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        突變選擇窗內(nèi)篩選的鮑曼不動桿菌耐藥菌株交叉耐藥分析

        2015-04-04 09:19:16劉明濤李超李凱述濱州市人民醫(yī)院山東濱州256610
        山東醫(yī)藥 2015年18期
        關(guān)鍵詞:鮑曼不動桿菌藥敏試驗(yàn)耐藥性

        劉明濤,李超,李凱述(濱州市人民醫(yī)院,山東濱州256610)

        突變選擇窗內(nèi)篩選的鮑曼不動桿菌耐藥菌株交叉耐藥分析

        劉明濤,李超,李凱述
        (濱州市人民醫(yī)院,山東濱州256610)

        摘要:目的體外研究不同抗菌藥物突變選擇窗(MSW)內(nèi)篩選得到的鮑曼不動桿菌耐藥菌株交叉耐藥情況,探討MSW內(nèi)細(xì)菌耐藥機(jī)制。方法E-test法測定頭孢哌酮舒巴坦、亞胺培南西司他丁、阿米卡星、環(huán)丙沙星對鮑曼不動桿菌的最低抑菌濃度(MIC),瓊脂平板稀釋法測定防耐藥突變濃度(MPC)。從每種抗菌藥物的MSW內(nèi)的高濃度與低濃度平板分別挑選單個(gè)菌落。用K-B法對耐藥菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn),觀察交叉耐藥情況。同時(shí)應(yīng)用外排泵抑制劑對篩選出的菌株進(jìn)行外排泵表型測定,觀察有無外排泵激活。結(jié)果從亞胺培南/西司他丁與頭孢哌酮舒巴坦MSW內(nèi)篩選的耐藥菌無交叉耐藥,外排泵抑制試驗(yàn)陽性;環(huán)丙沙星與阿米卡星MSW內(nèi)篩選的耐藥菌株有交叉耐藥,但僅表現(xiàn)出對同類抗菌藥物的交叉耐藥,外排泵抑制試驗(yàn)陰性。結(jié)論亞胺培南西司他丁與頭孢哌酮舒巴坦MSW內(nèi)的耐藥鮑曼不動桿菌發(fā)生耐藥的機(jī)制可能是由于外排泵的激活,不能穩(wěn)定傳代。環(huán)丙沙星與阿米卡星MSW內(nèi)的耐藥菌產(chǎn)生耐藥基因,可以穩(wěn)定傳代,導(dǎo)致對同類抗菌藥物的交叉耐藥。臨床應(yīng)用這兩種藥物治療效果不理想時(shí),應(yīng)換用其他類別的抗菌藥物治療。

        關(guān)鍵詞:突變選擇窗;鮑曼不動桿菌;耐藥性;藥敏試驗(yàn)

        鮑曼不動桿菌是院內(nèi)感染的常見致病菌,由于其對多種抗菌藥物耐藥,導(dǎo)致臨床治療效果不理想。耐藥突變選擇窗(MSW)理論認(rèn)為,當(dāng)抗菌藥物濃度在最低抑菌濃度(MIC)和防耐藥突變濃度(MPC)之間(即MSW)時(shí),會使耐藥突變菌富集擴(kuò)增[1,2]。MPC是防止一步耐藥突變體富集擴(kuò)增的最低濃度,當(dāng)抗菌藥物濃度達(dá)到或超過MPC時(shí),可抑制耐藥突變體的富集擴(kuò)增。臨床應(yīng)用抗菌藥物治療鮑曼不動桿菌感染時(shí),藥物濃度大部分時(shí)間落在MSW內(nèi),引起耐藥突變體的富集擴(kuò)增,導(dǎo)致治療失?。?,4]。頭孢哌酮舒巴坦、亞胺培南西司他丁、環(huán)丙沙星、阿米卡星是臨床常用的治療鮑曼不動桿菌感染的藥物[5,6]。2014年1~6月,我們觀察了上述四種藥物在其MSW內(nèi)篩選得到的耐藥菌株的交叉耐藥情況,探討其耐藥機(jī)制。

