尹利端，黃靜，張厚森，董叢超（.煙臺新時代健康產(chǎn)業(yè)有限公司，山東煙臺64006；.國家質(zhì)檢總局標準與技術法規(guī)研究中心，北京0008；.江蘇省理化測試中心，江蘇南京004）

復合低聚肽增強免疫力功能研究

尹利端1，黃靜2，張厚森3，董叢超1
（1.煙臺新時代健康產(chǎn)業(yè)有限公司，山東煙臺264006；2.國家質(zhì)檢總局標準與技術法規(guī)研究中心，北京100028；3.江蘇省理化測試中心，江蘇南京210042）

摘要：對復合低聚肽增強免疫力的功能進行研究。分別以0.4、0.8、2.4 g/kg·BW（相當于人體推薦量的5、10、30倍）劑量的復合低聚肽對小鼠連續(xù)灌胃30 d，分別測定小鼠的細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞功能、NK細胞活性。結(jié)果顯示，體液免疫功能、單核-巨噬細胞吞噬功能、NK細胞活性均為陽性，細胞免疫功能為陰性，表明復合低聚肽具有增強免疫力功能。

關鍵詞：復合低聚肽；增強免疫力；保健食品

免疫力是機體自身的一種主動防御機制，對維持機體健康具有十分重要意義?，F(xiàn)代城市中相當多的人群由于長期缺乏運動、生活不規(guī)律、工作壓力大等原因，導致機體免疫力低下，嚴重危害身體健康。開發(fā)安全、有效的具有增強免疫力功能的保健食品，對于改善免疫力低下人群的健康狀況具有重要意義。低聚肽是以大分子蛋白質(zhì)為原料，經(jīng)酶解、分離、純化等過程制成的蛋白水解產(chǎn)物。研究表明，低聚肽具有免疫調(diào)節(jié)、降血壓、抗腫瘤、降血脂、抗氧化、促進礦物質(zhì)轉(zhuǎn)運等功能[1-3]。作為一類新型功能性食品原料，低聚肽以其豐富的保健功能、優(yōu)良的加工特性、易于被人體吸收等特點而備受業(yè)界關注。本研究按照《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》（2003版）的試驗要求[4]，對由大豆低聚肽和膠原低聚肽組成的復合低聚肽樣品進行了增強免疫力功能的研究，以期進一步掌握復合低聚肽增強免疫力的作用效果和劑量范圍，為低聚肽在增強免疫力保健食品的開發(fā)方面提供科學參考。

1　材料和方法

1.1試驗樣品

復合低聚肽由某科技公司提供，規(guī)格4.8 g/袋。人體口服推薦用量為每人每日1次，每次1袋。

1.2試驗動物與分組

選用SPF級昆明種雌性小鼠160只，6周齡～8周齡，體重18 g～22 g。每40只小鼠為1大組，共4大組。免疫一組用于遲發(fā)型變態(tài)反應（DTH）實驗、血清溶血素的測定、抗體生產(chǎn)細胞數(shù)的測定；免疫二組用于小鼠碳廓清實驗；免疫三組用于小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗；免疫四組用于小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗和小鼠NK細胞活性測定。每免疫大組小鼠分為對陰性對照組、低、中、高劑量組，各10只。

1.3主要儀器與試劑

光學顯微鏡：日本Olympus株式會社；紫外分光光度計：日本島津株式會社；酶聯(lián)免疫檢測儀：美國Thermo公司；CO2培養(yǎng)箱：上海島析公司。刀豆蛋白A、青鏈霉素：美國Sigma公司；RPMI1640培養(yǎng)液、小牛血清：美國Gibco公司；綿羊紅細胞（SRBC）、氧化型輔酶I、瓊脂糖、四甲基偶氮唑鹽（MTT）：美國Amersco公司。

