李鴻飛，張鳳雪，李柯翱，李 巖，田樹革

1新疆醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院，新疆烏魯木齊830000；2新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院；

3新疆奇康哈博維藥有限公司；4新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院；5新疆醫(yī)科大學(xué)中心實驗室

黃精膏中水溶性總糖與多糖的測定*

李鴻飛1，張鳳雪2，李柯翱3，李 巖4△，田樹革5

1新疆醫(yī)科大學(xué)第四附屬醫(yī)院，新疆烏魯木齊830000；2新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院；

3新疆奇康哈博維藥有限公司；4新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院；5新疆醫(yī)科大學(xué)中心實驗室

目的：測定黃精膏中水溶性總糖、多糖含量。方法：采用紫外可見分光光度法，經(jīng)0.2%蒽酮-硫酸溶液顯色測定黃精膏中的總糖、多糖含量。結(jié)果：實驗測得黃精膏中總糖、多糖含量分別為85.63%、31.70%。精密度、回收率實驗結(jié)果理想。結(jié)論：該方法簡便、快速、準確，靈敏度高。

黃精膏；總糖；多糖；含量測定

黃精膏主要由黃精等組成，為棕黃色黏稠的半流體，氣香，味甜。此組方黃精膏具有調(diào)經(jīng)止痛，美容養(yǎng)顏，滋陰補腎，補脾養(yǎng)胃等功效［1-2］。黃精作為傳統(tǒng)中藥，其主要化學(xué)成分為多糖、單糖、低聚糖、甾體皂苷、黃酮類及蒽醌類等化合物［3］。

總糖是單糖、低聚糖、多糖等化合物的總和，其中多糖具有免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、降血糖、抗凝血、抗血栓、提高記憶力等作用［4-5］。

本研究采用蒽酮-硫酸法［6-7］測定黃精膏中水溶性總糖和多糖的含量，為開發(fā)黃精膏提供化學(xué)基礎(chǔ)，同時為進一步研究黃精膏的多種藥理機制提供參考。

1 藥材、試劑與儀器

1.1 藥材 黃精膏(新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院自制)；葡萄糖對照品(天津市天新精細化工開發(fā)中心)。

1.2 試劑 濃硫酸，無水乙醇，蒽酮，乙酸乙酯等試劑均為分析純，實驗用水為自制蒸餾水。

1.3 儀器 GBC 40型紫外可見分光光度計(AUSTRALIAGBCSCIENTIFICEQUIPMENTPTY.LTD.)；玻璃儀器氣流烘干器(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)；HH-S4數(shù)顯恒溫水浴鍋(金壇市醫(yī)療器械廠)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀R-1001N(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)；智能恒溫電熱套(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)；電子天平；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱。

2 方法與結(jié)果

2.1 葡萄糖標準溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖對照品0.01 g，置于100mL容量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(葡萄糖濃度為10-4g/mL)。

2.2 供試品溶液的制備［4］

2.2.1 總糖供試品溶液的制備 精密稱取黃精膏約0.50 g，加水溶解，置250mL的容量瓶中稀釋至刻度線，再從中量取1mL于50mL容量瓶中稀釋至刻度線，搖勻，靜置。再精密量取上述溶液40mL，于100mL圓底燒瓶中，加入2mL濃硫酸，稱定質(zhì)量，90℃水浴回流1小時，冷卻，再稱定質(zhì)量，加水補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10mL，用等體積乙酸乙酯萃取3次，分取水層，即得。

2.2.2 多糖供試品溶液的制備 稱取黃精膏5.055 g，加145mL熱水溶解，過濾，使含醇量達75%，離心15分鐘(4 000 r/min)，用無水乙醇洗滌沉淀2～3次，取沉淀物溶于50mL熱水，取17mL置100mL容量瓶中，溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液。

