陳靜　朱鴻鵬　涂曉文

[摘 要] 目的：探討血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）在多囊腎（Polycystic kidney disease，PKD）發(fā)生發(fā)展中的水平變化及機制，為PKD的臨床治療提供新的思路。方法：以我院2012年8月—2015年8月收治的118例PKD患者為研究對象，納入觀察組，并按照其腎小球濾過率（Glomerular filtration rate，GFR）狀態(tài)，將GFR≥25 mL/min患者納入高濾過率組，將GFR<25 mL/min患者納入低濾過率組，此外，選取同期50例腎透明細胞癌患者，納入對照組。比較觀察組患者腎壁組織、對照組患者癌旁正常腎組織VEGF表達水平，并分析VEGF與觀察組患者GFR的關系。結果：觀察組VEGF表達等級高于對照組，其VEGF陽性率為83.05%，亦高于對照組的54.00%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。高濾過組VEGF表達等級高于對照組，其VEGF陽性率為97.96%，亦高于對照組的72.46%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結論：VEGF在PKD的發(fā)生過程中扮演了重要角色，隨著腎纖維化嚴重程度的逐漸增加，PKD腎臟組織VEGF表達逐漸下降，PKD早期實施VEGF抑制治療、PKD中晚期實施VEGF補充治療有望成為改善PKD患者預后質量的新途徑。

[關鍵詞] 血管內皮生長因子；多囊腎；腎小球濾過率；機制

中圖分類號：R692 文獻標識碼：B 文章編號：2095-5200（2016）05-020-03

DOI：10.11876/mimt201605008

多囊腎（Polycystic kidney disease，PKD）是一種常染色體遺傳病，患者以腎臟皮質及髓質出現(xiàn)大量囊腫為主要病理生理改變，囊腫對腎組織的持續(xù)擠壓可導致腎實質損害，并引發(fā)血尿、蛋白尿等臨床癥狀，部分患者可因毒素積累發(fā)生尿毒癥，生存質量受到嚴重威脅[1]。目前臨床對PKD的發(fā)病機制尚無明確闡釋，多數(shù)學者認為，囊腫襯里上皮細胞過度增殖、囊腫周圍新生血管生成是導致PKD發(fā)生發(fā)展的主要原因[2]。研究發(fā)現(xiàn)，血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）可參與小鼠PKD模型新生血管生成環(huán)節(jié)，導致囊腫增多、增大及腎臟組織纖維化[3]，但關于VEGF在PKD患者發(fā)病機制中作用研究較為缺乏。本研究探討VEGF在PKD發(fā)生發(fā)展中的水平變化及機制，希望為PKD發(fā)病機制及治療方案的指導提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以我院2012年8月—2015年8月收治的118例PKD患者為研究對象，均接受去頂減壓術治療，并經術后病理組織學檢查確診PKD[4]，排除合并腎臟嚴重感染、自發(fā)性出血、難治性高熱、惡性腫瘤者，納入觀察組，并按照其腎小球濾過率（Glomerular filtration rate，GFR）狀態(tài)，將GFR≥25 mL/min患者納入高濾過率組，將GFR<25 mL/min患者納入低濾過率組[5]，此外，選取同期50例腎透明細胞癌患者，均經術后病理組織學檢查明確診斷且癌旁組織為正常腎組織，納入對照組。觀察組男79例，女39例，年齡32～51歲，平均年齡（40.85±5.42）歲；對照組男33例，女17例，年齡30～55歲，平均（41.07±6.38）歲。兩組患者性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學意義，具有可比性。

1.2 研究方法

1.2.1 標本取材 觀察組標本取自于術中新鮮多囊腎壁組織，對照組標本取自術中癌旁組織，標本自腎透明細胞癌邊緣≥5 cm且病理組織學檢查未見癌細胞。標本取出體內后立即以10%中性福爾馬林固定，行乙醇和二甲苯脫水、透明，石蠟包埋，保存待測。

1.2.2 檢測方法 使用免疫組化染色法檢測待測標本VEGF表達情況，檢測方法[6]：實施切片脫蠟、水化，以PBS沖洗后行抗原修復，而后置于3% H2O2去離子水中，室溫孵育10 min，PBS沖洗并滴加適當比例稀釋后一抗，置于恒溫孵育箱內，37℃孵育1 h；PBS沖洗并滴加二抗，置于恒溫孵育箱內，37℃孵育30 min。最后實施DAB顯色、蘇木素復染、梯度酒精脫水、二甲苯透明、樹膠封片，以PBS代替一抗為陰性對照，實施結果判定。

