度長(zhǎng)海 曹書(shū)芬 張麗 國(guó)宏莉

青春期卵巢腫瘤術(shù)中冰凍切片方法探討

度長(zhǎng)海 曹書(shū)芬 張麗 國(guó)宏莉

目的 探討快速、準(zhǔn)確地對(duì)術(shù)中卵巢腫瘤進(jìn)行好的切片技巧。方法 采用冰凍切片對(duì)卵巢腫瘤進(jìn)行快速制片。結(jié)果 冰凍切片質(zhì)量?jī)?yōu)良、鏡下結(jié)構(gòu)、細(xì)胞形態(tài)清晰、細(xì)胞核、細(xì)胞漿染色更佳。結(jié)論 快速優(yōu)良冰凍切片對(duì)卵巢腫瘤術(shù)中病理診斷速度及準(zhǔn)確性具有重要作用。

冰凍切片術(shù)；制片方法；卵巢腫瘤

WHO定義青春期為10～19歲, 青春期卵巢腫瘤發(fā)病率相對(duì)成年人低, 但其惡性率較成人高, 其病理類型與成人相比具有其特殊性及復(fù)雜性。因?yàn)榍啻浩谏倥苌俣ㄆ隗w檢,早期缺乏特異性臨床表現(xiàn), 加之年齡的特殊性, 青春期卵巢腫瘤的診治常常被忽視, 誤診率高。青少年正處在第二性征發(fā)育的重要階段, 正確及時(shí)地對(duì)青春期卵巢腫瘤患者做出診斷和處理, 對(duì)于保留患者的卵巢功能、生育功能, 減少并發(fā)癥及改善生活質(zhì)量都尤為重要［1］。本文對(duì)本院收治的青春期卵巢腫瘤患者的快速冰凍切片操作技巧進(jìn)行回顧性分析以期提高生育年齡段卵巢惡性腫瘤術(shù)中冰凍取材和診斷水平?，F(xiàn)將具體方法報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 選取2011～2013年間本院婦產(chǎn)科住院患者, 取材時(shí)多所見(jiàn)附件區(qū)見(jiàn)灰紅灰黃包塊10～14 cm大小, 切面呈囊實(shí)性, 囊內(nèi)含黏液、實(shí)性區(qū)多為黃色, 少數(shù)伴出血壞死, 部分患者上附輸卵管, 有囊泡, 內(nèi)含清亮液。

1.2 方法

1.2.1 準(zhǔn)備 在切片前, 提前將冷凍切片機(jī)(德國(guó)生產(chǎn)Leica-CM1950)的溫度降到所設(shè)定的溫度, 卵巢組織冷凍溫度以-24℃為宜, 調(diào)節(jié)好切片刀與組織的角度30～50°較適合。

1.2.2 取材 送檢組織間隔0.2～0.5 cm切開(kāi)觀察。取材組織比常規(guī)稍大, 2 cm×2 cm×0.5 cm大小為宜。

1.2.3 速凍 將取好的組織迅速放在冷凍臺(tái)上, 等到膠水呈乳白色, 將凍錘壓在組織上約30 s。

1.2.4 制片 冷凍切片機(jī)刻度調(diào)到20 μm, 先粗切直到暴露組織最大面后, 再將刻度調(diào)到4.5 μm應(yīng)盡可能將的最大面裱貼在玻片上, 立即用AFF固定液固定。

1.2.5 染色、封片 將固定好的組織放入預(yù)先加熱過(guò)的蘇木精中染色1 min 左右, 依次0.5%鹽酸酒精分化、溫水返藍(lán)、染伊紅、梯度乙醇脫水、封固。

2 結(jié)果

光鏡下：制作出的卵巢包塊冷凍切片完整、無(wú)皺褶。見(jiàn)圖1。鏡下見(jiàn)實(shí)性結(jié)構(gòu)核大, 核仁突出胞核染色清晰, 扁平、立方細(xì)胞形成大小不等的囊, 其間隔以致密的梭形細(xì)胞間質(zhì)或疏松的黏液樣間質(zhì)。術(shù)中冰凍診斷：(卵巢包塊)惡性腫瘤,分類待常規(guī)病理。

圖1 冰凍切片胞核染色清晰, 胞質(zhì)鮮明圖

圖2 常規(guī)石蠟切片圖(與冰凍形成鮮明對(duì)比)

分析此類卵巢包塊冰凍及石蠟切片, 見(jiàn)圖2。作者發(fā)現(xiàn)冰凍切片在以上各結(jié)構(gòu)中均可見(jiàn)數(shù)量不等的嗜酸性玻璃樣點(diǎn)滴, 但并不是單獨(dú)一個(gè)卵巢生殖細(xì)胞腫瘤所特有的, 因?yàn)楹芏喾只畹膼盒阅[瘤都能見(jiàn)到細(xì)胞的不典型性使得無(wú)法明確報(bào)告, 常規(guī)石蠟連續(xù)切片后出現(xiàn)腫瘤結(jié)構(gòu)清晰明確。

