顧文松，Li-Wen Hsu（.鎮(zhèn)江天和生物技術(shù)有限公司，江蘇　揚(yáng)中　4；.印尼Satwa Boga Sampurna研究所，印尼　雅加達(dá)　405）

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不同工藝仙人掌提取物對(duì)綠殼蛋雞生產(chǎn)性能及免疫指標(biāo)的影響

顧文松1，Li-Wen Hsu2
（1.鎮(zhèn)江天和生物技術(shù)有限公司，江蘇揚(yáng)中212214；2.印尼Satwa Boga Sampurna研究所，印尼雅加達(dá)40115）

摘要：為研究不同工藝仙人掌提取物對(duì)綠殼蛋雞生產(chǎn)性能的影響，選取40周齡綠殼蛋雞7 260只，隨機(jī)分為3組（處理Ⅰ組、處理Ⅱ組和對(duì)照組）。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，處理Ⅰ組在基礎(chǔ)飼糧中添加乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物400 mg·kg(-1)，處理Ⅱ組在基礎(chǔ)飼糧中添加超臨界萃取的仙人掌提取物400 mg·kg(-1)，結(jié)果表明，添加不同工藝仙人掌提取物的處理組在產(chǎn)蛋率、平均蛋重、破殼率和綠殼蛋雞外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率與對(duì)照組相比均得到顯著改善（P<0.05），處理Ⅰ組和處理Ⅱ組的料蛋比與對(duì)照組相比差異不顯著（P>0.05）；處理Ⅰ組和處理Ⅱ組在產(chǎn)蛋率、平均蛋重、破殼蛋和綠殼蛋雞外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率上差異不顯著（P>0.05）。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，不同工藝仙人掌提取物飼喂綠殼蛋雞能夠改善蛋品質(zhì)。

關(guān)鍵詞：仙人掌提取物；綠殼蛋雞；產(chǎn)蛋率；蛋重；T淋巴細(xì)胞

在畜牧生產(chǎn)中，抗生素的長(zhǎng)期使用導(dǎo)致有害細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性、動(dòng)物免疫力下降、畜禽內(nèi)源性感染和二重感染，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。與此同時(shí)抗生素在畜禽產(chǎn)品中殘留，也嚴(yán)重威脅到人類(lèi)的健康。因此，具有無(wú)毒副作用，無(wú)藥物殘留等優(yōu)點(diǎn)的飼用抗生素替代品備受關(guān)注。中草藥與抗生素相比，具有天然性、無(wú)抗藥性、無(wú)殘留等特點(diǎn)，因此越來(lái)越受人們的重視。乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物具有預(yù)防動(dòng)物疾病、提高免疫力、提高動(dòng)物生產(chǎn)性能等功效，且無(wú)毒負(fù)作用[1-3]。但由于工藝復(fù)雜，不易于大量生產(chǎn)，限制其使用，而超臨界萃取工藝則便于大批量生產(chǎn)。本試驗(yàn)以40周齡綠殼蛋雞為試驗(yàn)對(duì)象，觀察不同工藝仙人掌提取物對(duì)綠殼蛋雞生產(chǎn)性能的影響，為仙人掌提取物替代抗生素添加劑提供重要依據(jù)，探索出便于大量生產(chǎn)的仙人掌提取工藝。

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物

40周齡綠殼蛋雞7 260只，由江蘇揚(yáng)中東風(fēng)養(yǎng)禽場(chǎng)提供。

1.2試驗(yàn)飼糧

蛋雞基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1　飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平DM

1.3藥物與試劑

1.3.1試驗(yàn)藥物

乙醇提取配合乙醚萃取仙人掌提取物：采用新鮮仙人掌通過(guò)乙醇提取和乙醚萃取技術(shù)制取的干粉；超臨界萃取仙人掌提取物：采用新鮮仙人掌通過(guò)30 MPa、45℃下用超臨界CO2提取的仙人掌干粉[3]。