1.4劑量選擇與受試物給予方式

試驗樣品的推薦用量為每人每日4.8 g，每人按60 kg體重計，相當于0.08 g/d/kg·BW，按相當于人體推薦量的5、10、30倍確定小鼠的低、中、高劑量，即各組小鼠每日劑量分別為0.4、0.8、2.4 g/kg·BW。用蒸餾水配制試驗樣品，低、中、高劑量樣品濃度分別為20、40、120 g/L，按20mL/kg·BW的體積給予相應劑量組動物灌胃，對照組以等體積蒸餾水，每日灌胃1次，連續(xù)給予30 d后測定各項免疫指標。

1.5試驗方法

臟器/體重比值測定：小鼠稱重后處死，取出胸腺、脾臟，去盡筋膜及表面血污，稱重，計算胸腺體重比值及脾臟體重比值。

其他免疫指標測定：小鼠DTH實驗（足跖增厚法）、ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗（MTT法）、抗體生成細胞測定（Jerne改良玻片法）、小鼠血清溶血素測定、小鼠碳廓清實驗、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗（半體內(nèi)法）、小鼠NK細胞活性測定等按照《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》（2003版）規(guī)定的方法進行。

1.6試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計

采用SPSS軟件進行試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計和方差分析。

2　結(jié)果與分析

2.1復合低聚肽對小鼠體重的影響

受試樣品對各免疫組小鼠體重的影響結(jié)果見表1、表2、表3、表4。

表1　復合低聚肽對小鼠（免疫一組）體重的影響（x±SD）Tab le1　Effectof com pound oligopeptideonm iceweightof group one（±SD）

表1　復合低聚肽對小鼠（免疫一組）體重的影響（x±SD）Tab le1　Effectof com pound oligopeptideonm iceweightof group one（±SD）

劑量/（g/kg·BW） 動物數(shù)/只　　初體重/g　　終體重/g　　增重/g陰性對照10　19.15±1.15 31.17±1.83 12.02±2.31 0.4（低）　10　19.20±1.08 31.29±1.52　12.09±1.92 0.8（中）　10　19.42±1.10 31.72±1.93　12.30±3.12 2.4（高）　10　19.36±0.92 31.59±1.99 12.23±2.19

表2　復合低聚肽對小鼠（免疫二組）體重的影響（±SD）Table2　Effectof compound oligopeptide onm iceweightofgroup two（±SD）

表2　復合低聚肽對小鼠（免疫二組）體重的影響（±SD）Table2　Effectof compound oligopeptide onm iceweightofgroup two（±SD）

劑量/（g/kg·BW） 動物數(shù)/只　初體重/g　　終體重/g　　增重/g陰性對照10　19.53±1.56 30.96±1.85 11.43±1.36 0.4（低）　10　19.36±1.12 31.45±1.82　12.09±2.16 0.8（中）　10　19.82±1.05 30.62±1.98　10.8±2.71 2.4（高）　10　19.66±0.86 31.59±2.51 11.93±2.88

表3　復合低聚肽對小鼠（免疫三組）體重的影響（±SD）Table3　Effectof compound oligopeptide onm iceweightofgroup three（x±SD）

表3　復合低聚肽對小鼠（免疫三組）體重的影響（±SD）Table3　Effectof compound oligopeptide onm iceweightofgroup three（x±SD）

劑量/（g/kg·BW） 動物數(shù)/只　初體重/g　　終體重/g　　增重/g陰性對照10　19.31±1.19 32.25±3.11 12.94±3.21 0.4（低）　10　19.82±1.35 32.89±2.56　13.07±3.03 0.8（中）　10　19.68±1.09 33.12±2.77　13.44±2.75 2.4（高）　10　18.86±0.72 32.56±3.15　13.7±3.55

表4　復合低聚肽對小鼠（免疫四組）體重的影響（±SD）Table4　Effectof compound oligopeptide onm iceweightofgroup four（x±SD）

表4　復合低聚肽對小鼠（免疫四組）體重的影響（±SD）Table4　Effectof compound oligopeptide onm iceweightofgroup four（x±SD）

劑量/（g/kg·BW） 動物數(shù)/只　初體重/g　　終體重/g　　增重/g陰性對照10　19.28±0.92 34.12±2.16 14.84±1.69 0.4（低）　10　19.32±1.06 35.01±1.81 15.69±2.74 0.8（中）　10　19.54±1.13 34.53±1.34　14.99±1.88 2.4（高）　10　19.11±1.28 34.83±1.19 15.72±1.63

