李凱霞+++劉福民

[摘要] 目的 探討分析Toll受體4（TLR4）的表達與胎膜早破患者絨毛膜羊膜炎的關(guān)系。方法 隨機選取2013年1月—2015年4月胎膜早破病例30例（研究組）與正常a晚期妊娠女性30例（對照組），分別測定胎盤組織TLR4定位、表達特點以及白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）水平，予以產(chǎn)后胎膜病理檢查。結(jié)果 2組TLR4胎盤表達情況以及胎盤TLR4 mRNA水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；研究組血清IL-8水平明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。最終檢查發(fā)現(xiàn)組織絨毛膜羊膜炎23例，TLR4表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），TLR4 mRNA水平高于無組織絨毛膜羊膜炎者，組織絨毛膜羊膜炎者IL-6、IL-8水平高于無組織絨毛膜羊膜炎者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。該組胎膜組織病理檢查確認(rèn)為亞臨床型絨毛膜羊膜炎，三期急性炎性改變，Ⅰ期、Ⅱ、Ⅲ期改變逐漸明顯。結(jié)論 TLR4上升以及IL-8上升均與絨毛膜羊膜炎有關(guān)聯(lián)，IL-8變化關(guān)系到胎膜完整性，對TLR4的監(jiān)測是防控胎膜早破、絨毛膜羊膜炎的關(guān)鍵。

[關(guān)鍵詞] Toll受體4；表達；胎膜早破；絨毛膜羊膜炎

[中圖分類號] R4.433 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2015）07（a）-0001-03

胎膜早破主要因感染所致，Toll樣受體與固有免疫左右有直接關(guān)聯(lián)，而TLRs作用于細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等環(huán)節(jié)，TLR4關(guān)系到內(nèi)毒素信號傳導(dǎo)過程，且可能與胎膜早破絨毛膜羊膜炎的發(fā)生有關(guān)[1]，該研究隨機選取2013年1月—2015年4月胎膜早破病例30例為研究對象，探討分析了TLR4與胎膜早破絨毛膜羊膜炎之間的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2013年1月—2015年4月胎膜早破病例30例（研究組）與正常晚期妊娠女性30例（對照組），研究組年齡22～34歲，平均年齡（26.8±2.4）歲；對照組年齡23～33歲，平均年齡（26.3±2.8）歲，其中15例孕周在28～37周之間（對照1組），另15例孕周≥37周（對照2組）。2組基礎(chǔ)資料對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 方法

2組均在剖宮產(chǎn)之時剪取臍帶附著處胎盤垂直斷面中央標(biāo)本2塊，使用0.9%氯化鈉溶液將標(biāo)本漂洗干凈，其中1塊以液氮冷凍處理，置于-70℃環(huán)境中備用，另1塊用來提取RNA。

2組孕婦分娩前均常規(guī)抽取肘靜脈血標(biāo)本各5 mL，高敏放射免疫測定標(biāo)本中IL-6、IL-8水平，產(chǎn)后均在破口部分剪取胎膜組織標(biāo)本，以10%甲醛固定送檢。

免疫組化。冰凍切片取出，厚度維持在10 μm，并以冷丙酮固定處理、將內(nèi)源性過氧化物酶去除。山羊血清與0.1%Triton X-100溶液通透細(xì)胞封閉處理。將兔抗人TLR2 IgG抗體滴到切片之上，置于4℃濕盒內(nèi)一夜。取出后清洗，將生物素化山羊抗兔IgG/HRP二抗滴入，二氨基聯(lián)苯氨顯色處理，顯色后再以蘇木素染色，梯度乙醇處理后脫水，封片。觀察組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化，若結(jié)構(gòu)依然完整，且發(fā)現(xiàn)棕褐色胞漿，胞核為藍(lán)色陽性；細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整但胞核為藍(lán)色，未見棕褐色胞漿，則胞核映襯下可見淺藍(lán)色，判定為陰性細(xì)胞。