1.3.2試驗(yàn)試劑

青霉素鈉為哈藥集團(tuán)制藥總廠產(chǎn)品；硫酸鏈霉素為華北制藥股份有限公司產(chǎn)品；RPMI-1640培養(yǎng)液為Gibco公司產(chǎn)品；新生牛血清為杭州四季青生物材料有限公司產(chǎn)品；伴刀豆球蛋白（ConA）、臺(tái)盼藍(lán)為Sigma公司分裝產(chǎn)品；淋巴細(xì)胞分離液為上海華精生物高科技有限公司產(chǎn)品；二甲基亞楓為上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司產(chǎn)品；PBS稀釋液為鎮(zhèn)江天和生物技術(shù)有限公司實(shí)驗(yàn)室配制。

1.4試驗(yàn)方法

1.4.1動(dòng)物分組及飼養(yǎng)

將綠殼蛋雞7 260只隨機(jī)分為3組，處理Ⅰ組為綠殼蛋雞2 810只，在基礎(chǔ)飼糧中添加乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物400 mg·kg-1；處理Ⅱ組為綠殼蛋雞2 427只，在基礎(chǔ)飼糧中添加超臨界萃取的仙人掌提取物400 mg·kg-1；對(duì)照組為綠殼蛋雞2 023只，飼喂基礎(chǔ)飼糧。試驗(yàn)前雞舍進(jìn)行全面清洗、消毒，保證自動(dòng)飲水器正常，自由飲水，采用16 h光照，按繼定免疫程序進(jìn)行蛋雞群的免疫，試驗(yàn)期由專人飼養(yǎng)管理，蛋雞飼喂為2次·d-1（9: 00、16: 00）。綠殼蛋雞從40周齡開(kāi)始進(jìn)行正式試驗(yàn)，1個(gè)試驗(yàn)周期為7 d，共4周期28 d。

1.4.2產(chǎn)蛋性能測(cè)定

每天記錄產(chǎn)蛋數(shù)、破殼蛋、總蛋重，每周統(tǒng)計(jì)一次采食量，計(jì)算日均產(chǎn)蛋率、平均蛋重、采食量及料蛋比。

1.4.3雞外周血T淋巴細(xì)胞活性情況測(cè)定

1.4.3.1外周血T淋巴細(xì)胞的制備

于添飼后0、7、14、28 d從3組試驗(yàn)雞群中分別隨機(jī)抽取雞10只，通過(guò)翅下靜脈采集檸檬酸三鈉抗凝血2 mL，制備淋巴細(xì)胞。用MI-1640培養(yǎng)液（含有青鏈霉素100單位·mL-1、新生牛血清100 mL·L-1）調(diào)整細(xì)胞密度至1×106個(gè)·mL-1后，轉(zhuǎn)入細(xì)胞培養(yǎng)板于37.5℃、體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。

1.4.3.2外周血T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)

待上述細(xì)胞生長(zhǎng)至單層后，去除培養(yǎng)上清液，再用新鮮培養(yǎng)液懸浮細(xì)胞，加入ConA（終濃度10 mg·L-1）后，將細(xì)胞放入37.5℃、體積分?jǐn)?shù)為5% 的CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h。取出細(xì)胞板，每孔加入同體積的MTT液（以RPMI-1640培養(yǎng)液配置），繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，棄去培養(yǎng)孔中的上清液，每孔中加入DMSO 100 uL，充分混勻，于室溫避光靜置15 min后，測(cè)定570 nm波長(zhǎng)的吸光值（OD570nm），并計(jì)算平均值，作為T(mén)淋巴細(xì)胞增殖的指標(biāo)。

2　結(jié)果與分析

2.1對(duì)綠殼蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

不同工藝仙人掌提取物對(duì)綠殼蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響見(jiàn)表2。