由表1、表2、表3、表4可知，各劑量組小鼠在試驗初、末期體重變化與陰性對照組無顯著性差異（P＞0.05），小鼠增重與陰性對照組比較無顯著性差異（P＞0.05），表明受試樣品對小鼠體重無影響。

2.2復合低聚肽對小鼠臟器/體重比值的影響

受試樣品對小鼠臟器/體重比值影響的試驗結(jié)果見表5。

表5　復合低聚肽對小鼠臟器/體重比值的影響（x±SD）Table 5　Effect of com pound oligopeptideonm ice imm uneorgan/ bodyweight ratio（±SD）

表5　復合低聚肽對小鼠臟器/體重比值的影響（x±SD）Table 5　Effect of com pound oligopeptideonm ice imm uneorgan/ bodyweight ratio（±SD）

（g/kg·BW）　　動物數(shù)/只　　脾臟體重比值/ （mg/g）胸腺體重比值/ （mg/g）陰性對照10　5.22±0.66　3.11±0.48 0.4（低）　10　4.91±0.48　2.91±0.81 0.8（中）　10　5.09±0.71　2.85±0.52 2.4（高）　10　4.95±0.79　3.06±0.49劑量/

由表5可知，經(jīng)口給予小鼠受試樣品30 d，小鼠的脾臟體重比值和胸腺體重比值與陰性對照組比較，各劑量組均無顯著性差異（P＞0.05），表明受試樣品對小鼠的免疫器官體重比值無影響。

2.3復合低聚肽對小鼠細胞免疫功能的影響

受試樣品對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應及淋巴細胞增殖能力影響的試驗結(jié)果見表6。

表6　復合低聚肽對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應及淋巴細胞增殖能力的影響±SD）Tab le6　Effectof com pound oligopeptideon delayed type hypersensitivity and lym phocyte transform ation capability inm ice （±SD）

表6　復合低聚肽對小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應及淋巴細胞增殖能力的影響±SD）Tab le6　Effectof com pound oligopeptideon delayed type hypersensitivity and lym phocyte transform ation capability inm ice （±SD）

注：*表示與陰性對照組比較，具有顯著性差異（P＜0.05）。

劑量/ （g/kg·BW）動物數(shù)/只淋巴細胞增殖能力實驗足跖腫脹度/mm　　淋巴細胞增殖能力/ OD差值陰性對照10　0.25±0.11　10　0.120±0.042 0.4（低）　10　0.24±0.16　10　0.155±0.067 0.8（中）　10　0.33±0.17　10　0.161±0.069 2.4（高）　10　0.35±0.16　10　0.190±0.043*DTH實驗　　動物數(shù)/只

由表6可知，在綿羊紅細胞誘導的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應試驗中，受試樣品各劑量組足跖增厚值與對照組比較均無顯著性差異。對ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化試驗中，各劑量組光密度差值均高于對照組，且高劑量組具有顯著性差異（P＜0.05），表明受試樣品具有促進小鼠淋巴細胞增殖轉(zhuǎn)化能力的作用。

2.4復合低聚肽對小鼠體液免疫的影響

受試樣品對小鼠抗體生成細胞數(shù)及血清溶血素水平影響的試驗結(jié)果見表7。

表7　復合低聚肽對小鼠抗體生成細胞數(shù)及血清溶血素水平的影響（±SD）Table7 Effect of com pound oligopeptideon antibody p roducing cellsand blood-serum erythrocytolysin inm ice（±SD）

表7　復合低聚肽對小鼠抗體生成細胞數(shù)及血清溶血素水平的影響（±SD）Table7 Effect of com pound oligopeptideon antibody p roducing cellsand blood-serum erythrocytolysin inm ice（±SD）