        1 材料與方法

        1.1材料鮑曼不動桿菌質(zhì)控菌株ATCC19606,購自衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心。VITEK-Jr微生物鑒定系統(tǒng)(BioMerieux公司) ;電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海精實(shí)實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司) ; Vitek比濁儀(法國梅里埃公司) ; E-test紙片(AB Biodisk公司)。Mueller-Hinton (MH)瓊脂、MH肉湯為瑞典Oxoid公司產(chǎn)品。頭孢哌酮舒巴坦(輝瑞)、亞胺培南西司他丁(默沙東)、環(huán)丙沙星(拜耳)、阿米卡星(禾豐制藥)。外排泵抑制劑羰基氰化物間氯苯腙(CCCP,Sigma)。

        1.2方法

        1.2.1抗菌藥物MIC測定應(yīng)用E-test法測定頭孢哌酮舒巴坦、亞胺培南西司他丁、阿米卡星、環(huán)丙沙星對ATCC19606的MIC。

        1.2.2抗菌藥物MPC測定[1,2]用無菌生理鹽水將孢哌酮舒巴坦、亞胺培南西司他丁、阿米卡星、環(huán)丙沙星分別配制成0.125、0.25、0.5、1、2、4、8、16、32、64 μg/mL的抗菌溶液,取各濃度的抗菌藥物溶液2 mL,分別置入18 mm的無菌平板,加入MH瓊脂18 mL,邊加邊混勻,配制成終濃度為1、2、4、64、128倍MIC濃度的藥物瓊脂平板。挑取單個(gè)菌落接種于200 mL MH肉湯中震蕩過夜培養(yǎng),離心后,懸浮在200 mL MH肉湯中,震蕩培養(yǎng)6 h,菌液濃度達(dá)(6~9)×109cfu/mL,3 000 r/min離心后,用無菌吸量管準(zhǔn)確吸取上清液9 mL,使菌液濃度富集為(6~9)×1010cfu/mL,用比濁儀調(diào)整菌液濃度為3×1010cfu/mL。取100 μL菌液均勻涂抹在含有抗菌藥物的MH平皿上,每個(gè)濃度4個(gè)平皿,使每一藥物濃度的細(xì)菌接種量為1.2×1010cfu。37℃孵育,觀察24、48、72 h時(shí)的菌落生長情況,以72 h無菌落生長的最低藥物濃度為MPC。將接近MPC的兩個(gè)藥物濃度所篩選出的菌株接種至無藥物的MH平皿,傳代2次后再接種于原篩選藥物濃度的平皿上,以確保其是耐藥突變株。

        1.2.3藥敏試驗(yàn)從每種抗菌藥物處于MSW內(nèi)濃度(2倍及8倍MIC)的平板上挑取單個(gè)菌落,放入含有牛奶培養(yǎng)基的EP管,低溫保存。從EP管中將菌落接種到無藥瓊脂平板上,培養(yǎng)24 h,取單個(gè)菌落,蒸餾水溶解,用比濁儀將菌液濃度調(diào)整到0.5個(gè)麥?zhǔn)蠁挝缓螅鶆蛲吭跓o藥瓊脂平板,貼藥敏紙片,24 h后觀察抑菌環(huán)直徑,根據(jù)美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(CLSI)指南2013版判斷交叉耐藥情況??瞻讟?biāo)準(zhǔn)菌株組為ATCC19606,對所有抗菌藥物均敏感。

        1.2.4菌株外排泵表型測定[7]制備CCCP濃度為20 μg/mL的瓊脂平板和不含藥物的瓊脂平板(空白對照),將篩選出的菌株制備成108cfu/mL的菌液,用無菌棉簽均勻涂布于平皿上,E-test法檢測鮑曼不動桿菌在不同培養(yǎng)基上對環(huán)丙沙星的MIC值。設(shè)定以CCCP后環(huán)丙沙星MIC較空白對照降低≥4倍的菌株為外排泵表型測定陽性。

        2 結(jié)果

        2.1四種抗菌藥物對ATCC19606的MIC、MPC見表1。

        2.2藥敏試驗(yàn)結(jié)果從抗菌藥物2倍MIC濃度篩選得到的菌株,其藥敏結(jié)果顯示:從亞胺培南西司他丁和頭孢哌酮舒巴坦所篩選的菌株,對所有抗菌藥物均敏感;從環(huán)丙沙星及阿米卡星所篩選的菌株,對同類藥物耐藥或中介耐藥,其中從環(huán)丙沙星所篩選出的菌株對左氧氟沙星、環(huán)丙沙星為中介耐藥,對氧氟沙星為耐藥;從阿米卡星所篩選出的菌株,對慶大霉素、奈替米星為中介耐藥,對阿米卡星為耐藥。

