王妙飛，陳嬌婷，羅國安，2，姜巖（.贛南醫(yī)學(xué)院，江西贛州34000；2.清華大學(xué)，北京00000）

榕樹果總黃酮酶法輔助回流提取研究

王妙飛1，陳嬌婷1，羅國安1，2，姜巖1
（1.贛南醫(yī)學(xué)院，江西贛州341000；2.清華大學(xué)，北京100000）

摘要：對纖維素酶法提取榕樹果總黃酮的工藝進(jìn)行研究。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用L9（34）正交試驗(yàn)法對酶法提取榕樹果總黃酮的條件進(jìn)行優(yōu)化，考察酶用量、酶解溫度、pH、酶解時(shí)間對榕樹果總黃酮提取率的影響。結(jié)果表明：最佳提取工藝條件為酶用量25%，酶解時(shí)間30min，酶解溫度50℃，酶解pH5.5。在該條件下測定榕樹果總黃酮的提取率為10.22mg/g。

關(guān)鍵詞：榕樹果；總黃酮；纖維素酶；提取

榕樹為?？崎艑賳棠?，又名細(xì)葉榕、成樹，原產(chǎn)于熱帶亞洲。榕樹多生長在高溫多雨的熱帶雨林地區(qū)。在我國，主要分布在廣西、廣東、海南、福建、江西贛州等地[1]。榕樹為贛州市樹，分布廣泛，資源豐富，具有廣泛開發(fā)和利用價(jià)值。榕樹是重要的野生食物源，榕樹的氣生根（又名榕樹須）和葉（又名落地金錢）是中國民間常用中草藥，但有關(guān)榕樹果營養(yǎng)成分的研究鮮見報(bào)道。

黃酮是黃酮類化合物的總稱，泛指兩個(gè)具有酚羥基的苯環(huán)通過中央三碳原子相互連結(jié)而成的一系列化合物。黃酮的功效是多方面的，它具有抗氧化、降膽固醇、防衰老、降血糖及保肝等藥理作用[2-3]。如果能從榕樹果中提取分離出黃酮類化合物，對開發(fā)和拓展榕樹的應(yīng)用具有積極的作用。因此，本試驗(yàn)采用纖維素酶解與回流法相結(jié)合的方式提取榕樹果黃酮，利用酶解作用破壞榕樹果細(xì)胞壁，從而有利于對胞內(nèi)黃酮類物質(zhì)的高效提取。

1　材料與方法

1.1儀器與材料

PE Lambda35UV/VIS紫外可見分光光度計(jì)：上海應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室；AB135-S型電子天平：METTLER TOLEDO；DZKW-D-2電熱恒溫水浴鍋：北京市永光明醫(yī)療儀器廠；202A-2電熱干燥箱：上海陽光實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；PH-3C數(shù)顯pH計(jì)：上海雷磁儀器廠；TDL-50B離心機(jī)：上海安高科學(xué)儀器廠。

榕樹果：10月初采于江西省贛州市；纖維素酶（酶活20 000U/g）：淮安市百麥綠色生物能源有限公司；蘆丁對照品（A0103，含量≥98%）：北京恒元啟天化工技術(shù)研究院；無水乙醇、氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁等試劑均為國產(chǎn)分析純試劑；試驗(yàn)用水為蒸餾水。

1.2方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液制備及標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密稱取在105℃常壓干燥至恒重的蘆丁對照品，配成濃度為364mg/L的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0m L于10m L比色管中。各加60%乙醇使成5mL，先加5%NaNO2溶液0.3mL，搖勻，放置6min，再加10%Al（NO3）3溶液0.3mL，搖勻，放置6min，加4%NaOH溶液4mL，各用蒸餾水稀釋到10mL，搖勻，放置15min，以不加標(biāo)準(zhǔn)溶液的相應(yīng)溶液作空白，在波長510nm處測定吸光度。

1.2.2榕樹果黃酮提取工藝流程

榕樹果經(jīng)干燥，粉碎，過40目篩，取適量于圓底燒瓶中，加入調(diào)好pH的溶液，升溫，加入酶，不同條件下酶解一定時(shí)間后，加入無水乙醇使乙醇濃度達(dá)到60%保溫回流提取30min，過濾，濾液用60%乙醇溶液定容至100mL容量瓶中，得供試品溶液。精密量取供試品溶液5.0m L置于10m L比色管中，按1.2.1項(xiàng)下的方法測定吸光度。

