摘要：對(duì)D-101、AB-8、D-311、X-5四種大孔樹(shù)脂進(jìn)行篩選，選用D-101型大孔樹(shù)脂對(duì)紅黃鵝膏粗多糖進(jìn)行初步純化，其對(duì)多糖的動(dòng)態(tài)吸附率為72%，解析率為84%，對(duì)蛋白的動(dòng)態(tài)吸附率為89%，解析率為17%，最終蛋白質(zhì)去除率高達(dá)90%，多糖保留率為64%。

關(guān)鍵詞：大孔樹(shù)脂 除蛋白

中圖分類(lèi)號(hào)：TQ461 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2015）04-0083-01

1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

紅黃鵝膏粗多糖（實(shí)驗(yàn)室制備）。

1.2 試驗(yàn)儀器

AL-104電子分析天平、YXQ-SG46-280S手提式壓力蒸汽滅菌器、Eppendorf移液、酶標(biāo)儀680型、Bio Rad恒溫水浴鍋。

1.3 實(shí)驗(yàn)試劑

石油醚，硫酸，丙酮，乙醇，葡萄糖均為分析純、大孔樹(shù)脂。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 多糖提取工藝流程

紅黃鵝膏子實(shí)體干品→粉碎→按一定水料比配成溶液→超聲破碎儀超聲→熱水浸提→過(guò)濾→取上清液→濃縮→醇沉→干燥→復(fù)溶→硫酸-苯酚法測(cè)定粗多糖含量。

2.2 采用苯酚-濃硫酸法測(cè)總糖含量

多糖含量（%）=（CVD/M）×100%，式中，C由回歸方程得出；V為多糖提取液體積（mL）；D 為紅黃鵝膏多糖提取液的稀釋倍數(shù)； M樣品干重（g）。

2.3 樣品蛋白質(zhì)含量測(cè)定

將樣品準(zhǔn)確稀釋合適的倍數(shù)，吸取1.0ml溶液，測(cè)量其吸光度，以標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算蛋白質(zhì)含量。制作蛋白含量標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)為y=0.0111x+0.3224，R2=0.9984。蛋白含量=CVt/1000VsWf （mg/g），其中，C由回歸方程得出，Vt為提取液總體積（ml），Wf為樣品鮮重（g），Vs為測(cè)定時(shí)加樣量。

蛋白質(zhì)脫除率=（脫蛋白前的含量-脫去蛋白后的含量）/脫蛋白前的含量×100%。

多糖回收率=脫蛋白后多糖含量/脫蛋白前多糖含量×100%。

2.4 四種大孔樹(shù)脂的篩選

2.4.1 大孔吸附樹(shù)脂的預(yù)處理

無(wú)水乙醇浸泡大孔樹(shù)脂24小時(shí)，充分膨脹后，用乙醇進(jìn)行沖洗，直到洗出液加三倍蒸餾水無(wú)白色混濁現(xiàn)象，再用蒸餾水對(duì)其進(jìn)行沖洗，洗至無(wú)醇味，然后將樹(shù)脂浸泡于蒸餾水中備用。

2.4.2 靜態(tài)吸附與解析實(shí)驗(yàn)

（1）靜態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)。稱(chēng)取經(jīng)預(yù)處理的四種大孔吸附樹(shù)脂1g，置于100ml錐形瓶中，向其加入30ml多糖樣品溶液，置于搖床，25℃震蕩吸附，每半小時(shí)取樣一次，測(cè)定OD值，可求得相應(yīng)多糖質(zhì)量濃度，計(jì)算大孔樹(shù)脂的吸附率及吸附量。

（2）靜態(tài)解析實(shí)驗(yàn)。

Q=（C0-Cr）V0/W

D0=（C0-Cr）/C0×100%大孔吸附樹(shù)脂靜態(tài)吸附后，將其進(jìn)行過(guò)濾，將過(guò)濾的大孔樹(shù)脂置于100ml 的錐形瓶中，加入30ml蒸餾水作為洗脫劑，置于搖床震蕩解析，每隔30min取一次樣，測(cè)定其吸光值，求得相應(yīng)多糖質(zhì)量濃度，計(jì)算樹(shù)脂的解析率及解析量解析量。解析率吸附率及吸附量分別按下式計(jì)算。

D=[CV/（C0-Cr）V0]×100%

C0 為初始質(zhì)量濃度，Cr為吸附后質(zhì)量濃度，C為解吸液的質(zhì)量濃度，V0為初始溶液體積，V為解吸液的體積，W為樹(shù)脂質(zhì)量，Q為吸附量，D0為吸附率，D為解吸率。

2.4.3 動(dòng)態(tài)吸附與解析實(shí)驗(yàn)

（1）動(dòng)態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)。準(zhǔn)確稱(chēng)取經(jīng)過(guò)預(yù)處理后的大孔樹(shù)脂，濕法裝柱（1.5cm×30cm），層析柱徑高比為（1：20，體積34.634cm3）。吸取多糖樣液100ml，上樣吸附，上樣量為2倍柱體積，控制流速為1ml/min，每4ml取一次樣，測(cè)定其吸光值，可求得相應(yīng)多糖質(zhì)量濃度，可計(jì)算樹(shù)脂的吸附率及吸附量。

（2）動(dòng)態(tài)解析實(shí)驗(yàn)。用蒸餾水作為洗脫劑，控制流速為1ml/min，每4ml測(cè)1次吸光值，求得相應(yīng)多糖質(zhì)量濃度，得多糖動(dòng)態(tài)解析率及解析量。

3 結(jié)果與討論

3.1 靜態(tài)吸附與解析

在靜態(tài)吸附過(guò)程中，D-101對(duì)蛋白的吸附率高，達(dá)到83%，解析率低為12%，對(duì)多糖的吸附率達(dá)到58，解析率為72%，因此D-101型號(hào)的樹(shù)脂效果較好。

3.2 動(dòng)態(tài)吸附與解析

在動(dòng)態(tài)吸附過(guò)程中，D-101對(duì)蛋白的吸附率高，達(dá)到89%，解析率低為17%，對(duì)多糖的吸附率達(dá)到72%，解析率為84%，因此D-101型號(hào)的樹(shù)脂效果較好，且動(dòng)態(tài)吸附效果優(yōu)于靜態(tài)吸附效果（圖1）。

4 結(jié)語(yǔ)

在除蛋白、脫色等方面，與常規(guī)方法比大孔樹(shù)脂吸附法操作簡(jiǎn)單，成本較低且對(duì)環(huán)境無(wú)污染。本實(shí)驗(yàn)對(duì)D101、AB-8、X-5、D-311四種不同型號(hào)的大孔樹(shù)脂對(duì)紅黃鵝膏多糖多糖的吸附及解析性能進(jìn)行考察，結(jié)果表明，D-101型大孔樹(shù)脂的效果最佳，對(duì)蛋白其靜態(tài)吸附率及解析率分別為83%和12%，動(dòng)態(tài)吸附率及解析率分別為89%和17%，對(duì)多糖的靜態(tài)吸附率和解析率為58%和72%，動(dòng)態(tài)吸附率和解析率為72%和84%，對(duì)蛋白的去除率達(dá)到90%，多糖保留率達(dá)到64%。