摘要：本文介紹了海藻多糖的提取方法，并對(duì)在硫酸-苯酚提取方法中不同濃硫酸體積含量對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響進(jìn)行研究，本方法設(shè)備簡便、迅速、準(zhǔn)確。

關(guān)鍵詞：海藻多糖 硫酸-苯酚分光光度法 濃硫酸體積

中圖分類號(hào)：TS254.7 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-5336（2015）04-0020-01

多糖是自然界中分布極廣的一類化合物，具有特殊的生物活性，是生命物質(zhì)的重要組成成分。海藻是生長在海中的藻類，它可以通過葉綠素或其他輔助色素以及光合作用來合成有機(jī)物質(zhì)，是海洋中常見的簡單植物。而海藻多糖是在海藻中提取的一類具有抗病毒、抗腫瘤、抗輻射、免疫調(diào)節(jié)等多方面生物活性的大分子混合物。

由于海藻多糖具有多方面的生物活性，因此其作用機(jī)制也受到了世界各國相關(guān)研究人員的廣泛關(guān)注，我國對(duì)海藻多糖及其復(fù)合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)和活性的研究也越來越深入。當(dāng)前比較常用的海藻多糖的提取、分離純化方法均是利用多糖易溶于水或酸、堿等溶液而不易溶于醇、醚等有機(jī)溶劑的特點(diǎn)。海藻多糖的分離純化是海藻多糖研究的重要步驟，對(duì)于海藻粗多糖的分離純化主要分為兩個(gè)研究方向：一是海藻粗多糖的純度，二是海藻粗多糖的得率。由于多糖純度標(biāo)準(zhǔn)不能用通?；衔锏募兌葮?biāo)準(zhǔn)來衡量，因?yàn)榧词故呛Ｔ宥嗵羌兤罚湮⒂^形狀也并不是均一，所以在盡量保證海藻粗多糖在提取過程中不會(huì)被破壞，使得所得多糖的純度不影響相關(guān)研究的前提下努力提高多糖的得率。影響海藻多糖分離純化的的因素有很多，比如提取時(shí)間、提取溫度及酸、堿提取法中酸或堿的濃度大小問題等等。

本次實(shí)驗(yàn)主要研究在使用硫酸-苯酚法提取多糖過程中硫酸的使用量對(duì)海藻多糖提取結(jié)果的影響。實(shí)驗(yàn)原理為海藻多糖在濃硫酸的作用下，先水解成單糖，單糖迅速脫水生成衍生物，然后與苯酚直接結(jié)合生成橙色化合物，此化合物在490nm波長處出現(xiàn)最大吸收峰值，并且其吸光度與糖含量呈線性關(guān)系。

1 實(shí)驗(yàn)儀器和藥品

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

UV-2550型紫外分光光度計(jì)、電子天平、漩渦振蕩器、超聲儀。

1.2 藥品

（1）標(biāo)準(zhǔn)巖藻糖；（2）濃硫酸；（3）80%苯酚溶液：稱取80g苯酚于100mL容量瓶中，用水定容，0℃～5℃保存；（4）6%苯酚溶液：量取80%苯酚溶液37.5mL于500mL容量瓶中，加水定容，0℃～5℃保存。

2 試驗(yàn)方法與步驟

2.1 提供測試樣品預(yù)處理

準(zhǔn)確稱取0.5～2.0g樣品于100mL容量瓶中，加入80mL水，于超聲儀中超聲30分鐘，取出后加水定容至100mL。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的配制

準(zhǔn)確稱取標(biāo)準(zhǔn)巖藻糖50mg于500mL容量瓶中，加水至刻度，即配制成濃度為0.1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.3 濃硫酸用量考察

以下試驗(yàn)操作為在相同試驗(yàn)條件下，分別加入5mL體積濃硫酸和7mL體積濃硫酸對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線及試驗(yàn)結(jié)果的影響。

（1）分別吸取巖藻糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.4mL、0.8mL、1.2mL、1.6mL、2.0mL于25mL試管中，均用水補(bǔ)至2.0mL，然后各加入6%的苯酚溶液1mL，加入濃硫酸5mL，靜置10min，用渦旋振蕩器將其搖勻，放置20min后，于490nm波長處測定吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線如下表1：

通過對(duì)表1數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸，得到如下標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)含量-吸光度線性方程：如圖1所示。

（2）在另一組試驗(yàn)中分別吸取巖藻糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.4mL、0.8mL、1.2mL、1.6mL、2.0mL于25mL試管中，均用水補(bǔ)至2.0mL，然后各加入6%的苯酚溶液1mL，加入濃硫酸7mL，靜置10min，用渦旋振蕩器將其搖勻，放置20min后，于490nm波長處測定吸光度。標(biāo)準(zhǔn)曲線如下表2：

通過對(duì)表2數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸，得到如下標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)含量-吸光度線性方程：如圖2所示。

（3）試驗(yàn)樣品經(jīng)前處理后（2.1），吸取樣液各1mL于兩個(gè)25mL試管中，各加水補(bǔ)齊至2mL，再各加入6%的苯酚溶液1mL，此時(shí)在兩組試管中分別加入濃硫酸5mL和7mL，靜置10min，用渦旋振蕩器將其搖勻，放置20min后，于490nm波長處測定吸光度，所得吸光度如下表3：

3 數(shù)據(jù)分析與結(jié)論

通過上述試驗(yàn)表1、表2及其各自的線性回歸方程可以看出，在相同試驗(yàn)條件下，添加不同體積濃硫酸對(duì)試驗(yàn)結(jié)果影響很大，加入7mL濃硫酸明顯比同一巖藻糖標(biāo)準(zhǔn)溶液含量下5mL濃硫酸的吸光度值高，從表3中，也可以明顯比較出樣液的吸光度也同樣是7mL高于5mL，即在7mL濃硫酸作用下海藻多糖的得率更高。

本次試驗(yàn)緊緊研究兩組不同體積濃硫酸對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響，但是否濃硫酸的加入量與多糖吸光度是否呈線性增加的趨勢還有待于進(jìn)一步的研究。