        從抗菌藥物8倍MIC濃度篩選得到的菌株,其藥敏結(jié)果顯示:從亞胺培南西司他丁和頭孢哌酮舒巴坦所篩選的菌株,與2倍MIC濃度篩選的細(xì)菌藥敏結(jié)構(gòu)類似,對所有抗菌藥物均敏感;從環(huán)丙沙星及阿米卡星所篩選的菌株,均表現(xiàn)出對同類藥物耐藥,而對其他藥物均較為敏感;從環(huán)丙沙星所篩選出的菌株對左氧氟沙星、環(huán)丙沙星、均為氧氟沙星為耐藥;從阿米卡星所篩選出的菌株對慶大霉素、奈替米星、阿米卡星均為耐藥。

        2.3菌株外排泵表型測定結(jié)果環(huán)丙沙星與阿米卡星組篩選出的耐藥突變菌株,在含有CCCP的平板培養(yǎng)后,MIC無明顯下降,外排泵表型測定陰性。頭孢哌酮舒巴坦與亞胺培南西司他丁組篩選出的耐藥突變菌株,在含有CCCP的平板上培養(yǎng)后,對環(huán)丙沙星的MIC均下降超過4倍以上,外排泵表型測定陽性。

        3 討論

        MPC和MSW理論為防治細(xì)菌耐藥提供了新的途徑。該理論認(rèn)為,當(dāng)細(xì)菌處在一種抗菌藥物的MIC和MPC濃度之間,敏感菌株會被殺滅,而耐藥菌株會被選擇性富集擴(kuò)增,導(dǎo)致細(xì)菌對該抗菌藥物產(chǎn)生耐藥。此時(shí)產(chǎn)生的耐藥菌對其他抗菌藥物是否敏感、是否有交叉耐藥的情況產(chǎn)生,文獻(xiàn)報(bào)道較少。我們選擇四種對鮑曼不動桿菌較為敏感的抗菌藥物頭孢哌酮舒巴坦、亞胺培南西司他丁、阿米卡星、環(huán)丙沙星,分別在其MSW內(nèi)的不同濃度篩選出鮑曼不動桿菌耐藥菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn),觀察鮑曼不動桿菌耐藥菌是否存在交叉耐藥現(xiàn)象,結(jié)果顯示,對于頭孢哌酮舒巴坦、亞胺培南西司他丁來說,高濃度和低濃度篩選得到的耐藥菌株都沒有發(fā)生交叉耐藥現(xiàn)象,而且對自身也是敏感的。說明從這兩種抗菌藥物MSW內(nèi)篩選出的耐藥菌株,經(jīng)過在不含抗菌藥物的平板上傳代后,其耐藥特性不能穩(wěn)定傳代,菌株由耐藥又恢復(fù)敏感。推測該耐藥菌株僅僅是外排泵的激活,而沒有發(fā)生染色體的改變,而外排泵表型測定試驗(yàn)的結(jié)果初步證實(shí)了這一推斷。有文獻(xiàn)報(bào)道,對頭孢哌酮舒巴及碳青霉烯抗菌藥物耐藥的鮑曼不動桿菌,與adeABC等外排泵系統(tǒng)的過表達(dá)相關(guān)[8,9],在沒有藥物的平板上傳代后,外排泵表型不能穩(wěn)定傳代,作用失活。這也解釋了為什么按照MSW理論,臨床上應(yīng)該產(chǎn)生較多耐頭孢哌酮舒巴坦、亞胺培南西司他丁的鮑曼不動桿菌,但實(shí)際上這種情況并沒有出現(xiàn)[10,11]。因此臨床治療鮑曼不動桿菌時(shí),單獨(dú)應(yīng)用可以選擇頭孢哌酮舒巴坦和亞胺培南西司他丁,與其他藥物聯(lián)合應(yīng)用時(shí),應(yīng)先選擇頭孢哌酮舒巴坦、亞胺培南西司他丁,因?yàn)檫@兩種藥物不會產(chǎn)生交叉耐藥,能夠取得較好的療效。