由表2可知，第1周各組間產(chǎn)蛋率差異不顯著（P>0.05）。由于試驗(yàn)選擇的是40周齡的綠殼蛋雞，隨著周齡的增加，產(chǎn)蛋率呈逐漸下降的趨勢(shì)，在試驗(yàn)第4周，處理Ⅰ組與處理Ⅱ組相比差異不顯著（P>0.05），但處理Ⅰ、Ⅱ組與對(duì)照組相比差異顯著（P<0.05）。第1周各組間平均蛋重差異不顯著（P>0.05），隨著試驗(yàn)時(shí)間的增加，各處理組平均蛋重沒(méi)有明顯變化，而對(duì)照組隨著周齡的增加平均蛋重有所下降，在試驗(yàn)第4周處理Ⅰ組與處理Ⅱ組組間差異不顯著（P>0.05），但處理Ⅰ、Ⅱ組與對(duì)照組相比差異顯著（P<0.05）。料蛋比在整個(gè)試驗(yàn)期間無(wú)顯著變化（P>0.05），可能和試驗(yàn)時(shí)間較短有關(guān)。

2.2對(duì)綠殼蛋雞所產(chǎn)破殼蛋的影響

不同工藝仙人掌提取物對(duì)綠殼蛋雞所產(chǎn)破殼蛋的影響見(jiàn)表3。

表2　不同工藝仙人掌提取物對(duì)綠殼蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

表3　不同工藝仙人掌提取物對(duì)綠殼蛋雞所產(chǎn)破殼蛋的影響

由表3可知，試驗(yàn)第1周各組破蛋率為2.15%～ 2.75%，由于試驗(yàn)選擇的是40周齡的綠殼蛋雞，隨著試驗(yàn)周齡的增加，對(duì)照組破殼率沒(méi)有顯著變化（P>0.05），而各處理組破殼率呈逐漸下降的趨勢(shì)，試驗(yàn)第4周各處理組間差異不顯著（P>0.05）。

2.3對(duì)綠殼蛋雞外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響

不同工藝仙人掌提取物對(duì)綠殼蛋雞外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率見(jiàn)表4。

由表4可知，試驗(yàn)第0天蛋雞外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率為0.127～0.131，各組間差異不顯著（P> 0.05），第7天處理Ⅰ、Ⅱ組分別比對(duì)照組提高了17.97%和27.34%，差異顯著（P<0.05），但處理Ⅰ組與處理Ⅱ組間差異不顯著（P>0.05）。隨著試驗(yàn)時(shí)間增加，處理Ⅰ、Ⅱ組的蛋雞外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率上升，而對(duì)照組沒(méi)有明顯變化。試驗(yàn)28 d后處理Ⅰ、Ⅱ組與對(duì)照組相比有顯著提高（P<0.05），分別提高了51.94%和54.26%，但處理Ⅰ組與處理Ⅱ組間差異不顯著（P>0.05）。

表4　不同工藝仙人掌提取物對(duì)綠殼蛋雞外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率

3　討　論

3.1對(duì)綠殼蛋雞生產(chǎn)性能的影響

仙人掌除含有各種氨基酸、可溶性糖、有機(jī)酸、維生素和各種無(wú)機(jī)元素外，還含有豐富的生理活性物質(zhì)如異鼠李素和槲皮素的葡萄糖苷、異槲皮苷和三萜化合物，這些物質(zhì)能夠補(bǔ)充動(dòng)物的生理需求，提高動(dòng)物的生產(chǎn)性能[5-6]。本試驗(yàn)表明，不同工藝仙人掌提取物有提高產(chǎn)蛋率和增加蛋重的作用，在試驗(yàn)第4周，對(duì)照組產(chǎn)蛋率比乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物組下降3.93%，兩組間差異顯著（P<0.05）；比超臨界萃取仙人掌提取物組下降5.56%，兩組間差異顯著（P<0.05），但兩處理組間差異不顯著（P>0.05）；試驗(yàn)第4周平均蛋重為53.46～50.00，處理Ⅰ、Ⅱ組與對(duì)照相比組間差異顯著（P<0.05），對(duì)照組比不同工藝仙人掌提取物組下降6.36%～6.92%，但兩處理組間差異不顯著（P> 0.05）。

