韓燕全，　洪 燕，　李 翔，　李鈺馨，，　汪永忠，　夏倫祝*

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥制劑三級(jí)實(shí)驗(yàn)室，安徽　合肥　230038；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽　合肥　230031）

《中國(guó)藥典》2010年版一部炮姜質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的改進(jìn)

韓燕全1，洪 燕2，李 翔1，李鈺馨1，2，汪永忠1，夏倫祝1*

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥制劑三級(jí)實(shí)驗(yàn)室，安徽合肥230038；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)，安徽合肥230031）

目的 探討《中國(guó)藥典》2010年版中炮姜薄層鑒別和成分定量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)改進(jìn)的可行性。方法 姜酮和6-姜辣素薄層鑒別以硅膠G薄層板為固定相，以石油醚-三氯甲烷-乙酸乙酯系統(tǒng)為展開(kāi)劑；姜酮和6-姜辣素HPLC測(cè)定的色譜柱為Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸，梯度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm，體積流量1.0 mL/min。結(jié)果 炮姜中姜酮和6-姜辣素的薄層鑒別斑點(diǎn)清晰，HPLC法可同時(shí)測(cè)定姜酮和6-姜辣素。與自制炮姜飲片相比，市售14份飲片中姜酮和6-姜辣素的量差異明顯。結(jié)論 建議炮姜質(zhì)量控制項(xiàng)下增加姜酮的定量測(cè)定，可控制以達(dá)不到含量限度的干姜僅輕微炮制即可滿(mǎn)足炮姜的現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

中國(guó)藥典；炮姜；姜酮；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

炮姜（Paojiang）是姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.干燥根莖經(jīng)砂燙而成的炮制品。《中國(guó)藥典》2010年版炮姜項(xiàng)下質(zhì)量控制以6-姜辣素（6-姜酚）的薄層鑒別和定量測(cè)定為指標(biāo)，定量測(cè)定限度為含6-姜辣素不得少于0.30%［1］。本課題組前期研究和文獻(xiàn)報(bào)道均表明，干姜在炮制成炮姜后6-姜辣素量會(huì)降低15%～42%左右［2］，且在炮制過(guò)程中會(huì)有新成分姜酮的產(chǎn)生［3-4］。筆者認(rèn)為此質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)存有如下問(wèn)題：只對(duì)炮制過(guò)程中會(huì)降低的6-姜辣素量作了最低限度規(guī)定，忽視了對(duì)炮制工藝規(guī)范的限定要求，如選擇質(zhì)量稍次的干姜飲片，其雖達(dá)不到干姜的含量限度要求，但輕微炮制即可滿(mǎn)足炮姜的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，如此炮制過(guò)程的重要性就被忽略了。鑒于炮姜質(zhì)量控制存在的上述問(wèn)題和課題組前期研究結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)增加了姜酮的薄層鑒別并改進(jìn)了炮姜的薄層鑒別條件；同時(shí)，建立了HPLC同時(shí)測(cè)定姜酮和6-姜辣素的測(cè)定方法，并對(duì)14份不同產(chǎn)地的市售炮姜和4份實(shí)驗(yàn)室自制樣品進(jìn)行了測(cè)定，以期能為進(jìn)一步完善《中國(guó)藥典》2010年版一部中炮姜的質(zhì)量控制方法提供參考。

1　儀器與材料

1.1儀器 超高效液相色譜儀（美國(guó)Waters Acquity H-C1ass UPLC），包括四元梯度泵自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測(cè)器以及Empower 2工作站；KQ3200DB型超聲儀（江蘇昆山超聲儀器有限公司）；HFB-200型高速中藥粉碎機(jī)（吉首市中州中藥機(jī)械廠）；炒藥設(shè)備（自制）。