檢測胎盤組織TLR 4的mRNA。組織標(biāo)本置于冰盒，Trizol液研磨處理，將胎盤組織總RNA以Trizol一步法提取出來，逆轉(zhuǎn)錄得到cDNA，將TLR2、TLR4引物加入并誘導(dǎo)擴增。分別在94℃環(huán)境下處理5 min、30 s，72℃環(huán)境下處理30 s、54℃環(huán)境下處理30 s，72 ℃延伸處理7 min，進行PCR反應(yīng)。參照2%瓊脂糖快速電泳β-actin，凝膠成像系統(tǒng)進行擴增產(chǎn)物分析。

1.3 診斷標(biāo)準(zhǔn)

參照第8版謝幸主編的《婦產(chǎn)科學(xué)》診斷胎膜早破[2]。胎膜組織病理檢查出現(xiàn)炎性反應(yīng)，產(chǎn)前階段或分娩后24 h后測量體溫在37.5 ℃之上，有高于標(biāo)準(zhǔn)值的白細(xì)胞計數(shù)，惡露有臭味；胎膜病理檢測為炎性，即診斷為絨毛膜羊膜炎[3]。

1.4 統(tǒng)計方法

采用SPSS 16.0軟件對該研究的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)的分析，計量資料用（x±s）表示，對比應(yīng)用t檢驗，P<0.05時，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TLR4表達情況

2組TLR4胎盤表達情況以及胎盤TLR4 mRNA水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；研究組血清IL-6、IL-8水平明顯高于對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表1。

2.2 TLR4表達與絨毛膜羊膜炎關(guān)聯(lián)

最終檢查發(fā)現(xiàn)組織絨毛膜羊膜炎23例，TLR4表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），TLR4 mRNA水平高于無組織絨毛膜羊膜炎者，組織絨毛膜羊膜炎者IL-6、IL-8水平高于無組織絨毛膜羊膜炎者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

2.3 該組胎膜組織病理檢查

組胎膜組織病理檢查確認(rèn)為亞臨床型絨毛膜羊膜炎，均采用HE染色，圖1為Ⅰ期絨毛膜羊膜炎胎膜組織，圖2為Ⅱ期絨毛膜羊膜炎胎膜組織，圖3為Ⅲ期絨毛膜羊膜炎胎膜組織，三期絨毛膜羊膜炎胎膜組織均呈現(xiàn)出陽性反應(yīng)，且出現(xiàn)了急性炎性改變，Ⅰ期、Ⅱ、Ⅲ期改變逐漸明顯。

3 討論

生殖道病原微生物的上行性感染等因素會直接導(dǎo)致胎膜早破等現(xiàn)象的發(fā)生。國外學(xué)者提出，正常足月妊娠者胎盤免疫組化研究可見TLR2、TLR4正常表達，這是因為上述物質(zhì)在分娩發(fā)動調(diào)節(jié)過程中發(fā)揮著一定的作用[4]，研究還發(fā)現(xiàn)，TLRs直接影響介導(dǎo)母體胎兒之間的天然免疫工作[5]。該研究為探討分析Toll受體4（TLR4）的表達與胎膜早破患者絨毛膜羊膜炎的關(guān)系，使用RT-PCR技術(shù)以及免疫組化技術(shù)分別測定正常妊娠晚期以及胎膜早破孕婦胎盤組織TLR4 mRNA表達情況以及蛋白表達特點，檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，2組TLR4胎盤表達情況以及胎盤TLR4 mRNA水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；研究組血清IL-8水平明顯高于對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。最終檢查發(fā)現(xiàn)組織絨毛膜羊膜炎23例，TLR4表達水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），TLR4 mRNA水平高于無組織絨毛膜羊膜炎者，組織絨毛膜羊膜炎者IL-8水平高于無組織絨毛膜羊膜炎者差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。提示TLR4在正常妊娠情況下以及胎膜早破情況下有相似的胎盤組織表達特征，胎膜早破確實不是因單一因素產(chǎn)生的。