3.2對(duì)綠殼蛋雞所產(chǎn)破殼蛋的影響

添飼仙人掌提取物組破殼蛋率有所下降，而對(duì)照組破殼蛋率呈明顯上升趨勢(shì)。

3.3對(duì)綠殼蛋雞外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的影響

仙人掌提取物中含有多種植物多糖及其他有益因子，誘導(dǎo)體內(nèi)淋巴細(xì)胞的增殖和活化，可以增強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)發(fā)揮免疫應(yīng)答[7]。臨床主要以外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率為衡量標(biāo)準(zhǔn)，T淋巴細(xì)胞在受到有絲分裂原或抗原刺激時(shí)可發(fā)生增殖和分化，但對(duì)ConA比較敏感，利用這一特性將T細(xì)胞在體外經(jīng)ConA刺激，發(fā)生一系列增殖變化，轉(zhuǎn)化為淋巴母細(xì)胞[8]。轉(zhuǎn)化率高低可反映機(jī)體的免疫功能狀態(tài)。本試驗(yàn)結(jié)果表明，仙人掌提取物作為飼料添加劑添飼0、7、14、28 d后，添飼組蛋雞T細(xì)胞對(duì)ConA的增殖效應(yīng)顯著提高（P<0.05），表明機(jī)體的免疫水平在添飼期內(nèi)得到有效提升，并維持在高水平，超臨界萃取和乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物有同等的效果。

4　結(jié)論

試驗(yàn)結(jié)果表明，在基礎(chǔ)日糧中添加不同工藝仙人掌提取物400 mg·kg-1，可提高綠殼蛋雞產(chǎn)蛋率，對(duì)綠殼蛋雞外周血T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率的提高也有顯著的作用，并可在一定程度上改善蛋雞健康狀況。超臨界萃取和乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物有同等的效果。

[參考文獻(xiàn)]

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Effect of Different Techniques of the Cactus PE on the Production Performance and Immune Parameters of Blue-shell Chicken

GU Wensong1, HSU Liwen2
（1. Zhenjiang Tianhe Bio-technology Co., Ltd., Yangzhong 212214, Jiangsu China; 2. Satwa Boga Sampurna research Institute, Jakarta 40115, Indonesia）

Abstract:In order to study effect of different techniques of the cactus PE on the production performance of chick?en, seven thousand two hundred and sixty chickens (aged 40 weeks) were randomly divided into 3 groups (treatment groupⅠ,Ⅱand the control group). The control group was fed the basal diet；groupⅠwas fed 400 mg·kg(-1)the cactus PE by alcohol extraction and ether extraction which was added into basal diet；groupⅡwas fed 400 mg·kg(-1)the cac?tus PE by supercritical fluid extraction which was added into basal diet. The results showed that laying rate, average egg weight, shell-breaking rate and chicken peripheral blood T-lymphocytes in different techniques of treated group have significantly higher than the control group(P<0.05), feed egg ratio in groupⅠandⅡwere not significant com?pared with the control group(P>0.05); laying rate, average egg weight, shell-breaking rate and chicken peripheral blood T-lymphocytes conversion rate were not significantly different in groupⅠcompared with groupⅡ(P>0.05). The test also found that egg quality can be improvedindifferent techniques of the cactus PE.

Key words:cactus PE; Blue-shell chicken; laying rate; egg weight; T- lymphocyte

作者簡(jiǎn)介：顧文松（1980-），男，江蘇揚(yáng)中人，碩士，主要從事草藥對(duì)畜禽疾病的防控和飼料添加劑的研制。

基金項(xiàng)目：鎮(zhèn)江市科技支撐項(xiàng)目（NY2012007）

收稿日期：2015-01-22

中圖分類(lèi)號(hào)：S816.7；S831

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-0084（2015）05-0006-04