1.2.3 結果判定 于光學顯微鏡（×400）下，采用半定量5分評分法，選取10個不重疊的視野，根據(jù)VEGF在標本內染色強弱深度及染色范圍進行結果判定，判定標準[7]：染色強度：0分：無著色；1分：淺著色，視野內可見棕黃色片狀染色；2分：深著色，視野內可見棕黃色大顆?；蜃睾谏旧蝗旧秶?分：棕黃色染色范圍≤25%；2分：棕黃色染色范圍25%～50%；3分：棕黃色染色范圍50%～75%；4分：棕黃色染色范圍≥75%。以染色強度及染色范圍評分之和為分級標準，總分<2分為（﹣），2分≤總分<3分為（+），3分≤總分<4分為（++），總分≥4分為（+++），其中（﹣）、（+）為低表達（陰性），（++）、（+++）為高表達（陽性）。

1.3 分析方法

比較VEGF在PKD腎臟組織、正常腎組織中表達情況，總結VEGF在PKD發(fā)生過程中發(fā)揮的作用，并比較VEGF在不同腎功能的PKD腎臟組織中表達情況，探討VEGF在PKD發(fā)展過程中扮演的角色。

1.4 統(tǒng)計學分析

對本臨床研究的所有數(shù)據(jù)采用SPSS18.0進行分析，計數(shù)資料以（n/%）表示，并采用χ2檢驗，等級資料采用秩和檢驗，計量資料以（x±s）表示，滿足方差齊性則采用獨立樣本t檢驗，若方差不齊，則采用校正t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 PKD腎臟組織、正常腎組織中VEGF表達情況

觀察組VEGF陽性率為83.05%，亦高于對照組的54.00%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

2.2 不同腎功能PKD腎臟組織中VEGF表達情況

觀察組118例患者中，49例患者GFR≥25 mL/min，納入高濾過組，其余69例患者GFR<25 mL/min，納入低濾過組。高濾過組VEGF表達等級高于對照組，其VEGF陽性率為97.96%，亦高于對照組的72.46%，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

PKD是全球范圍內發(fā)病率最高的單基因遺傳性疾病，約有接近80%的患者在77歲前可進展至終末期腎病甚至死亡，對社會及家庭造成了沉重負擔[8]。由于目前醫(yī)學界對PKD的發(fā)病機制尚未完全明確，仍缺乏特異性治療藥物，臨床治療重點多集中于緩解疼痛、血尿、高血壓等并發(fā)癥，在預防或延緩PKD進展方面具有一定意義，但無法阻止PKD自然病程的進展[9]。

終末期腎病的特征為腎臟發(fā)生不可逆性的纖維化，而腎臟纖維化程度與腎臟損傷程度具有較高的一致性[10]。在腎臟纖維化的發(fā)生過程中，上皮間質轉化（EMT）是其必經之路及重要機制，當腎臟發(fā)生EMT時，腎小管上皮細胞間緊密連接特性消失，細胞膜粘連受體顯著減少，從而逐漸出現(xiàn)間質細胞特征。李林等[11]研究發(fā)現(xiàn)，PKD小鼠模型腎臟纖維化過程中，部分成纖維母細胞可能來源于腎小管上皮組織向間質細胞轉化，進一步印證了PKD發(fā)生發(fā)展過程中EMT發(fā)揮的重要作用。此外，Seeger等[12]指出，腎臟囊腫發(fā)展過程與腫瘤發(fā)展相似，亦需要大量氧氣及營養(yǎng)物質，以保證能量供應及發(fā)育活性，故往往伴有微小毛細血管的廣泛生長。

作為一種促進內皮細胞增生、毛細血管生成的關鍵因子，VEGF具有激活并刺激血管內皮細胞、啟動新生血管發(fā)育、調節(jié)新生血管塑造成形功能，可能在PKD發(fā)生的EMT及血管廣泛生長環(huán)節(jié)扮演了重要角色[13]。本研究結果示，PKD病變腎臟組織VEGF表達等級及陽性率均高于正常組織，說明VEGF在PKD的發(fā)生中占據(jù)著重要地位。景穎等[14]指出，正常腎臟內，VEGF主要表達于足細胞、遠端腎小管及集合管上皮細胞，在缺血缺氧引發(fā)的急性腎功能衰竭中，VEGF表達明顯增高，并通過刺激VEGF-2介導的信號級聯(lián)反應，發(fā)揮抑制內皮細胞凋亡、保護內皮細胞、加速腎臟康復作用，并通過刺激血管生成，促進腎小球病變恢復。該結果表明，在PKD發(fā)生早期，VEGF表達呈上升狀態(tài)，以拮抗腎臟損傷，延緩EMT進程。

通過上述研究，可以發(fā)現(xiàn)，VEGF在PKD發(fā)生過程中發(fā)揮了重要作用，而隨著VEGF的升高，患者成纖維細胞增殖、成纖維細胞向肌成纖維轉化不斷加劇，往往導致腎臟組織纖維化程度上升[15]。但本研究結果示，高濾過組VEGF表達等級及陽性率高于低濾過組，說明隨著患者腎臟纖維化程度的加劇，其VEGF表達逐漸下降，與上述猜測存在矛盾，其原因可能為：隨著腎臟纖維化程度的加劇，損傷血管內皮轉化能力及血管緊張度逐漸下降，且腎小球周圍正常的皮質毛細血管網絡系統(tǒng)逐漸喪失[16-17]，導致VEGF的維持血管內皮細胞生存、發(fā)展及功能的作用無法發(fā)揮，故VEGF逐漸降低。同時，Chen等[18]發(fā)現(xiàn)，結扎小鼠單側輸尿管后，其VEGF濃度表達明顯降低，而應用藥物減輕腎臟纖維化程度后，其VEGF濃度有所恢復，印證了上述結論。

