劉旭穎

伴高脂血癥的阿爾茨海默病小鼠模型的構(gòu)建

劉旭穎

目的 構(gòu)建伴高脂血癥的阿爾茨海默病(AD)雙轉(zhuǎn)基因小鼠動物模型。方法 本實驗通過以高脂飲食喂養(yǎng)轉(zhuǎn)基因小鼠建立了不同梯度血膽固醇濃度的APPSWE/PS1dE9雙轉(zhuǎn)基因小鼠模型：①高脂陽性辛伐他汀組；②高脂陰性組；③陽性辛伐他汀組；④陽性組；⑤高脂陽性組；⑥陰性對照組。結(jié)果 高脂飲食組膽固醇濃度超過正常飲食組, 兩組比較差異有統(tǒng)計學意義。高脂陽性組與陰性組和陽性組比較血總膽固醇濃度有明顯升高, 差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。高脂陽性辛伐他汀組雖然與高脂陽性組相比有明顯降低, 但與陰性組相比仍然升高, 差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結(jié)論 為研究高脂飲食與AD之間的關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。

阿爾茨海默??；高脂血癥；雙轉(zhuǎn)基因

AD是老年人中的常見病、多發(fā)病, 在老年前期和老年期發(fā)病。是老年人中最常見的癡呆類型, 大概為老年癡呆的70%左右。我國目前約有AD患者800萬。AD已被公認為社會和醫(yī)學的世界性難題, 對AD的病因及發(fā)病機制研究越來越多, 而且目前對于AD來說尚無預(yù)防及治療措施。近年來有頗多證據(jù)證實高脂飲食是AD發(fā)病的重要因素。臨床試驗亦顯示患高脂血癥的患者并發(fā)AD的幾率較未患高脂血癥高［1］。本實驗應(yīng)用的雙轉(zhuǎn)基因小鼠模型為表達人突變的早老素基因PS、人淀粉樣前體蛋白基因突變的融合體。此模型雙轉(zhuǎn)基因小鼠, 在4 個月時即形成β淀粉樣板塊, 并通過水迷宮試驗證實已有行為學改變, 是研究 AD的良好模型。本實驗通過以高脂飲食喂養(yǎng)轉(zhuǎn)基因小鼠建立了不同梯度血膽固醇濃度的雙轉(zhuǎn)基因小鼠模型：①高脂陽性辛伐他汀組、②高脂陰性組；③陽性辛伐他汀組；④陽性組；⑤高脂陽性組；⑥陰性對照組。實驗小鼠分別給予正常飲食或高脂高膽固醇飲食喂養(yǎng)到6個月, 此月齡后繼續(xù)按原飲食喂養(yǎng)同時給予辛伐他汀或安慰劑灌胃3個月, 使各組實驗動物出現(xiàn)不同梯度血膽固醇濃度。正常小鼠單獨喂養(yǎng)辛伐他汀組表現(xiàn)為低膽固醇血癥, 高脂飲食加用安慰劑組表現(xiàn)為高膽固醇血癥, 給予正常飲食及安慰劑一組和高脂飲食加用辛伐他汀的轉(zhuǎn)基因小鼠為正常血膽固醇水平。

1 材料與方法

1.1 實驗材料 辛伐他汀由美國默沙東公司提供。小鼠模型購自南京大學動物中心, 型號為B6C3-Tg85Dbo/J。小鼠飲食為基礎(chǔ)的清潔級飼料以及自制的高脂、高膽固醇飲食。高膽固醇、高脂飼料的配方為1%膽固醇, 0.02%牛膽酸鈉, 10%自制豬油, 10%蛋黃粉及78.98%基礎(chǔ)飼料。血膽固醇檢測試劑盒。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗設(shè)計及動物分組 6個月齡12只同窩陰性鼠,分為：①高脂陰性組； ②陰性對照組；24只雙轉(zhuǎn)基因陽性小鼠隨機分為四組(每組6只)；③高脂陽性組；④高脂陽性辛伐他汀組；⑤陽性辛伐他汀組；⑥陽性組。高脂組給予高膽固醇、高脂飲食；陰性組予基礎(chǔ)飼料首先喂養(yǎng)6個月。隨后辛伐他汀組后給予辛伐他汀每日按每公斤體重予50 mg灌胃。安慰劑組以安慰劑生理鹽水灌胃3個月, 使各組實驗小鼠出現(xiàn)不同血膽固濃度梯度。