3 討論

好的冰凍切片術(shù)前準(zhǔn)備需充分、恰當(dāng)。如冷凍切片機(jī)長(zhǎng)時(shí)間開(kāi)機(jī)后機(jī)內(nèi)會(huì)形成冰霜, 積累過(guò)多可導(dǎo)致切片跳刀, 這時(shí)可用吹風(fēng)機(jī)快速將冰霜融化, 可自然干燥。因卵巢組織比較疏松, 囊區(qū)內(nèi)黏液等原因, 當(dāng)冷凍切片機(jī)溫度設(shè)置過(guò)高導(dǎo)致組織外硬內(nèi)軟, 切片時(shí)組織易粘在防卷板上, 易皺折, 切片不完整。切片刀與組織塊之間要調(diào)整到最適合的角度, 以30～50°適宜。準(zhǔn)備新的一次性切片刀, 可隨時(shí)更換使用。

總體來(lái)說(shuō)卵巢冷凍切片制作并不難, 但病灶的規(guī)范化取材很關(guān)鍵［3］。進(jìn)行冰凍取材的醫(yī)生必須由有一定診斷經(jīng)驗(yàn)的醫(yī)師進(jìn)行。在接到冰凍申請(qǐng)單后, 病理醫(yī)生應(yīng)該及時(shí)了解患者術(shù)前各項(xiàng)檢查, 尤其是影像學(xué)檢查結(jié)果, 以便在冰凍取材時(shí)做到有的放矢。對(duì)于臨時(shí)術(shù)中冰凍申請(qǐng)的患者, 也應(yīng)該及時(shí)與手術(shù)醫(yī)師或家屬聯(lián)系了解基本病情。標(biāo)本取材時(shí), 首先要對(duì)大體標(biāo)本有一個(gè)整體認(rèn)識(shí), 仔細(xì)觀察囊, 實(shí)區(qū)情況, 取材的常規(guī)組織切面厚度, 書(shū)頁(yè)狀剖開(kāi)后仔細(xì)觀察切面情況,顏色、質(zhì)地, 并結(jié)合觸摸, 質(zhì)硬區(qū)域及囊區(qū)交界部分都應(yīng)該作為重點(diǎn)取材部位;尤其卵巢交界性腫瘤是一種低度潛在惡性的卵巢腫瘤, 占卵巢上皮性瘤的10%～15%。好發(fā)于育齡期婦女［2］。取材的同時(shí)還要注意保持取材器械的干燥, 注意不要讓送檢標(biāo)本上帶上過(guò)多水分, 以免帶水過(guò)多而使切片產(chǎn)生空洞、冰晶等現(xiàn)象, 導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)移位造成誤診。提高制片質(zhì)量良好的冰凍切片可以提高診斷的準(zhǔn)確率和診斷速度。速凍是冷凍切片好壞的關(guān)鍵, 這樣能減少組織內(nèi)冰晶的產(chǎn)生,同時(shí)冰凍機(jī)箱溫度應(yīng)該恒定, 一般在-18℃左右為宜。冰凍切片要求切片要完整, 薄厚適當(dāng), 不要有褶皺、氣泡等現(xiàn)象,染片要清晰, 這樣才會(huì)減少診斷的風(fēng)險(xiǎn)。在冰凍切片的診斷結(jié)果后進(jìn)行術(shù)后石蠟切片診斷的必要性, 多進(jìn)行對(duì)比, 以提高病理診斷水平。對(duì)術(shù)中冰凍病理診斷的確診率, 分析誤診的原因及減少誤診率, 術(shù)中冰凍切片病理診斷是術(shù)中確定病變性質(zhì)的有效方法, 對(duì)術(shù)中選擇適當(dāng)?shù)氖中g(shù)方案有重要的影響［4］。可見(jiàn)快速、準(zhǔn)確地對(duì)術(shù)中卵巢腫瘤進(jìn)行好的切片, 掌握技巧的必要性。

［1］ 朱曉靜.青春期卵巢腫瘤臨床病理特點(diǎn)及診治分析.鄭州大學(xué), 2011.

［2］ 郄明蓉, 綦小蓉.卵巢交界性腫瘤的診治進(jìn)展.中華婦幼臨床醫(yī)學(xué)雜志(電子版), 2012(4):418-421.

［3］ 文登虎, 楊月紅, 劉杰.甲狀腺微小癌術(shù)中冷凍切片的體會(huì).臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志, 2013, 29(11):1263.

［4］ 李靜, 孫保存, 劉增輝, 等.2839例術(shù)中冰凍切片診斷與術(shù)后石蠟切片診斷的對(duì)比研究.天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2013(6): 471-473.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.01.172

2014-10-11］

442000 湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院病理科(度長(zhǎng)海曹書(shū)芬 張麗)；病理學(xué)教研室(國(guó)宏莉)