郝成欣

摘 要：該文采用靜脈注射給藥途徑，研究人參皂苷Rb1在小鼠心臟組織的分布。用等體積的水飽與正丁醇萃取小鼠心臟組織勻漿液，在經(jīng)過減壓干燥之后使用甲醇進(jìn)行溶解，采用高效液相色譜法，測(cè)得預(yù)處理的心臟樣品中的人參皂苷Rb1在心臟組織分布廣泛，滯留時(shí)間長(zhǎng)，5 min達(dá)吸收高峰。720 min后逐漸自體內(nèi)消除，對(duì)其發(fā)揮抗心肌缺血再灌注損傷，減弱血管內(nèi)膜增生程度等藥效提供參考理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：靜脈注射 人參皂苷Rb1 心臟組織分布 高效液相色譜

中圖分類號(hào)：R7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1674-098X（2015）02（c）-0252-02

人參皂苷Rb1是二醇系皂苷，其含量較為豐富，多年來學(xué)者們致力于研究其藥理作用，作用顯著且廣泛。此外，人參皂苷Rb1具有抗心肌缺血再灌注損傷，減弱血管內(nèi)膜增生程度，促智，腦缺血損傷保護(hù)，神經(jīng)損傷保護(hù)，抗肝臟熱缺血再灌注損傷，抗腫瘤，性功能促進(jìn)等多種藥理活性[1-7]。

近年來，對(duì)靜脈注射人參皂苷Rb1在小鼠體內(nèi)藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究文獻(xiàn)較少[8]。楊柳等[9]進(jìn)行人參皂苷Rb1在大鼠尿中排泄的研究采用的是高效液相色譜-飛行時(shí)間串聯(lián)質(zhì)譜。而Tsutomu Odani，Hisayuki Tanizawa，and Yoshio Takino（均為日該研究者）通過采用薄層色譜法監(jiān)測(cè)了人參皂苷Rb1經(jīng)靜脈注射以及口服兩種途徑在大鼠體內(nèi)的分布，發(fā)現(xiàn)其胃腸道吸收率低。

該文將預(yù)處理后的小鼠心臟采用HPLC法測(cè)定其分布[10]，具有分離效能好，分析速度快，靈敏度及特異性高的優(yōu)點(diǎn)，對(duì)人參皂苷Rb1發(fā)揮抗心肌缺血再灌注損傷等藥理作用提供參考依據(jù)，具有廣闊的前景。

1 資料與設(shè)備

1.1 試劑與藥品

甲醇，乙腈是由TEDIA COMPANY.INC公司生產(chǎn)的色譜純?cè)噭患状迹ǚ治黾儯橹貞c沃?？萍加邢薰咎峁?；人參皂苷Rb1對(duì)照品（純度：98%）由上海經(jīng)科化學(xué)科技有限公司提供。

1.2 儀器

SHZ-D（Ш）循環(huán)水式真空泵，Hettich Vniversal 16R低溫冷凍離心機(jī)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，Agilent 1100型分析-半制備液相，F(xiàn)A1204B電子分析天平。

1.3 動(dòng)物

健康小鼠，體重35～40 g，吉林省白城市省所提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件

CenturySILBDSC18柱，50 mm×2.1 mmI.D.，5 ?m粒徑；流動(dòng)相：乙腈：水（28：72）；流速：1.00 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：205 nm；柱溫：室溫。

2.2 給藥方案與樣品采集

選取健康小鼠18只，小鼠體重為35～40g，在做實(shí)驗(yàn)之前并未使用任何藥物。選用普通的飼料進(jìn)行喂養(yǎng)，同時(shí)，飲食和飲水自由。在吉林省白城市白城醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校藥理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行動(dòng)物臨床實(shí)驗(yàn)。注射用濃度為6 mg/mL的人參皂苷Rbl溶液，給藥以8 mg/kg的劑量靜脈注射，與給藥前﹙0 min﹚與給藥后5 min、30 min、60 min、120 min、240 min、720 min，每次3只，處死動(dòng)物，解剖心臟，組織浮血使用0.9%生理鹽水沖去，并用濾紙將吸其干，最后保存在–40 ℃冰箱。