1.2藥品與試劑 乙腈為色譜純；乙醇、磷酸等試劑均為分析純，屈臣氏公司蒸餾水；0.2μm微孔濾膜（上海陸納生物科技有限公司）。姜酮（批號(hào)122-485）、6-姜辣素（批號(hào)23513-146）對(duì)照品由上海鼎瑞化工提供，經(jīng)1H-NMR、13C-NMR、MS、IR和UV等光譜檢測(cè)確認(rèn)其結(jié)構(gòu)。生姜購(gòu)于合肥市蜀山區(qū)三里庵菜市場(chǎng)，經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院韓燕全博士鑒定均為姜科植物姜Zingiber officinalies Rose.的干燥根莖，晾干后得到干姜藥材；自制炮姜由課題組按照《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄ⅡD項(xiàng)下砂燙法要求，在砂溫度200℃、砂燙6 min左右炮制得到；14份市售炮姜藥材購(gòu)自全國(guó)不同地區(qū)藥店；干姜及炮姜樣品信息見(jiàn)表1。

表1　干姜及炮姜樣品來(lái)源信息Tab.1 Origin for nineteen batches of dried ginger and Paojiang

2　方法與結(jié)果

2.1姜酮和6-姜辣素薄層色譜鑒別［5-6］取樣品粉末2 g，加乙酸乙酯20 mL，超聲處理10 min，濾過(guò)，取濾液作為供試品溶液。另取姜酮對(duì)照品，加乙酸乙酯制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（附錄ⅥB）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各6μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）-三氯甲烷-乙酸乙酯（7∶3∶2）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以香草醛硫酸試液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，見(jiàn)圖1。

2.2HPLC法測(cè)定姜酮和6-姜辣素

2.2.1對(duì)照品溶液的制備 分別稱(chēng)取一定量姜酮、6-姜辣素對(duì)照品，置量瓶中，分別配制成0.711 mg/mL和0.701 mg/mL的對(duì)照品貯備液；分別取姜酮和對(duì)照品貯備液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mL和6-姜辣素1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL置于10 mL量瓶中，加乙醇定容至刻度，得5份不同質(zhì)量濃度的姜酮和6-姜辣素的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2供試品溶液的制備 分別精密稱(chēng)取各干姜、炮姜0.5 g，置10 mL量瓶中，加90%乙醇定容至刻度，超聲（150 W，40 Hz）40 min，放冷，稱(chēng)量，加乙醇補(bǔ)足失質(zhì)量，搖勻，0.2μm濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

圖1　對(duì)照品和樣品的薄層色譜圖Fig.1　TLC chrom atogram of reference substance and samp Ies

2.2.3色譜條件［7-9］Waters Symmetry C18色譜柱（4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相為乙腈（A）-0.1%磷酸（B），梯度洗脫（0～10 min，30%A；10～20 min，30%A；20～25 min，50%A；25～27 min，30%A；27～30 min，30%A）；檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm；體積流量1.0 mL/min；柱溫為室溫。

2.2.4系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 按照“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件，分別取對(duì)照品混合溶液、干姜供試品溶液和炮姜供試品溶液各10μL進(jìn)樣。結(jié)果姜酮和6-姜酚的色譜峰峰形對(duì)稱(chēng)因子均在0.95～1.05之間，分離完全，與其他色譜峰的分離度均大于1.5；姜酮和6-姜酚的理論塔板數(shù)分別為10 646和13 811。姜酮、6-姜辣素混合對(duì)照品，干姜，市售炮姜，自制炮姜的HPLC色譜圖見(jiàn)圖2。

2.2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備 取“2.2.1”項(xiàng)下不同質(zhì)量濃度混合對(duì)照品溶液各10μL，自動(dòng)進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，姜酮、6-姜辣素質(zhì)量濃度（Ⅹ）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，計(jì)算回歸方程，結(jié)果見(jiàn)表2。

圖2　混合對(duì)照品溶液（A）、干姜樣品（B）、市售炮姜樣品（C）和自制炮姜樣品（D）的HPLC色譜圖Fig.2　HPLC chromatograms of m ixed reference substances（A），Ganjiang sam p Ie（B），commerciaI Paojiangsam p Ie（C）and hom emade Paojiang sam p Ie（D）