2.3 測定波長的選擇 精取葡萄糖標準溶液1.0mL置試管中，用蒸餾水補液至3mL，加0.2%蒽酮-硫酸試液5mL，混勻。置冰水浴10分鐘后取出，再放沸水浴中保溫4分鐘［2］。取出，放冷。以3mL水加5mL 0.2%的蒽酮-硫酸試液為空白，用GBC40型分光光度計，于500～700nm波長范圍內(nèi)測定吸收度。結(jié)果在(625±2)nm處有最大吸收，同法測得黃精膏總糖供試液、多糖供試液在(625±2)nm處有最大吸收。

2.4 標準曲線的制備和線性關(guān)系的考察

2.4.1 總糖供試品溶液的標準曲線 精密量取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL對照品溶液，分別置于試管中，加水至3mL，然后緩慢精密加入5mL蒽酮-硫酸試液，搖勻，置于冰中10分鐘，再用熱水浴4分鐘，之后冷卻至常溫，以試劑空白為參比在625 nm處測定吸光度，以吸光度為縱坐標、葡萄糖濃度為橫坐標作圖，得回歸直線方程為Y=0.3856C-0.0068(R2=0.999)；結(jié)果表明葡萄糖在0.005～0.015mg/mL范圍內(nèi)具有較好的線性關(guān)系。

2.4.2 多糖供試品溶液的標準曲線 精密量取0、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL對照品溶液，分別置10mL帶刻度的試管中，再依次加水至3.0mL混勻，沿管壁各加入0.2%蒽酮-硫酸溶液5.0mL，冰浴10分鐘，振搖至綠色，立即置沸水浴中保溫4分鐘，取出后放冷，在625 nm處測定吸收度A。以3.0mL水加入0.2%蒽酮-硫酸溶液5.0mL在625 nm處測定吸收度。以A為縱坐標，C為橫坐標，繪制標準曲線，計算得：A=0.3856C-0.0068；R2=0.9990。

2.5 精密度實驗 分別取總糖供試品溶液及多糖供試品溶液0.8mL，5份，按標準曲線制備方法測定吸光度?？偺荝SD為1.91%，多糖RSD為1.91%，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性考察 分別精密吸取總糖及多糖供試品溶液各1.4mL，分別在0、10、20、30、60分鐘測定。結(jié)果表明總糖供試品溶液及多糖供試品溶液在60分鐘內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.7 加樣回收率 精密吸取已知量的黃精膏干燥樣品粉末0.5 g，平行5份，分別精密添加已知質(zhì)量濃度葡萄糖對照品適量。按總糖、多糖樣品液的制備方法分別制備各樣品溶液，按標準曲線方法測定，計算回收率，結(jié)果總糖、多糖樣品溶液平均回收率為90.02%、99.61%，RSD分別為2.9%、0.937%，見表1—2。

2.8 含量的測定 分別精密吸取總糖供試溶液和多糖供試溶液，按照制備標準曲線步驟測定其吸光度，重復(fù)5次。根據(jù)回歸方程計算溶液濃度，然后計算出總糖、多糖含量，見表3—4。

表1 總糖加樣回收率測定結(jié)果

表2 多糖加樣回收率測定結(jié)果

表3 總糖樣品含量測定結(jié)果

表4 多糖樣品含量測定結(jié)果

3 討論

采用紫外可見分光光度法，經(jīng)0.2%蒽酮-硫酸溶液顯色測定黃精膏中的總糖、多糖含量，結(jié)果測得黃精膏中總糖、多糖含量分別為85.63%、31.7%。精密度、回收率試驗結(jié)果理想。

多糖廣泛存在于自然界，是多種中草藥的有效成分之一，具有多種生物活性，是理想的免疫增強劑，能提高機體免疫系統(tǒng)的功能［8］。目前已有多種多糖物質(zhì)被發(fā)現(xiàn)，多糖的作用機理以及生物功能和結(jié)構(gòu)的關(guān)系研究不斷深入。黃精膏的熱水提取物中有多種具有抗補體活性的多糖，具有多種免疫藥理活性，對造血系統(tǒng)有明顯作用，在治療生殖器皰疹方面具有一定的臨床療效［9-10］，對血糖水平也有一定的影響［11］，對抗腫瘤、抗輻射損傷也顯示出較好的療效。