2.3 樣品預(yù)處理

心臟組織勻漿和其處理方法如下。

先對(duì)心臟組織稱重，然后剪碎、研磨，按1 mL/200 mg組織重量用Gilson移液器加入生理鹽水勻漿。用等體積的水飽和正丁醇取勻漿液，萃取3次（水飽和正丁醇配置方法為正丁醇∶水=5：1混合），萃取液經(jīng)85 ℃減壓干燥之后使用1 mL甲醇進(jìn)行溶解，稀釋2～5倍后通過0.22 ?m微孔濾膜后進(jìn)行HPLC檢測(cè)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 色譜條件確定

首先對(duì)于人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)品，精密稱取1.00 mg，使用甲醇定容1 μL，此時(shí)濃度為100?g，然后經(jīng)甲醇稀釋，使其濃度變?yōu)?0?g，取該標(biāo)準(zhǔn)溶液20 mL通過0.22?m微孔濾膜，通過改變HPLC中流動(dòng)相乙腈：水的比率對(duì)標(biāo)準(zhǔn)品適宜的出峰時(shí)間進(jìn)行控制，從而最終確定色譜條件。該研究是采用HPLC的流動(dòng)相∶乙腈∶水（28∶72）；流速∶1.00 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)∶205 nm。這里，人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)品出峰時(shí)間是18.59 min，高度為2.1 mAU。（見表1）

3.2 對(duì)小鼠空白（0 min）心臟行HPLC檢測(cè)

研究發(fā)現(xiàn)，心臟組織中的成分分離都是在4.9 min以內(nèi)，人參皂苷Rb1受到的干擾較小。（見表2）

3.3 將小鼠給藥后5 min、30 min、60 min、120 min、240 min、720 min的心臟組織樣品進(jìn)行HPLC檢測(cè)

每個(gè)時(shí)間點(diǎn)取小鼠3只，靜脈注射人參皂苷Rb1后5 min、30 min、60 min、120 min、240 min、720 min按2.2的方法對(duì)小鼠的心臟組織做處理，各取樣20 ?mL過0.22 ?m微孔濾膜后進(jìn)行HPLC檢測(cè)。將小鼠心臟組織中人參皂苷Rb1檢測(cè)曲線繪制成對(duì)比圖。最高為5 min心臟組織，此時(shí)吸收高度是6.1 mAU，曲線隨時(shí)間推移，驟然下降，30 min吸收高度為3.2 mAU。60 min、120 min、240min吸收高度分別為3.1 mAU、2.8 mAU、2.7 mAU。720 min后，曲線明顯下降，吸收高度為1.1 mAU（見圖1）。

3.4 討論

該研究對(duì)小鼠靜脈注射人參皂苷Rb1，由實(shí)驗(yàn)得心臟組織樣品檢測(cè)曲線圖易知，在靜脈注射后的6個(gè)時(shí)間點(diǎn)，人參皂苷Rb1都有分離，5 min即達(dá)到高峰，之后明顯下降，30 min、60 min、120 min、240 min曲線基本保持水平狀態(tài)，720 min后已明顯下降，逐漸從體內(nèi)消除。其心臟組織藥物濃度特點(diǎn)如下。

5 min心臟組織中Rb1濃度>30 min心臟組織中Rb1濃度>60 min心臟組織中Rb1濃度>120 min心臟組織中Rb1濃度〉240 min心臟組織中Rb1濃度>720 min心臟組織中Rb1濃度。

人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)曲線是根據(jù)實(shí)驗(yàn)確定的色譜條件制定的，其出峰時(shí)間約18.50 min左右，對(duì)小鼠靜脈注射人參皂苷Rb15 min、30 min、60 min、120 min、240 min、720 min后處理的心臟組織樣品進(jìn)行HPLC檢測(cè)，其在18 min左右也得到分離，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，表明該藥物在心臟組織中分布廣泛。

根據(jù)小鼠心臟組織中人參皂苷Rb1檢測(cè)曲線，小鼠靜脈注射后，藥物在心臟組織中分布迅速，濃度高，滯留時(shí)間比較長(zhǎng)，對(duì)人參皂苷Rb1抗心肌缺血再灌注損傷、心肌細(xì)胞損傷保護(hù)、減弱血管內(nèi)膜增生程度等藥效學(xué)研究提供參考理論依據(jù)，具有重要的意義。

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