陳 苑，宋粉云

（1.廣東省中醫(yī)院，廣東 廣州 510120； 2.廣東藥學(xué)院藥科學(xué)院，廣東 廣州 510006）

蘭索拉唑是繼奧美拉唑后研發(fā)的第2個質(zhì)子泵抑制劑，臨床主要用于胃潰瘍、十二指腸潰瘍、反流性食管炎等[1－3]，具有抑酸作用強而持久、癥狀消失快、潰瘍愈合率高、生物利用度高和起效快等優(yōu)點，臨床已廣泛使用[4－5]。但蘭索拉唑及其制劑非常不穩(wěn)定，在生產(chǎn)、貯存過程中都有可能會產(chǎn)生氧化物、磺酰化物等雜質(zhì)[6－7]。2010 年版《中國藥典·第一增補本》（以下簡稱 ChP2010）[8]、35 版《美國藥典》（以下簡稱 USP35）、7.0 版《歐洲藥典》（以下簡稱EP7.0）均收載了蘭索拉唑的有關(guān)物質(zhì)檢測方法，但檢測方法及控制限度各不相同，特別是ChP2010并未對已知雜質(zhì)進行控制，而且控制的限度也遠低于歐美藥典。針對國內(nèi)蘭索拉唑腸溶片的質(zhì)量標準落后于歐美相關(guān)標準的情況，筆者對蘭索拉唑腸溶片的有關(guān)物質(zhì)檢測方法重新進行了比較研究，并建立了更科學(xué)可靠的有關(guān)物質(zhì)測定方法?，F(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

Waters 2695型高效液相色譜儀，Waters 2489型紫外檢測器，Waters 2996型PDA檢測器，EMPOWER工作站；賽多利斯電子分析天平；乙腈、三乙胺為色譜純，磷酸為分析純，水為超純水；蘭索拉唑?qū)φ掌罚ㄖ袊称匪幤窓z定研究院，批號為100709－201103，含量為 99.7%）；蘭索拉唑 EP雜質(zhì) A對照品（批號為130328，含量為 96.5%），蘭索拉唑 EP雜質(zhì) B對照品（批號為130322，含量為 99.5%），蘭索拉唑 EP雜質(zhì) C對照品（批號為103577－40－8，含量為 97.9%），蘭索拉唑 EP雜質(zhì) D 對照品（批號為110503，含量為97.0%），蘭索拉唑EP雜質(zhì) E對照品（加拿大 MOLCAN公司，批號為 120619，含量為98.9%），蘭索拉唑 EP雜質(zhì) F對照品（批號為 130411，含量為 98.8%），均為加拿大MOLCAN公司產(chǎn)品；蘭索拉唑（A廠，批號為130901；B廠，批號為140101）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：Waters Symmetry Shield C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）及 Kromasil C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相：ChP2010 為甲醇－水－三乙胺－磷酸[500∶400∶5∶1.5，用磷酸溶液（1→10)調(diào)節(jié) pH至 7.3]；USP35為以水為流動相 A，乙腈－水－三乙胺（160∶40∶1）用磷酸調(diào)節(jié) pH至 7.0為流動相 B，進行線性梯度洗脫，見表 1；EP7.0 為三乙胺（三乙胺 1 mL，加水 60 mL，用磷酸調(diào)節(jié) pH 至 6.2）－乙腈（60 ∶40）；檢測波長均為 285 nm。分別量取空白溶液、對照品溶液、供試品溶液，用同一根色譜柱對3種流動相進行比較，3種流動相系統(tǒng)適用性試驗色譜圖見圖1。

結(jié)果表明，采用ChP2010流動相時，對照品溶液雜質(zhì)D和E、雜質(zhì)B和F不能有效分離；采用USP流動相時，對照品溶液中雜質(zhì) A，B，C，D，E，F(xiàn)與蘭索拉唑峰之間的分離情況很好，且供試品溶液中其他單一雜質(zhì)分離情況也很好；采用EP7.0流動相時，對照品溶液中雜質(zhì) A，B，C，D，E，F(xiàn)與蘭索拉唑峰也能有效分離，但供試品溶液中除已知雜質(zhì)以外的大多數(shù)雜質(zhì)峰均在主峰保留時間以前出峰，集中在溶劑峰附近，其他單一雜質(zhì)分離情況不好。由于ChP2010的流動相系統(tǒng)不能滿足系統(tǒng)適用性的要求，故僅對USP35及EP7.0作了進一步對比。

2.2 溶液制備

ChP2010：以甲醇－0.1 mol/L 氫氧化鈉（4 ∶1）為溶劑，將蘭索拉唑制成質(zhì)量濃度為2 g/L的溶液，得供試品溶液；將蘭索拉唑?qū)φ掌芳半s質(zhì) A，C，D，E，F(xiàn) 對照品制成質(zhì)量濃度為 2 μg/mL，雜質(zhì) B對照品制成質(zhì)量濃度為8 μg/mL的混合溶液，得對照品溶液。以甲醇－0.1 mol/L 氫氧化鈉（4 ∶1）作為空白溶液。