本實驗方法操作簡便、快速、準確，靈敏度高，為深入認識黃精膏的作用，進一步挖掘黃精膏的臨床價值，對分析黃精膏的有效成分的含量以及測定方法提供了實驗依據(jù)。

［1］ 侯慧.黃精的化學(xué)成分及藥理作用研究探討［J］.黑龍江科技信息，2014(7)：78.

［2］ 郭婕，張國.黃精的現(xiàn)代化學(xué)、藥理研究與臨床應(yīng)用進展［J］.齊魯藥事，2005，24(12)：741-743.

［3］ 龐玉新，趙致，袁媛，等.黃精的化學(xué)成分及藥理作用［J］.山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報，2003，22(6)：547-550.

［4］ 吳笳笛.多糖的作用及其研究進展［J］.沈陽師范大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2008，26(2)：221-223.

［5］ 張峰，張繼國，王麗華，等.黃精多糖對東莨菪堿致小鼠記憶獲得障礙的改善作用［J］.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，16(36)：5410-5412.

［6］ 馬麗耘.蒽酮-硫酸法測定靈芝多糖含量［J］.首都醫(yī)藥，2004，11(2)：51.

［7］ 李利軍，孔紅星，陸丹梅.蒽酮-硫酸法快速測定蔗糖的研究及應(yīng)用［J］.食品工業(yè)科技，2003，24(10)：145-149.

［8］ 鄭永飛.活性多糖的保健功能及其應(yīng)用［J］.糧食與食品工業(yè)，2009，16(4)：22-25.

［9］ 陳金，陳美明，陳琦，等.黃精多糖乳膏治療生殖器皰疹臨床隨機對照實驗［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2004，31(4)：503-504.

［10］辜紅梅，何開澤，蒲薔，等.黃精多糖乳膏治療單純皰疹性豚鼠陰道炎的療效研究［J］.應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報，2003，9(2)：146-149.

［11］王紅玲，張渝侯，洪艷，等.黃精多糖對小鼠血糖水平的影響及機理初探［J］.兒科藥學(xué)，2002，8(1)：14-15.

Detection ofWater-soluble Total Sugarand Polysaccharide in HuangJing Ointment

LIHongfei1,ZHANG Fengxue2,LIKe′ao3,LIYan4△,TIAN Shuge5
1 The Fourth Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University,Urumqi830000,China;
2 TCM College of Xinjiang Medical University;3 Xinjiang QiKang HaBo Uygur Medicine Co.,LTD;
4 Pharmacy College of Xinjiang Medical University;5 Central Laboratory of Xinjiang Medical University

Objective:To detect the contents of water-soluble total sugar and polysaccharide contained in HuangJing ointment.Methods:The contentsof totalsugarand polysaccharide in HuangJing ointmentweremeasured by UV spectrophotometry after HuangJing ointmentcolored by 0.2%anthranone-sulfuric acid solution.Results:The experimentsshowed that the contentsof totalsugarand polysaccharide could reach 85.63%and 31.7%respectively. The accuracy and recovery ratewere perfect.Conclusion:Themethod is simple,rapid,accurate and highly sensitive.

HuangJing ointment;totalsugar;polysaccharide;contentdetermination

R927.2

A

1004-6852(2015)01-0016-03

2014-06-17

烏魯木齊科技計劃項目(編號C121120001)。

李鴻飛(1979—)，男，在讀碩士研究生，主管中藥師。研究方向：藥劑學(xué)。

△通訊作者：李巖(1969—)，女，碩士研究生導(dǎo)師，博士學(xué)位，教授。研究方向：藥物化學(xué)與質(zhì)量標準。