紅多有熱或血熱，腫脹多有風邪或濕邪，糜爛滲出多為濕毒，瘙癢多為風邪所致。濕、熱、風之邪是接觸性皮炎、急性皮炎及濕疹的主要致病因素。據(jù)文獻記載，3大青葉為十字花科植物菘藍的干燥葉片，性苦寒，歸心胃兩經(jīng)。具有清熱解毒，涼血消斑的功效。大青葉在治療急性皮炎濕疹中發(fā)揮其清熱解毒、涼血之功，能使紅腫消退，減少小鼠耳部腫脹和炎癥細胞浸潤。黃柏為蕓香科植物黃皮樹的干燥樹皮。味苦性寒，歸腎、膀胱、大腸經(jīng)。具有清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡的功效。黃柏的清熱燥濕之功較強，善治下焦?jié)癔?。黃柏也可外用治療皮炎濕疹。龍膽草為龍膽科植物的干燥根及根莖。味苦性寒，歸肝、膽經(jīng)。具有清熱燥濕，瀉肝膽火功效。龍膽草善治肝經(jīng)濕熱，是龍膽瀉肝湯的君藥，而很多醫(yī)家運用龍膽瀉肝湯治療皮炎濕疹都取得了很好的療效。本實驗表明，大青葉、黃柏、龍膽草可有效抑制小鼠的IV型變態(tài)反應，中藥在抑制急性接觸性皮炎的炎癥反應的某些方面可以達到和糖皮質(zhì)激素一樣的作用。如在此基礎上，對此3種中藥在化學成份上進一步研究，對開發(fā)新型抗過敏藥方面有一定意義，

1黃礴，吳鐵，樊翌明.6種中藥抑制二硝基氟苯所致小鼠接觸性皮炎的實驗研究.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，16(13): 1756－1757.

2林熙然，涂彩霞，楊春梅，等.抗IV型變態(tài)反應中藥治療濕疹的研究.中西醫(yī)結(jié)合雜志，2000，20(4):258－260.

3高學敏.中藥學.北京:中國中醫(yī)藥出版社，2007.56－60.

(收稿:2014－04－08 修回:2014－06－03)

Effects of folium isatid is，phellodend ron，gentian on skin inflammation of mousemodels

LIZhong-hui，WEIYue-gang.The 3rd People’s Hospital of Xiangcheng District in Suzhou，215134

Objective:To determine the effects of folium isatidis，phellodendron，gentian on skin inflammation ofmouse allergic contact dermatitismodels.Methods:Themodels of contact dermatitiswere induced by FITC 1%(acetone∶DBP 1∶1).The effects of different drugs，including folium isatidis，phellodendron，gentian，saline and dexamethasone onmurine ear swelling and histopathological changeswere assessed.Saline was used as control.Results:Compared with saline group，the ears swelling and inflammation was markedly suppressed in the folium isatidis group，phellodendron，gentian group and dexamethasone group(P＜0.05). Conclusion:Folium isatidis，phellodendron，gentian and dexamethasone have equivalent effect in restraining the inflammation reaction.

folium isatidis；phellodendron；gentian；allergic contact dermatitis

1南京中醫(yī)藥大學在職研究生，南京，210029?現(xiàn)工作單位:蘇州市相城區(qū)第三人民醫(yī)院皮膚科，蘇州，215134 2江蘇省中醫(yī)院皮膚科，南京，210029