郁 輝侯占英楊小秋謝小軍

（1 深圳市南山區(qū)西麗人民醫(yī)院皮膚科，廣東 深圳 518055；2 深圳市龍華新區(qū)觀瀾人民醫(yī)院皮膚科，廣東 深圳 511180）

斑禿患者血清對人頭皮毛囊體外生長的影響及自擬生發(fā)方的干預作用

郁 輝1侯占英2楊小秋1謝小軍1

（1 深圳市南山區(qū)西麗人民醫(yī)院皮膚科，廣東 深圳 518055；2 深圳市龍華新區(qū)觀瀾人民醫(yī)院皮膚科，廣東 深圳 511180）

目的 觀察斑禿患者血清對人頭皮毛囊體外生長的影響及自擬生發(fā)方的干預作用。方法 門診斑禿患者1例，服藥前空腹采血制備不含藥血清；給予20 g/kg劑量的自擬生發(fā)方口服，連續(xù)10 d，于第11天清晨空腹服藥后采血制備含藥血清。復制人頭皮游離毛囊體外培養(yǎng)模型，分為3組：空白對照組加Williams E無血清培養(yǎng)基，不含藥斑禿血清組加入體積分數(shù)為20%血清，含藥斑禿血清組加入體積分數(shù)為20%的自擬生發(fā)方含藥血清。采用倒置顯微鏡觀察毛囊大體形態(tài)變化，并測量毛囊生長長度和生長時間，計算前4 d平均生長速度和最終生長長度。結果 不含藥斑禿血清組前4 d平均生長速度、生長時間、最終生長長度均減少，與空白對照組比較，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或P＜0.01）；而含藥斑禿血清均可不同程度升高以上指標（P＜0.05或P＜0.01）。結論 自擬生發(fā)方具有促進毛囊生長、維持毛囊正常形態(tài)的作用，而斑禿血清對毛囊生長具有一定的負影響。

斑禿；自擬生發(fā)方；器官培養(yǎng)

斑禿的病因和發(fā)病機制尚未完全清楚，暫無特效的治療方法[1-2]。我們通過取健康成人正常頭皮，建立體外游離毛囊培養(yǎng)模型，觀察斑禿患者血清對毛囊生長的影響及自擬生發(fā)方的干預作用。

1　材料與方法

表1　各組毛囊生長情況的比較（）

表1　各組毛囊生長情況的比較（）

注：與空白對照組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01；與B組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別　　毛囊數(shù)　　前4 d的平均生長速度（mm/d)　　生長時間（d)　　最終生長長度（mm) A組　20　0.22±0.03　8.7±1.8　1.25±0.26 B組　9　0.16±0.02　5.4±0.5　0.71±0.12 C組　13　0.21±0.03**　6.5±0.7*　1.03±0.5**△

1.1材料：整形外科手術中獲得的枕部頭皮（年齡28歲）。毛囊培養(yǎng)基，L-谷氨酰胺2 mmol/L，Hepes 20 mmol/L、牛胰島素10 μg/mL、轉(zhuǎn)鐵蛋白10 μg/mL，氫化可的松0.4 μg/mL；青霉素、鏈霉素100 U/mL。手術顯微鏡YZ20P5；倒置顯微鏡Nikon T300帶目鏡測微尺；CO2培養(yǎng)箱HSO 301T-VBA；電熱恒溫水浴箱HH W21 600；凈化工作臺SW-CT-IF。

1.2血清的制備

1.2.1不含藥斑禿血清的制備，門診斑禿患者（初次發(fā)病，未治療，無合并其他自身免疫性疾病者）1例，清晨空腹時肘部淺靜脈采血，取血于無抗凝試管中，常溫靜置一段時間后，在離心機內(nèi)分離血清，取上清液，經(jīng)56、30 min滅活處理后，用針頭濾器濾過除菌，-20 ℃以下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2含藥斑禿血清的制備[3-4]：服用自擬生發(fā)方（配方顆粒），顆粒劑，藥材制造商：廣東省一方藥業(yè)有限公司，方藥組成：黨參10 g，生地10 g，熟地10 g，天冬10 g，麥冬10 g，黃精10 g，制首烏10 g，茯苓10 g，女貞子10 g，墨旱蓮10 g，枸杞10 g，菟絲子10 g，桑椹子10 g，甘草 6 g。每日1劑，給同一門診斑禿患者服用（20 g/kg），分兩次開水沖服，每次250 mL，連服7 d，于第8天清晨空腹服藥（服藥前應禁食12 h）后1 h采血，血清制備方法同“1.2.1”。