表2　姜酮、6-姜辣素線(xiàn)性回歸方程及相關(guān)系數(shù)Tab.2 Linear regression equation and correIation coefficient of zingerone and 6-gingeroI

2.2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取17號(hào)炮姜樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于0、4、8、12、16、24 h進(jìn)樣并測(cè)定峰面積，結(jié)果姜酮和6-姜辣素的RSD（n=6）分別為0.8%和1.5%，結(jié)果表明該樣品穩(wěn)定性良好。

2.2.7精密度試驗(yàn) 精密吸取混合對(duì)照品溶液10μL，自動(dòng)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算得姜酮與6-姜辣素的RSD（n=6）分別為0.5%和0.4%，表明儀器精密度良好。

2.2.8重復(fù)性試驗(yàn) 取16號(hào)炮姜樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，精密吸取10μL，自動(dòng)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積并計(jì)算，姜酮與6-姜辣素的RSD（n=6）分別為2.4%和2.2%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.2.9加樣回收試驗(yàn) 取已知含有量18號(hào)炮姜（姜酮、6-姜辣素分別為1.378、3.577mg/g）樣品6份，每份0.21g左右，精密稱(chēng)定后分別加入對(duì)照品姜酮0.35mg和6-姜辣素0.76mg，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，每次進(jìn)樣10μL計(jì)算回收率，見(jiàn)表3。

表3　姜酮、6-姜辣素的加樣回收試驗(yàn)結(jié)果Tab.3 ResuItsofrecoverytestsforzingeroneand6-gingeroI

2.2.10樣品測(cè)定 取表1中各干、炮姜0.5g，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在“2.2.3”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣，每個(gè)樣品進(jìn)樣2次，測(cè)定峰面積并計(jì)算，見(jiàn)表4。

表4　樣品中姜酮和6-姜辣素的測(cè)定結(jié)果Tab.4 DeterminationresuItsofzingeroneand6-gingeroIfromsampIes

結(jié)果表明：市售14份炮姜中，6-姜辣素含有量符合《中國(guó)藥典》2010年版項(xiàng)下規(guī)定的0.30%標(biāo)準(zhǔn)的僅為5份，而姜酮含有量差異更加明顯，提示炮姜的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)制定過(guò)程中需要考慮炮制過(guò)程的重要性，筆者建議炮姜質(zhì)量控制項(xiàng)下增加姜酮的定量測(cè)定，可促使生產(chǎn)者使用符合標(biāo)準(zhǔn)的干姜生產(chǎn)炮姜。

3　討論

中藥炮制是體現(xiàn)中醫(yī)辯證用藥特點(diǎn)的主要手段之一，而中藥的功效與其炮制方法有極為密切的關(guān)系。因此，在制定炮制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)如能選擇可體現(xiàn)炮制過(guò)程變化的成分進(jìn)行質(zhì)量控制，將對(duì)了解炮制品是否“依法炮制”具有十分重要的意義。文獻(xiàn)和課題組前期研究均表明，干姜在炮制為炮姜過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生新生成分——姜酮，藥理學(xué)研究表明，姜酮具有一定的抗炎、抗氧化、抗菌等活性［10-11］；課題組前期已對(duì)姜酮在炮制過(guò)程產(chǎn)生的條件進(jìn)行了考察，表明姜酮的含有量受炮制的溫度、時(shí)間影響十分明顯。姜辣素類(lèi)成分是姜中的主要活性成分，包括6-、8-、10-、12-姜酚等10余種，其中6-姜辣素（姜酚）含有量最高，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明市售炮姜樣品中6-姜辣素能達(dá)到《中國(guó)藥典》2010年版0.30%標(biāo)準(zhǔn)的樣品數(shù)量不足一半，同時(shí)姜酮含有量又偏低提示以低質(zhì)量的干姜藥材炮制炮姜現(xiàn)象存在。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，筆者建議在測(cè)定6-姜辣素的基礎(chǔ)上，增加姜酮定量測(cè)定來(lái)控制炮姜的質(zhì)量，這對(duì)于控制炮姜的炮制過(guò)程具有一定的科學(xué)性。