注：*表示與陰性對照組比較，具有顯著性差異（P＜0.05）。

劑量/ （g/kg·BW）抗體生成細胞實驗　　血清溶血素實驗空斑數(shù)/（×103/全脾mm）　　抗體積數(shù)陰性對照10　92.41±25.38　141.22±19.02 0.4（低）　10　101.34±34.15　148.25±22.87 0.8（中）　10　109.56±33.27*　158.92±20.35 2.4（高）　10　111.25±27.17*　197.53±23.55*動物數(shù)/只

由表7可知，各劑量組小鼠的抗體生成細胞數(shù)均高于陰性對照組，并且中、高劑量組與陰性對照組比較具有顯著性差異（P＜0.05），表明受試樣品具有增加小鼠抗體生成細胞數(shù)的能力。小鼠血清溶血素試驗中，高劑量組的抗體積數(shù)與對照組相比具有顯著性差異（P＜0.05），表明受試樣品具有提高小鼠血清溶血素水平的作用。

2.5復合低聚肽對小鼠單核-巨噬細胞碳廓清能力的影響

受試樣品對小鼠單核-巨噬細胞碳廓清能力影響的試驗結(jié)果見表8。

表8　復合低聚肽對小鼠單核-巨噬細胞碳廓清能力的影響（x±SD）Table 8　Effectof com pound oligopeptideon carbon-clearance by mononuclear-macrophage inmice（±SD）

表8　復合低聚肽對小鼠單核-巨噬細胞碳廓清能力的影響（x±SD）Table 8　Effectof com pound oligopeptideon carbon-clearance by mononuclear-macrophage inmice（±SD）

注：*表示與陰性對照組比較，具有顯著性差異（P＜0.05）；**表示與陰性對照組比較，具有極顯著性差異（P＜0.01）。

劑量/（g/kg·BW）　　動物數(shù)/只　　吞噬指數(shù)陰性對照10　5.22±0.61 0.4（低）　10　6.01±0.71*0.8（中）　10　6.09±0.66*2.4（高）　10　6.65±0.58**

由表8可知，與陰性對照組比較，復合低聚肽各劑量組小鼠單核-巨噬細胞碳廓清能力明顯增加，且具有顯著性差異，其中高劑量組對小鼠單核-巨噬細胞碳廓清能力影響非常顯著（P＜0.01），表明受試樣品具有促進小鼠單核-巨噬細胞碳廓清能力的作用。

2.6復合低聚肽對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力的影響

受試樣品對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力影響的試驗結(jié)果見表9。

表9　復合低聚肽對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力的影響（±SD）Table9　Effectof com pound oligopeptideon capability of phagocytizing chicken redcellsby peritonealmacrophage inm ice （±SD）

表9　復合低聚肽對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞能力的影響（±SD）Table9　Effectof com pound oligopeptideon capability of phagocytizing chicken redcellsby peritonealmacrophage inm ice （±SD）

劑量/（g/kg·BW）　動物數(shù)/只　　吞噬率　　吞噬指數(shù)陰性對照10　16.46±5.37　0.24±0.08 0.4（低）　10　21.33±6.14　0.28±0.09 0.8（中）　10　22.16±6.23　0.30±0.07 2.4（高）　10　22.65±5.87　0.31±0.08

由表9可知，與陰性對照組比較，受試樣品各劑量組對小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的能力均具有增加的趨勢，但均沒有顯著性差異（P＞0.05）。

2.7復合低聚肽對小鼠NK細胞活性的影響

受試樣品對小鼠NK細胞活性影響的試驗結(jié)果見表10。

由表10可知，與陰性對照組比較，受試樣品各劑量組對小鼠NK細胞活性有增加的趨勢，且高劑量組具有顯著性差異（P＜0.05），表明受試樣品具有提高小鼠NK細胞活性的作用。

表10 復合低聚肽對小鼠NK細胞活性的影響（±SD）Tab le 10　Effect of com pound oligopeptideon activity of NK cells inm ice（±SD）

表10 復合低聚肽對小鼠NK細胞活性的影響（±SD）Tab le 10　Effect of com pound oligopeptideon activity of NK cells inm ice（±SD）