        本研究顯示,由環(huán)丙沙星和阿米卡星MSW篩選出的耐藥菌株不但對自身耐藥,而且存在交叉耐藥現(xiàn)象,但僅表現(xiàn)出對同類抗菌藥物交叉耐藥,即環(huán)丙沙星篩選出的耐藥菌株對左氧氟沙星和氧氟沙星中介或耐藥,阿米卡星篩選出的耐藥菌株對慶大霉素和奈替米星中介或耐藥。通過比較抑菌環(huán)直徑發(fā)現(xiàn),高濃度篩選出的耐藥菌株耐藥性高于低濃度篩選出菌株。同時(shí)外排泵表型測定試驗(yàn)結(jié)果為陰性,證實(shí)外排泵并沒有激活,因此推測耐藥的產(chǎn)生并非外排泵激活所致,而是由于耐藥基因的出現(xiàn),尤其是質(zhì)粒介導(dǎo)的,可以穩(wěn)定傳代,對這類藥物產(chǎn)生耐藥[12]。因此交叉耐藥只出現(xiàn)在同類藥物中,而且高濃度篩選出的耐藥菌株耐藥性更強(qiáng),其原因是由于耐藥基因的累加。因此認(rèn)為,臨床應(yīng)用環(huán)丙沙星和阿米卡星治療鮑曼不動桿菌感染時(shí),如果療效不明顯,不應(yīng)換用同類抗菌藥物繼續(xù)使用,而應(yīng)當(dāng)換成其他類別的對鮑曼不動桿菌敏感的抗菌藥物,如碳青霉烯類或β內(nèi)酰胺/β內(nèi)酰胺酶抑制劑,才能取得較好的療效。

        參考文獻(xiàn):

        [1]Zhao X,Drlica K.Restricting the selection of antibiotic-resistant mutants: a general strategy derived from fluoroquinolone studies [J].Clin Infect Dis,2001,33(3) : 147-156.

        [2]Zhou J,Dong Y,Zhao X,et al.Selection of antibiotic resistant bacterial mutants: allelic diversity among uoroquinolone-resistant mutations[J].Infect Dis,2000,182(2) : 517-525.

        [3]劉明濤,李凱述,閆鵬鵬,等.氨基糖苷類藥物在聯(lián)合用藥時(shí)縮小抗菌藥物對鮑曼不動桿菌耐藥突變選擇窗中的作用[J].中國感染與化療雜志,2014,14(4) : 334-337.

        [4]劉明濤,李凱述,李燕燕,等.環(huán)丙沙星聯(lián)合阿米卡星降低環(huán)丙沙星對鮑曼不動桿菌耐藥突變選擇窗的體內(nèi)研究[J].中國抗生素雜志,2014,39(5) : 385-389.

        [5]白國強(qiáng),李昂,段美麗.鮑曼不動桿菌的耐藥機(jī)制及抗生素治療研究進(jìn)展[J].山東醫(yī)藥,2014,54(4) : 84-90.

        [6]凌保東.鮑曼不動桿菌抗生素多重耐藥性:耐藥機(jī)制與感染治療對策[J].中國抗生素雜志,2010,35(4) : 241-254.

        [7]周云,凌保東.鮑曼不動桿菌抗生素主動外排泵轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)與外排泵抑制劑[J]中國抗生素雜志,2012,37(5) : 321-327.

        [8]孫靜娜,劉澤世,王國欣,等.多重耐藥鮑曼不動桿菌的臨床分布及其外排泵基因型分析[J].山東醫(yī)藥,2014,54(43) : 22-24.

        [9]王同慧,凌保東.碳青霉烯類耐藥鮑曼不動桿菌adeB外排泵基因表達(dá)與多重耐藥相關(guān)的研究[J].中國抗生素雜志,2013,38 (11) : 859-862.

        [10]崔俊昌,劉又寧,王睿.氟喹諾酮藥物濃度對金黃色葡萄球菌耐藥突變株選擇的影響[J].中國感染與化療雜志,2006,6(5) : 309-312.

        [11]馬慧敏,胡立芬,葉英,等.亞胺培南或美羅培南聯(lián)合利福平降低不動桿菌防耐藥突變濃度的體外研究[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2012,28(12) : 1690-1694.

        [12]Drlica K,Zhao X.Mutant selection window hypothesis updatad [J].Clin Infect Dis,2007,44(5) : 681-688.

        (收稿日期:2014-11-10)

        基金項(xiàng)目:濱州市科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2011ZC0929)。

        文章編號:1002-266X(2015)18-0048-03

        文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

        中圖分類號:R378

        doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.18.017

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