表1 USP35中流動相梯度洗脫表

USP35：以甲醇－0.1 mol/L 氫氧化鈉（1 ∶3）為溶劑，將蘭索拉唑制成質(zhì)量濃度為2 g/L的溶液，得供試品溶液；將蘭索拉唑?qū)φ掌芳半s質(zhì) A，C，D，E，F(xiàn) 對照品制成質(zhì)量濃度為 2 μg/mL，雜質(zhì)B對照品制成質(zhì)量濃度為8 μg/mL的混合溶液，得對照品溶液?？瞻兹芤和珻hP2010。

EP7.0：以三乙胺溶液（取水 60 mL，加三乙胺1 mL，用磷酸調(diào)節(jié) pH至 10.5）－乙腈（60∶40）為溶劑，將蘭索拉唑制成質(zhì)量濃度為2 g/L的溶液，得供試品溶液；將蘭索拉唑?qū)φ掌芳半s質(zhì)A，C，D，E，F(xiàn) 對照品制成質(zhì)量濃度為 2 μg/mL，雜質(zhì) B 對照品制成質(zhì)量濃度為8 μg/mL的混合溶液，得對照品溶液。以三乙胺（取水 60 mL，加三乙胺 1 mL，用磷酸調(diào)節(jié) pH 至 10.5）－乙腈（60∶40）作為空白溶液。

2.3 方法學(xué)考察

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察、檢出限和定量限確定：精密量取2.2項下按USP35及EP7.0配制的對照品溶液，使用各自溶劑逐級稀釋，得到系列質(zhì)量濃度的對照品溶液，分別采用2.1項下的USP35及EP7.0色譜條件進行測定。以進樣量 X（μg）對峰面積 Y作圖，繪制標準曲線，按信噪比(S/N＝3)計算檢出限(LOD)，10倍信噪比(S/N)計算定量限(LOQ)。結(jié)果見表2。可見，兩種方法的線性關(guān)系良好，USP35方法的靈敏度稍低于EP7.0方法。

表2 USP35和EP7.0方法的回歸方程、線性范圍、LOD和 LOQ比較(n＝7)

精密度試驗：精密量取按 USP35及 EP7.0配制的同一對照品溶液，分別采用USP35及EP7.0的色譜條件進行測定，連續(xù)進樣5次。結(jié)果兩種方法各色譜峰的保留時間波動均小于0.02 min，RSD 分別為 0.14% ～0.66%(n＝5)，0.05% ～0.40%(n＝5)，表明兩種方法儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗：取同一批次的蘭索拉唑，照供試品溶液制備方法制備溶液，各6份，分別采用USP35及EP7.0的色譜條件進行測定。結(jié)果的 RSD＜2.0%(n＝6)，表明方法重復(fù)性好。

加樣回收試驗：稱取蘭索拉唑約0.25 g，精密稱定，共9份，分別置 10 mL容量瓶中；另精密稱取雜質(zhì) A，B，C，D，E，F(xiàn)對照品適量，加溶劑使溶解并稀釋使成每1 mL中約含雜質(zhì)B 0.1 mg，雜質(zhì) A，C，D，E，F(xiàn) 各約 0.02 mg的對照品溶液。分別精密量取 0.8，1.0，1.2 mL各3份，分別置上述10 mL容量瓶中，加溶劑溶解并稀釋至刻度，搖勻，得供試品溶液，精密量取10 μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，并計算回收率。結(jié)果見表3。

表3 USP35和EP7.0方法加樣回收試驗結(jié)果（n＝3）

2.4 樣品含量測定

取蘭索拉唑，在擬訂色譜條件下按 ChP2010，USP35，EP7.0方法測定樣品的有關(guān)物質(zhì)。結(jié)果見表4。

3 討論

對系統(tǒng)適用性試驗及樣品有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果進行比較，可見ChP2010的流動相不能將雜質(zhì)有效分離，而EP7.0的流動相雖能將雜質(zhì) A，B，C，D，E，F(xiàn)分開，但由于其他雜質(zhì)的出峰時間均集中在主峰出峰之前，會干擾到已知雜質(zhì)的檢出，檢出雜質(zhì)數(shù)量明顯少于USP35的流動相檢出的雜質(zhì)數(shù)量。

表4 樣品有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果比較

本試驗結(jié)果顯示，使用USP35收載的溶劑時，雜質(zhì)C及雜質(zhì)E的回收率較低，分別為81%和76%；而使用EP7.0收載的溶劑時，雜質(zhì)C及雜質(zhì)E的回收率能達到98%～102%的要求，樣品中雜質(zhì)的檢出率更高。ChP2010僅規(guī)定了單個雜質(zhì)不得過0.5%，總雜質(zhì)不得過2.0%，限度值遠低于歐美藥典；歐美藥典僅雜質(zhì)B限度為 0.4%，其余雜質(zhì)均控制限度為 0.1%，總雜質(zhì)限度為0.6%。由破壞試驗可知，氧化破壞主要產(chǎn)生雜質(zhì) A，B，D，高溫破壞主要產(chǎn)生雜質(zhì)C和E，僅雜質(zhì) F未檢出，故對雜質(zhì) A，B，C，D，E進行單獨控制是很有必要的。

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