王曉鶯

摘 要： 隨著分析方法學(xué)及生理學(xué)研究的日益深入，?；撬岬姆治龇椒ㄑ芯坑辛艘欢ǖ陌l(fā)展。本文綜述了近年來牛磺酸分析方法的研究進展，從薄層色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法三個方面介紹了有關(guān)?；撬岱治龇椒ǖ幕咎攸c和應(yīng)用實例，比較了各種方法的優(yōu)缺點和適用范圍，旨在為?；撬崾称贰⑺幤返难芯?、開發(fā)、應(yīng)用提供參考。

關(guān)鍵詞： 牛磺酸 分析方法 薄層色譜法 氣相色譜法 高效液相色譜法

1.引言

?；撬幔╰aurine）是在1827年首次由Tidman和Gmelin從牛膽汁中分離出來的一種酸，又稱牛膽堿、牛膽素。其化學(xué)結(jié)構(gòu)比較簡單，分子式為H■N-CH■-CH■SO■H，易溶于水，微溶于95%乙醇，加熱至300℃分解。其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，在室溫、避光、密閉、干燥的條件下可保存3年。

?；撬崾且环N有著廣泛生理功能的氨基酸，對生命的基本過程有重要的調(diào)節(jié)作用，被廣泛應(yīng)用于藥品或食品領(lǐng)域。如何準確、快速、簡便地測定各?；撬嶂破分信；撬岬暮?，日益成為大家關(guān)注的問題，以下筆者將對?；撬岬姆治龇椒ㄑ芯窟M展加以綜述。

2.分析方法

關(guān)于?；撬岬姆治龇椒▓蟮辣容^多。目前常用的檢測方法是薄層色譜法、氣相色譜法及高效液相色譜法等。

2.1薄層色譜法

薄層色譜法是目前常用的鑒別及測定?；撬岬姆椒?。周紅梅等以硅膠G為固定相，以正丁醇-無水乙醇-水-冰醋酸（3∶1∶1∶1）為展開劑，用茚三酮的乙醇溶液顯色，建立了復(fù)方尿維氨滴眼液中?；撬嵊嘘P(guān)物質(zhì)的檢測方法。實驗方法為：使用正丁醇-無水乙醇-水-冰醋酸=3∶1∶1∶1（體積比）為展開劑，上行展開5h。茚三酮乙醇溶液顯色劑噴霧后置110℃烘箱中加熱10min。顯色后斑點用紫外分光光度法檢測，檢測波長為280nm。實驗結(jié)果表明，此色譜條件下，?；撬峥膳c其他生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的中間產(chǎn)物有效分離。

使用薄層色譜法，操作簡便，不需特殊試劑和昂貴儀器，適宜在基層單位推廣、使用，并可使樣品中?；撬崤c雜質(zhì)得到較好地分離。但本法靈敏度較低、屬于半定量的方法，而且薄層厚度、點樣技術(shù)及展開的條件難以保持恒定，從而影響定量的準確性。

2.2氣相色譜法

氣相色譜法作為測定氨基酸及?；撬岷康姆椒ㄔ趪鴥?nèi)外得到較廣泛的應(yīng)用。Chorvat等與Motoki Matsuda等使用相同的氨基衍生化試劑，僅在衍生化過程中做了較小改動，先后建立了氣相色譜-質(zhì)譜（GC-EI-MS）測定樣品中?；撬岷康姆椒?。兩項實驗結(jié)果均表明，食品等樣品中有85%的?；撬崾且杂坞x形式存在的。

氣相色譜法在靈敏度及準確度等方面都能達到檢測要求，但是在樣品前處理等方面要求較高，而且氣相色譜昂貴的價格使其不宜推廣使用。

2.3高效液相色譜法

高效液相色譜法在測定樣品中?；撬岬暮繒r，具有樣品前處理方法簡單、靈敏度和準確度較高等優(yōu)點，故更被廣泛應(yīng)用。與許多氨基酸一樣，?；撬嵝枰獙ζ溥M行衍生化反應(yīng)。文獻報道的用于反相高效液相色譜法測定?；撬岬难苌噭┲饕校亨彵蕉兹∣PA）、丹磺酰氯（Dansyl-Cl）、4-二甲胺基偶氮苯-4’-磺酰氯（DABS-Cl）等。下面對目前常用的測定?；撬崾褂玫难苌噭┻M行簡單介紹。