1.2.2 測取各組小鼠總膽固醇濃度 剪小鼠尾部取鼠血量20 μl左右, 離心后取上層血漿10 μl。取RⅡ10 ml溶解1瓶RⅠ, 10 min后混勻為工作液?；靹蚝笥谑覝仂o置6 min, 通過紫外分光光度計500nm測定各實驗管吸光度。以試劑空白管校零后讀取A標準及A樣本。以公式C=A樣本/A標準×C標準計算膽固醇濃度。C標準=211.5 mg/dl。

1.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)。計量資料以均數(shù)±標準差()表示, 采用t檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組小鼠開始實驗時月齡為6個月, 陰性小鼠12只, 雙轉(zhuǎn)基因陽性小鼠24只。根據(jù)體重分兩組, 分別予基礎(chǔ)飲食(正常飲食組)和高脂飲食(高脂飲食組)喂養(yǎng)4個月。4個月以后,測定各組的膽固醇濃度, 高脂飲食組(129.77±28.05)mg/dl, 正常飲食組(55.45±12.51)mg/dl。高脂飲食組超過正常飲食組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。

2.2 灌胃結(jié)束后再次測血膽固醇濃度 在灌胃前后安慰劑組與辛伐他汀組相比, 血總膽固醇濃度比較, 差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。在接受安慰劑及辛伐他汀灌胃后, 陰性組和陽性組血總膽固醇濃度水平差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。正常飲食并給藥組與陰性組和陽性組相比較血膽固醇濃度明顯降低, 差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。高脂陽性組與陰性組和陽性組比較血總膽固醇濃度有明顯升高, 差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。高脂陽性辛伐他汀組雖然與高脂陽性組相比有明顯降低, 但與陰性組相比仍然升高, 差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 給藥前后各組血膽固醇比較(, mg/d, ln=6)

表1 給藥前后各組血膽固醇比較(, mg/d, ln=6)

注：與陰性組比較,aP＜0.05；與陰性、陽性組比較,bP＜0.05

組別 例數(shù) 給藥前 給藥結(jié)束陰性組 6 46.83±7.46 47.13±8.47高脂陰性組 6 125.30±20.00 123.48±20.03陽性組 6 66.83±6.41 64.90±3.27陽性辛伐他汀組 6 62.63±7.40 42.41±7.33高脂陽性組 6 133.15±32.30 130.61±23.44b高脂陽性辛伐他汀組 6 136.83±6.41 69.88±6.90a

3 討論

阿爾茨海默病(AD)的組織病理學上典型改變?yōu)榈矸蹣影邏K沉積。有關(guān)AD的發(fā)病機制, 有很多學說, 其中β-淀粉樣蛋白沉積假說認為淀粉樣蛋白的生成與清除失衡是導致神經(jīng)元變性和癡呆發(fā)生的起始事件。此種假說已成為影響最廣的理論之一［1］。目前, 許多學者通過流行病學調(diào)查及體內(nèi)體外實驗研究證實高膽固醇血癥、血脂代謝紊亂與阿爾茨海默病有著密切的聯(lián)系。認為高膽固醇高脂飲食是AD的危險因素, 并在動物實驗中證實了高脂、高膽固醇飲食可以增加淀粉樣板塊沉積［1,2］。亦有研究表明；他汀類調(diào)脂藥可以降低 AD發(fā)病率, 減少Aβ沉積：其中辛伐他汀對AD模型的有保護作用［3］； 臨床研究也發(fā)現(xiàn)使用他汀類降脂藥能明顯降低AD的發(fā)病率；本實驗通過建立五組動物不同的血膽固醇濃度梯度, 為探討高脂、高膽固醇對Aβ沉積的影響奠定了基礎(chǔ)。

［1］ 楊曉平.不同劑量辛伐他汀治療高脂血癥的臨床療效觀察.中國醫(yī)學創(chuàng)新, 2014, 11(1):77-78.

［2］ 賈維敏, 張志.依折麥布聯(lián)合辛伐他汀治療2型糖尿病合并高脂血癥的臨床觀察.中國醫(yī)學創(chuàng)新, 2014, 11(25):65-67.

［3］ 宋紅杰, 王振東, 唐建榮.32例高脂血癥性急性胰腺炎的臨床特征和治療分析.中國醫(yī)學創(chuàng)新, 2014, 11(25):120-122.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.28.207

2015-06-08］

121000 遼寧醫(yī)學院附屬第三醫(yī)院