2　結(jié)果與討論

2.1蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作曲線

以最小二乘法作線性回歸，得蘆丁濃度C與吸光度A的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線方程為：A=0.013 3C-0.003 1，R= 0.999 1。表明本方法線性關(guān)系良好，可作為榕樹果黃酮含量測定方法。標(biāo)準(zhǔn)工作曲線見圖1。

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)工作曲線Fig.1　Standard curveof rutin

，式中：C為由A值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求得稀釋后提取液濃度，mg/L；V為提取液體積，L；D為稀釋倍數(shù)；M為原料質(zhì)量，g。

2.2正交試驗(yàn)

在單因素的基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)法對酶法提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，選用L9（34）進(jìn)行正交試驗(yàn)，以黃酮提取率為指標(biāo)，研究酶用量、酶解溫度、酶解pH和酶解時(shí)間對黃酮提取率的影響，因素與水平的設(shè)計(jì)和試驗(yàn)結(jié)果見表1和表2。

表1 正交試驗(yàn)因素水平表Table 1　Factorsand levels

根據(jù)表2中的極差分析，可得出影響試驗(yàn)因素的主次順序如下：C（酶解溫度）>A（酶用量）>B（酶解時(shí)間）>D（酶解pH）。綜合各種因素，確定榕樹果黃酮的最佳提取工藝條件為A3B1C2D2，即酶用量25%，酶解時(shí)間30min，酶解溫度50℃，酶解pH5.5。在本試驗(yàn)的研究結(jié)果中，A3B1C2D2不在所列正交試驗(yàn)之內(nèi)，為此按照最佳條件進(jìn)行了驗(yàn)證試驗(yàn)。在最佳提取工藝條件下，榕樹果黃酮的提取率為10.22mg/g。

將正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3。

表2正交試驗(yàn)結(jié)果Table 2　Resultsof orthogonal testdesign

表3方差分析結(jié)果Table 3　Resultsofanalysisofvariance

從方差分析結(jié)果來看，酶用量有較大顯著性差異，酶解溫度和酶解時(shí)間也有一定的顯著性差異，酶解pH無顯著性差異。

3　結(jié)果與展望

通過正交試驗(yàn)法對榕樹果黃酮的酶法提取工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化，得到最佳提取工藝條件為：酶用量25%，酶解時(shí)間30min，酶解溫度50℃，酶解pH5.5。在該條件下測定榕樹果黃酮的提取率為10.22mg/g。結(jié)果表明，榕樹果含有一定量的黃酮化合物。因此榕樹果黃酮的酶法提取工藝研究，對開發(fā)和拓展榕樹的應(yīng)用具有積極的作用。

參考文獻(xiàn)：

[1]中國科學(xué)學(xué)院華南植物研究所．海南植物志:第二卷[M]．北京:科學(xué)出版社,1965:384-400

[2]葉懷義,龔賦嵐,尚明,等．甘草黃酮抗衰老作用的研究[J]．哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2004,20(1):93-95

[3]徐雅琴,孫艷梅,付紅,等．穗醋栗葉片中黃酮類物質(zhì)的研究[J]．天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2001,13(2):21-23

DO I：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.19.017

收稿日期：2014-04-01

作者簡介：王妙飛（1980—），女（漢），講師，碩士，研究方向：分析化學(xué)。

Study on Enzymatic-Refluxing Extraction of Total Flavonoids from Banyan Fruit

WANGMiao-fei1，CHEN Jiao-ting1，LUOGuo-an1，2，JIANGYan1
（1.Gannan Medical University，Ganzhou 341000，Jiangxi，China；2.Tsinghua University，Beijing 100000，China）

Abstract：In thisexperiment，enzymolysis technologywasapplied for extraction of total flavonoids from Banyan fruit.Based on single factor tests，the extraction conditions of polysaccharide were optimized by L9（34）orthogonal test.The influence of enzyme dosage，extraction temperature，pH and extraction time on yield of polysaccharide was studied.The optimum conditionswere as follows：dosage of cellulose 25%，time 30min，temperature50℃and pH5.5.Under these conditions，theextraction yield was10.22mg/g.

Keywords：banyan fruit；total flavonoids；cellulose；extraction