劉寬浩　王藝卓

食管鱗癌組織中VEGF-C和HGF蛋白的表達(dá)及相關(guān)性分析

劉寬浩王藝卓

【摘要】目的觀察血管內(nèi)皮生長因子-C(VEGF-C)和肝細(xì)胞生長因子(HGF)蛋白在食管鱗癌組織中的表達(dá)，并探討其相關(guān)性和臨床意義。方法應(yīng)用免疫組化檢測VEGF-C和HGF蛋白在食管癌組織中的表達(dá)情況。結(jié)果VEGF-C蛋白在不同浸潤深度、分化程度及TNM分期的食管癌組織中的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05) ; HGF蛋白在食管鱗癌中的表達(dá)高于癌旁正常組織，且與腫瘤直徑、浸潤深度、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān); VEGF-C與HGF蛋白在食管癌組織中表達(dá)呈正相關(guān)。結(jié)論VEGF-C及HGF蛋白表達(dá)與食管癌的侵襲、轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，兩者可能具有協(xié)同作用。

【關(guān)鍵詞】食管癌;血管內(nèi)皮生長因子-C;肝細(xì)胞生長因子;免疫組化

項(xiàng)目來源:黃河科技學(xué)院自然科學(xué)資助項(xiàng)目(編號: KYZR201107)

作者單位: 450063鄭州市，黃河科技學(xué)院醫(yī)學(xué)院(劉寬浩) ;河南省腫瘤醫(yī)院放療科(王藝卓)

食管癌是最常見的消化道惡性腫瘤之一，我國每年死于食管癌的患者超過15萬。手術(shù)是目前治療食管癌最主要的方法。然而早期食管癌患者，術(shù)后仍然有20%～30%的復(fù)發(fā)率，這提示食管癌患者的預(yù)后在很大程度上取決于其內(nèi)在的生物學(xué)行為［1］。本研究通過檢測食管鱗癌組織中血管內(nèi)皮生長因子-C (VEGF-C)和肝細(xì)胞生長因子(HGF)蛋白表達(dá)水平，探討兩者在食管癌發(fā)生中的作用。

1　資料與方法

1.1一般資料收集河南省腫瘤醫(yī)院2006年2月至2012年10月經(jīng)病理或細(xì)胞學(xué)證實(shí)后行食管癌根治術(shù)者75例。其中男46例，女29例;年齡48～85歲，中位年齡65歲;術(shù)前未行局部放療或全身化療，既往無腫瘤病史。病理類型均為鱗狀上皮癌。30例正常對照組織取自手術(shù)切除標(biāo)本腫瘤近端5 cm以外的食管組織。

1.2試劑兔抗人VEGF-C及HGF多克隆抗體購自美國Santa公司，免疫組化二步法試劑盒均購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司。

1.3方法75例食管鱗癌組織和30例正常組織均經(jīng)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片2張。免疫組化兩步法嚴(yán)格按試劑盒說明書操作。以已知陽性片作為陽性對照，以PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4結(jié)果判斷VEGF-C蛋白結(jié)果判定［2］: VEGF-C蛋白以細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性表達(dá)，胞漿透明或無色為陰性;每例標(biāo)本均在400倍鏡下隨機(jī)觀察10個(gè)視野，計(jì)數(shù)每個(gè)視野100個(gè)腫瘤細(xì)胞的陽性細(xì)胞百分率，取其平均值;染色強(qiáng)度評分中，無色0分、淺黃色1分、棕黃色2分、棕褐色3分;陽性細(xì)胞百分率評分中，腫瘤細(xì)胞陽性細(xì)胞≤10%為1分、10%～50%為2分、＞50%為3分;兩者乘積≥3分為免疫組化反應(yīng)陽性。由兩位病理科主任醫(yī)師采用雙盲法獨(dú)立觀察每張切片，將胞膜或胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色著色的細(xì)胞判定為HGF陽性顯色細(xì)胞。參照文獻(xiàn)方法，根據(jù)陽性細(xì)胞染色程度及染色細(xì)胞百分率進(jìn)行評分［3］。在高倍鏡下隨機(jī)觀察5個(gè)視野，以陽性細(xì)胞百分率和染色強(qiáng)度進(jìn)行半定量判定。陽性細(xì)胞百分比:無細(xì)胞染色為0分，陽性細(xì)胞數(shù)占1%～35%為1分，36%～75%為2分，＞75%為3分;染色強(qiáng)度:不顯色或顯色不清為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。兩項(xiàng)得分乘積作為最后判斷結(jié)果: 0分為陰性(－)，1～2分為弱陽性(+)，3～4分為中度陽性(++)，6～9分為強(qiáng)陽性(+++)，(－)者為陰性組，(+)～(+++)者為陽性組。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)采用Spearman相關(guān)系數(shù)表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1VEGF-C蛋白在食管鱗癌的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系VEGF-C蛋白在食管癌組織中的陽性率為68.0%。VEGF-C蛋白在不同浸潤深度、分化程度及TNM分期的食管癌組織中的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05) ;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的陽性率為78.3%，高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的51.7%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見圖1、2，表1。