1.3游離毛囊的分離與培養(yǎng)[5]：參考文獻[5]的方法，分離和培養(yǎng)游離毛囊。

1.4試驗分組：試驗共分為3組，第1組為空白對照組（A組）；第2組分別為體積分數(shù)為20%的不含藥斑禿血清組（B組）；第3組分別為體積分數(shù)為20%的含藥斑禿血清組（C組）。

1.5統(tǒng)計學方法：應用統(tǒng)計軟件SPSS 10.0對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理，數(shù)據(jù)用（）表示，組間比較采用t檢驗和方差分析，P＜0.05具有統(tǒng)計學差異。

2　結 果

2.1毛囊大體形態(tài)變化：觀察顯示，各組毛囊逐日延長。A組的毛囊在培養(yǎng)的第1周形態(tài)完好，層次清晰；部分毛囊于9～10 d后毛囊停止生長，呈早期退行變化。B組的大部分毛囊形態(tài)第6天開始發(fā)生改變，毛母質(zhì)已萎縮，遠離毛乳頭，毛乳頭也變得模糊，呈現(xiàn)退行休止期樣毛囊的毛球部形態(tài)。C組的毛囊培養(yǎng)的第2天兩組的毛母質(zhì)都呈倒漏斗形，形態(tài)豐滿，色素明顯。毛乳頭清晰可見。培養(yǎng)第6天毛母質(zhì)略呈縮小的倒漏斗形，毛乳頭緊鄰于其底部，仍然表現(xiàn)為生長期樣毛球部形態(tài)，8 d后逐漸進入退行期。毛囊快速生長主要集中在前4 d，此時各組毛囊總的形態(tài)沒有明顯變化，毛囊各層結構清晰，毛球部飽滿，毛乳頭與毛母質(zhì)界線分明且呈錐形嵌入其內(nèi)。隨著培養(yǎng)時間的延長，生長速度明顯減慢（圖1）。

2.2各組毛囊的生長情況：B組前4 d平均生長速度、生長時間、最終生長長度均減少，與空白對照組比較具有顯著性差異（均P＜0.05或P＜0.01）；C組可不同程度升高以上指標（P＜0.05或P＜0.01），見表1。

3　討 論

圖1　培養(yǎng)第6天后的毛囊形態(tài)（×40）

斑禿的病因復雜，其發(fā)病機制涉及眾多的分子與細胞因子，但其作用尚未明確，Philpott[6]1990年首先建立了人頭皮游離毛囊的生長模型，我國從1996年始也逐漸建立了游離毛囊體外培養(yǎng)（小鼠觸須、人頭皮毛囊和豬耳毛囊）的方法，并就一些細胞因子、皮質(zhì)類固醇及藥物對毛囊生長的影響進行了探討[7]。有報道，在斑禿患者的外周血中可見抗甲狀腺、胃壁細胞、腎上腺細胞等多種自身抗體，并檢測到抗毛囊水平細胞成分的自身抗體[8-9]。

中醫(yī)認為本病的發(fā)生為肝、腎、氣、血功能失調(diào)，風邪入侵，致經(jīng)脈不暢，發(fā)根失養(yǎng)所致。故本病以滋補肝腎、養(yǎng)血益精、祛風生發(fā)為治療原則[10]。我們觀察了斑禿患者服用自擬生發(fā)方后的血清對健康成人正常頭皮毛囊的干預作用，盡可能真實反映藥物在患者體內(nèi)環(huán)境中產(chǎn)生的藥理效應，在一定程度上更能體現(xiàn)整體給藥的效果。方中制何首烏、黃精、菟絲子、枸杞子、黃芪等，具有益氣補血、滋養(yǎng)肝、腎作用，不僅能促進生發(fā)，還能促進毛發(fā)由白變黑。本研究結果表明自擬生發(fā)方能夠促進毛囊生長、維持毛囊正常形態(tài)，從而達到減少毛發(fā)脫落、促進毛發(fā)生長的效果，這可能是該方治療斑禿的作用機制之一，但其作用方式和靶點尚不清楚，有待于從分子生物學角度作進一步探討。

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