綜上所述，VEGF在PKD發(fā)生發(fā)展中扮演了重要角色，PKD發(fā)病早期，VEGF表達明顯上升，以促進血管內皮細胞生成、誘導EMT過程，但隨著患者腎臟纖維化程度的加劇，VEGF表達逐漸下降。針對PKD患者病情，實施抑制VEGF表達或上調VEGF表達治療，有望為其病情進展的延緩及預后質量的改善提供新的思路。

參 考 文 獻

[1] Masyuk T V， Radtke B N， Stroope A J， et al. Pasireotide is more effective than octreotide in reducing hepatorenal cystogenesis in rodents with polycystic kidney and liver diseases[J]. Hepatology， 2013， 58（1）： 409-421.

[2] 吳蕓冰， 寧松毅， 湯元杰. 常染色體顯性多囊腎病研究現(xiàn)狀及進展[J]. 醫(yī)學研究生學報， 2016， 29（6）：668-672.

[3] Franchi F， Peterson K M， Xu R， et al. Mesenchymal stromal cells improve renovascular function in Polycystic Kidney Disease[J]. Cell Transplant， 2015， 24（9）： 1687-1698.

[4] Huang J L， Woolf A S， Long D A. Angiogenesis and autosomal dominant polycystic kidney disease[J]. Pediatr Nephrol， 2013， 28（9）： 1749-1755.

[5] 姜紅堃， 郭燕平， 李雷， 等. TBX1基因在常染色體顯性遺傳性多囊腎腎組織中的表達及意義[J]. 中國醫(yī)科大學學報， 2014， 43（8）： 673-676.

[6] Gall C L， Audrézet M P， Le Meur Y， et al. Genetics and pathogenesis of autosomal dominant polycystic kidney disease： 20 years on[J]. Hum Mutat， 2014， 35（12）： 1393-1406.

[7] 駱杰偉， 孟曉嶸， 鄭星宇， 等. 常染色體顯性遺傳性多囊腎家系PKD1、PKD2基因突變分析[J]. 腎臟病與透析腎移植雜志， 2014， 23（4）： 321-325.

[8] Cheungpasitporn W， Chebib F T， Cornell L D， et al. Intravitreal antivascular endothelial growth factor therapy may induce proteinuria and antibody mediated injury in renal allografts[J]. Transplantation， 2015， 99（11）： 2382-2386.

[9] Xu R， Franchi F， Miller B， et al. Polycystic kidneys have decreased vascular density： a micro-CT study[J]. Microcirculation， 2013， 20（2）： 183-189.

[10] 肖航. 腺苷A2A受體調控腎間質纖維化的機制研究[D]. 重慶：第三軍醫(yī)大學， 2012.

[11] 李林， 戴兵， 孫田美，等. 常染色體顯性多囊腎病Han：SPRD大鼠腎臟病理觀察及其意義[J]. 上海：第二軍醫(yī)大學學報， 2005， 26（1）：83-86.

[12] Seeger-Nukpezah T， Geynisman D M， Nikonova A S， et al. The hallmarks of cancer： relevance to the pathogenesis of polycystic kidney disease[J]. Nat Rev Nephrol， 2015， 11（9）： 515-534.

[13] Klawitter J， Reed-Gitomer B Y， McFann K， et al. Endothelial dysfunction and oxidative stress in polycystic kidney disease[J]. Am J Physiol-Renal， 2014， 307（11）： F1198-F1206.

[14] 景穎， 梅長林. 常染色體顯性多囊腎病藥物治療進展[J]. 中華腎臟病雜志， 2015， 31（12）： 944-947.

[15] Bagcchi S. Axitinib： VEGF inhibition in advanced thyroid cancer[J]. The Lancet Oncology， 2014， 15（8）： e310.

[16] Petitpierre F， Cornelis F， Couzi L， et al. Embolization of renal arteries before transplantation in patients with polycystic kidney disease： a single institution long-term experience[J]. Eur Radiol， 2015， 25（11）： 3263-3271.

[17] Ta M H T， Liuwantara D， Rangan G K. Effects of pyrrolidine dithiocarbamate on proliferation and nuclear factor-κB activity in autosomal dominant polycystic kidney disease cells[J]. BMC Nephrol， 2015， 16（1）： 1.

[18] Chen N X， ONeill K D， Allen M R， et al. Low bone turnover in chronic kidney disease is associated with decreased VEGF-A expression and osteoblast differentiation[J]. Am J Nephrol， 2015， 41（6）： 464-473.