在《中國(guó)藥典》2010版炮姜薄層板鑒別基礎(chǔ)上，優(yōu)化了展開(kāi)條件，增加了姜酮的薄層鑒別方法，炮姜中姜酮和6-姜辣素的薄層斑點(diǎn)清晰，可實(shí)現(xiàn)定性鑒別。成分定量測(cè)定實(shí)驗(yàn)過(guò)程中分別考察了乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸和甲醇-0.1%磷酸等流動(dòng)相系統(tǒng)，結(jié)果以乙腈-0.1%磷酸作流動(dòng)相較佳；實(shí)驗(yàn)分別考察了Agi1ent TC-C18（4.6 mm×250 mm）、大連依利特Kromasi1 C18（4.6 mm×250 mm）、大連日普利Kromasi1 C18（4.6 mm×250 mm）和Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm）4種不同品牌的色譜柱，結(jié)果以Waters Symmetry C18色譜柱對(duì)兩種成分分離度、保留時(shí)間等方面較佳；同時(shí)優(yōu)化了體積流量、進(jìn)樣量等實(shí)驗(yàn)因素，最終建立了HPLC法同時(shí)定量測(cè)定炮姜中姜酮和6-姜辣素的方法。實(shí)驗(yàn)建立的姜酮和6-姜辣素的薄層鑒別和定量檢測(cè)方法簡(jiǎn)單、穩(wěn)定、重復(fù)性好，可為炮姜的質(zhì)量控制改進(jìn)和進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供依據(jù)。

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Im provement in quaIity controI of Zingiberis Rhizoma praeparatum in Chinese Pharmacopoeia（2010 Edition）

HAN Yan-quan1， HONG Yan2， LIXiang1， LIYu-xin1，2， WANG Yong-zhong1， XIA Lun-zhu1*
（1.The First Affiliated Hospital，Anhui University of Chinese Medicine，Grade3 Laboratory of TCM Preparation，State Administration of AnhuiUniversity of Chinese Medicine，Hefei230031，China 2.Anhui University of Chinese Medicine，Hefei230038，China）

AIM To exp1ore the feasibi1ity of improving TLC identification and content determination of Paojiang（Zingiberis Rhizoma praeparatum）in Chinese Pharmacopoeia（2010 Edition）.METHODS TLCmethod for zingerone and 6-gingero1adopted si1ica ge1G p1ate as the stationary phase，petro1eum ether-ch1oroform-ethy1acetate system as deve1oper，and their HPLCmethod emp1oyed Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm，5μm）as co1umn，acetonitri1e-0.1%phosphoric acid asmobi1e phasewith 1.0mL/min vo1umn speed at280 nm detection wave1ength in a gradient e1utionmode.RESULTS The TLC spots of zingerone and 6-gingero1were c1ear，HPLC cou1d simu1taneous1y determine the above measured constituents.As compared with homemade，the contents of zingerone and 6-gingero1 from fourteen commercia1Paojiang made marked1y difference.CONCLUSION It is suggested that the increase in the determination of zingerone cou1d avoid using the poor dried ginger by simp1e processing to satisfy the current qua1ity contro1of Paojiang.

Chinese Pharmacopoeia；Paojiang（Zingiberis Rhizoma praeparatum）；zingerone；qua1ity contro1 standardization

R283

A

1001-1528（2015）01-0160-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.01.034

2014-05-29

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81102811）；安徽省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（10040606Q40）；國(guó)家中醫(yī)藥重點(diǎn)學(xué)科臨床中藥學(xué)建設(shè)項(xiàng)目（國(guó)中醫(yī)藥人教發(fā)［2012］32號(hào)）

韓燕全，男，副主任中藥師，研究方向：中藥炮制與質(zhì)量控制。E-mai1：hyquan2003@163.com

夏倫祝，主任藥師，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥制劑和臨床藥學(xué)。E-mai1：xia1unzhu@sohu.com