注：*表示與陰性對照組比較，具有顯著性差異（P＜0.05）。

劑量/（g/kg·BW）　動物數(shù)/只　NK細胞活性/%　　活性轉(zhuǎn)換值陰性對照10　18.45±7.97　0.45±0.12 0.4（低）　10　24.37±8.16　0.51±0.11 0.8（中）　10　26.89±6.24　0.54±0.09 2.4（高）　10　30.66±8.89*　0.59±0.10*

3　討論

依據(jù)《保健食品檢驗與評價技術規(guī)范》（2003版）增強免疫力功能的判定標準，在細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞功能、NK細胞活性4方面任兩個方面結(jié)果陽性，可判定該受試樣品具有增強免疫力功能。其中細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞功能分別測定的兩個試驗項目結(jié)果若為陽性，或任一個試驗的兩個劑量組結(jié)果為陽性，可判定該項功能測定結(jié)果為陽性。NK細胞活性測定試驗的一個以上劑量組結(jié)果陽性，可判定NK細胞活性陽性[4]。

本研究不同劑量的復合低聚肽樣品經(jīng)口給予小鼠30 d，對小鼠體重增長無不良影響，對小鼠脾臟體重比值和胸腺體重比值無影響，小鼠的體液免疫功能、單核-巨噬細胞吞噬功能、NK細胞活性試驗結(jié)果均為陽性，根據(jù)上述增強免疫力功能判定標準，可判定復合低聚肽具有增強免疫力保健功能。

肽是機體組織細胞的重要組成部分，是一類具有多種特殊生理功能的物質(zhì)。研究發(fā)現(xiàn)，幾乎所有細胞都受肽類物質(zhì)調(diào)節(jié)，如細胞分化、神經(jīng)激素遞質(zhì)調(diào)節(jié)、免疫調(diào)節(jié)等均與肽密切相關，它具有調(diào)節(jié)機體生理功能和為機體提供營養(yǎng)的雙重功效[5]。由于低聚肽自身獨特的分子結(jié)構(gòu)，其在人體內(nèi)的吸收機制不同于游離氨基酸，與游離氨基酸相比，低聚肽的吸收速度更快，并且其進入血液后可以迅速被機體組織利用[6-7]。本研究所用復合低聚肽樣品由大豆低聚肽和膠原低聚肽組成。據(jù)文獻報道，大豆低聚肽、膠原低聚肽通過促進淋巴細胞轉(zhuǎn)化、提高體液免疫功能、提高巨噬細胞吞噬功能、增加NK細胞活性等方面發(fā)揮調(diào)節(jié)機體免疫的作用[8-10]，這與本研究的試驗結(jié)果基本一致。本研究表明，復合低聚肽在提高小鼠體液免疫功能和單核-巨噬細胞吞噬功能，以及促進NK細胞活性方面具有活性，說明復合低聚肽是多個方面發(fā)揮作用而實現(xiàn)增強免疫力的功能。

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DO I：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.19.051

收稿日期：2015-08-19

作者簡介：尹利端（1979—），男（漢），工程師，碩士，研究方向：功能食品的研究、開發(fā)與產(chǎn)業(yè)化。

Study on Immunity Enhancing Function of Com pound Oligopeptide

YIN Li-duan1，HUANG Jing2，ZHANGHou-sen3，DONGCong-chao1
（1.YantaiNew EraHealth Industry Co.，LTD，Yantai264006，Shandong，China；2.Research Center for Standard and TechnicalRegulations，AQSIQ，Beijing 100028，China；3.Physicsand Chemistry Testing Center of Jiangsu Province，Nanjing 210042，Jiangsu，China）

Abstract：The immunity enhancing function of compound oligopeptide was studied.Compound oligopeptide were consecutively orally given tomice with the doses of 0.4，0.8，2.4 g/kg·BW （comparatively as 5，10，30 times of recommended human daily dosage）for 30 days.The cellular immunity，humoral immunity，mononuclearmacrophage and NK cell activity were respectively determined.The results showed that humoral immune function，mononuclear macrophage function and NK cell activity were all positive，while cellular immunitywasnegative.The final results showed thatcompound oligopeptide could enhance immunity function.

Keywords：compound oligopeptide；enhancing immunity function；functional foods