2.3.1鄰苯二甲醛（OPA）

鄰苯二甲醛（OPA）是目前柱前衍生測定牛磺酸應(yīng)用最廣泛的試劑之一，國外有研究者研究了OPA作為衍生化試劑分析氨基酸的方法。國標（2003版）規(guī)定的測定?；撬岬臉藴史椒ㄖ皇怯肙PA（鄰苯二醛）做柱前衍生試劑，高液相色譜法測定食品中的?；撬?。具體做法是：吸取2.5ml樣品提取液于5ml具塞離心管中，準確加入等量的衍生劑，搖勻，反應(yīng)2min后，經(jīng)0.45μm的微孔濾膜過慮，立即進樣20μl，測定其峰面積。所有試樣及標準溶液從反應(yīng)至進樣的時間應(yīng)保持一致，并控制在5min內(nèi)，以保留時間定性，標準曲線法定量。由于衍生化試劑對衍生反應(yīng)的速度及衍生產(chǎn)物的穩(wěn)定性均有比較大的影響，故Toshiaki Momose等研究了OPA在線衍生測定食品中?；撬岬姆椒?，使得分析結(jié)果更準確可靠。

鄰苯二甲醛（OPA）作為最常用HPLC法測定?；撬岬闹把苌噭?，其在使用過程中表現(xiàn)出許多優(yōu)點，如①OPA本身不干擾分離與檢測，不必除去過量試劑。②反應(yīng)迅速，可實現(xiàn)在線衍生化反應(yīng)，提高工作效率。但其在應(yīng)用中存在一些問題，主要表現(xiàn)在：①OPA衍生產(chǎn)物很不穩(wěn)定，需要嚴格控制衍生化反應(yīng)時間及進樣時間（各樣品與標準品的衍生化反應(yīng)時間及進樣時間要嚴格保持一致，并控制在5min內(nèi)），否則將嚴重影響準確度及精密度，對操作要求比較高。②需在衍生試劑中另外加入乙硫醇共同反應(yīng)，而乙硫醇氣味刺鼻，且有比較大的毒性。

2.3.2丹磺酰氯（Dansyl-Cl）

近年來，常見用丹磺酰氯（Dansyl-Cl）作為HPLC法測定生物樣品中的?；撬岬闹把苌噭┑膱蟮?。丹磺酰氯-?；撬釓?fù)合物具有顯著的熒光特性，并且性質(zhì)穩(wěn)定，這使其優(yōu)于其他許多衍生化試劑。但是，此反應(yīng)亦有其不足之處，如需加入熒光猝滅劑中止反應(yīng)、較高的反應(yīng)溫度及較長的反應(yīng)時間等。

Amiss等證實了丹磺酰氯（Dansyl-Cl）適宜用于貓科動物的血漿及全血的光譜學(xué)分析?；贏miss等的實驗基礎(chǔ)之上，SanjeewaGamagedara等研究者建立了尿液中?；撬岬母咝б合嗌V測定方法。

2.3.34-二甲胺基偶氮苯-4’-磺酰氯（DABS-Cl）

DABS-Cl以其高靈敏度、較強的可靠性及良好的重現(xiàn)性等優(yōu)點被用于?；撬岬闹把苌鷦?/p>

Stocchi等應(yīng)用梯度洗脫程序建立了人血清中?；撬岬母咝б合嗌V分析方法，方法的靈敏度達到pmol級。具體做法是：取10μl血清樣品，用0.5ml高氯酸（5%）萃取或用CF50的濾膜過濾，萃取液或濾液與40μl DABS-Cl（4nmol/μl的乙腈溶液，臨用新配）在10μl碳酸氫鈉（0.1mol/L，pH=9）存在的條件下，進行衍生化反應(yīng)，反應(yīng)溫度為70℃，反應(yīng)時間為10min。衍生產(chǎn)物在C18柱上得到良好分離，檢測波長為436nm。

綜上，高效液相色譜法是目前測定食品特別是生物樣品中牛磺酸最常用的方法。雖然?；撬崛狈ψ贤馕栈鶊F而使其必須經(jīng)過較復(fù)雜的衍生化反應(yīng)方可進行測定，但由于高效液相色譜法較高的靈敏度、可靠性及相對較短的分析時間，仍然使其成為測定牛磺酸最常采納的方法。

3.展望

近年來，人們正以極大興趣不斷深入研究這一結(jié)構(gòu)簡單、容易獲得、幾乎無毒、應(yīng)用廣泛的化合物，而且不斷擴大其在醫(yī)藥及衛(wèi)生領(lǐng)域中的應(yīng)用。但是，對于?；撬岬难芯窟€存在許多未知領(lǐng)域，還需要進一步探索，以便更全面深入地認識?；撬?，為人類所利用，相信不久的將來對?；撬岬难芯繉⒊霈F(xiàn)新的飛躍。