圖1　VEGF-C在食管癌組織中的表達(dá)(HE×400)

圖2　VEGF-C在食管鱗狀上皮組織中的表達(dá)(HE×400)

表1　VEGF-C蛋白、HGF蛋白表達(dá)及與食管癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系

2.2食管鱗癌組織中HGF蛋白的表達(dá)及與臨床病理參數(shù)的關(guān)系HGF蛋白在食管癌組織中的陽性率為76.1%，HGF蛋白在不同浸潤深度、分化程度及TNM分期的食管癌組織中的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05) ;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的陽性率為89.1%，高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的55.2%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見表1。

2.3VEGF-C及HGF蛋白在食管癌組織中表達(dá)的相關(guān)性VEGF-C及HGF蛋白在食管癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.75，P=0.036)。見表2。

表2　VEGF-C及HGF蛋白表達(dá)的相關(guān)性例

3　討論

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過程，許多細(xì)胞因子起著重要的作用［4］。近年來，在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移這一研究領(lǐng)域中VEGF-C和HGF蛋白倍受關(guān)注。VEGF-C是一種淋巴管生長因子，與腫瘤中淋巴管生成和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)［5］;其生理作用可能與促進(jìn)血管發(fā)育和促進(jìn)組織修復(fù)有關(guān)，VEGF還可直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞并刺激有絲分裂，從而促進(jìn)新生血管的生長，還通過增加血管通透性為血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移及腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供基質(zhì)［6］。本文結(jié)果顯示VEGF-C蛋白在食管癌組織中的表達(dá)與TNM分期、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與相關(guān)報(bào)道［7］一致。

HGF因?qū)Ω渭?xì)胞具有較強(qiáng)的有絲分裂原作用而被命名為肝細(xì)胞生長因子。HGF是一種多肽生長因子，具有誘導(dǎo)血管生成及上皮細(xì)胞遷移、侵襲等作用［8］。本研究發(fā)現(xiàn)，HGF在食管鱗癌組織中高表達(dá)，在癌旁正常組織中低表達(dá)，提示HGF表達(dá)上調(diào)與食管鱗癌的惡性行為相關(guān)。HGF的表達(dá)與食管鱗癌的腫瘤直徑、淋巴轉(zhuǎn)移情況和侵襲深度有關(guān)，提示HGF在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中具有一定的作用。HGF的表達(dá)與還與食管鱗癌的分化程度有關(guān)，分化程度低的癌組織HGF表達(dá)陽性率高，說明HGF還可能與調(diào)控食管鱗癌的形成過程中細(xì)胞表型的表達(dá)，但HGF在食管鱗癌發(fā)展和演進(jìn)中的機(jī)制尚不明確。

本研究發(fā)現(xiàn)，VEGF-C蛋白在不同浸潤深度、分化程度及TNM分期的食管癌組織中的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的VEGF-C蛋白陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，這與Amioka等［2］的報(bào)道一致;這也與先前的研究結(jié)果［9］一致。HGF蛋白在不同浸潤深度、分化程度及TNM分期的食管癌組織中的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的HGF蛋白陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者。本研究還對VEGF-C及HGF蛋白在食管癌組織中表達(dá)的相關(guān)性進(jìn)行研究，結(jié)果呈正相關(guān)(r=0.758，P=0.036)。

綜上所述，VEGF-C和HGF蛋白的表達(dá)與食管鱗癌的局部侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，兩者具有協(xié)同作用，呈正相關(guān)性，對指導(dǎo)食管鱗癌的預(yù)后有一定意義。

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Analysis for the expression of VEGF-C and HGF protein in esophageal squamous cell carcinoma and their correlation with esophageal cancer

LIU Kuanhao*，WANG Yizhuo.*
Medical College of Huanghe Science and Technology College， Henan，Zhengzhou 450063，China

【Abstract】ObjectiveTo observe the expression of VEGF-C and HGF protein in esophageal squamous cell carcinoma，and to explore their clinical significance and correlation with esophageal cancer.Methods The expression levels of VEGF-C and HGF protein in esophageal carcinoma tissue were detected by immunohistochemistry.ResultsThere were significant differences in the expression levels of VEGF-C protein in different depth of invasion，differentiation and TNM staging of esophageal carcinoma (P＜0.05)，and the expression positive rates of VEGF-C in the patients with lymph node metastasis were significantly higher than those of patients without lymph node metastasis (P＜0.05).The expression levels of HGF protein in esophageal squamous cell carcinoma were higher than those of normal tissues beside cancer，moreover，which were correlated to the diameter of tumor，depth of invasion，differentiation and lymph node metastasis.The expression of VEGF-C was positively related with that of HGF protein in esophageal cancer tissue.ConclusionThe expressions of VEGF-C and HGF protein are closely related to the invasion and metastasis of esophageal carcinoma，furthermore，VEGF-C and HGF may have synergetic effects.

【Key words】esophageal carcinoma; vascular endothelial growth factor-C; human growth factor; immunohistochmeistry

(收稿日期:2014－10－09)

doi:10.3969/j.issn.1002－7386.2015.08.006

【文章編號】1002－7386(2015) 08－1141－03

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

【中圖分類號】R 735.1